CXCR4及其配體SDF-1在甲狀腺乳頭狀癌頸淋巴結轉移中的作用

李佩瑞，孫瑞美，李曉輝，李樹欣

(1濰坊醫(yī)學院附屬醫(yī)院，山東濰坊261031;2安丘市中醫(yī)院)

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見的病理類型，較早即發(fā)生頸部淋巴結轉移，但機制目前不甚明了。近年來研究顯示，趨化因子受體4(CXCR4)及其配體基質細胞衍生因子-1(SDF-1)在腫瘤器官特異性轉移中發(fā)揮重要作用，但其在甲狀腺乳頭狀癌頸部淋巴結轉移中的作用鮮見報道。1999年9月～2010年2月，我們采用免疫組化方法檢測了53例甲狀腺乳頭狀癌患者癌組織中CXCR4蛋白及頸部淋巴結組織中SDF-1蛋白表達情況，初步探討CXCR4/SDF-1在甲狀腺乳頭狀癌頸部淋巴轉移中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 53例于我院手術治療的甲狀腺乳頭狀癌患者，均經術后病理證實診斷。均為首次發(fā)病，無遠處轉移，術前未接受過放、化療及其他抗腫瘤治療;病理檢查證實頸部淋巴結轉移22例，其中男7例，女15例;年齡37～69歲，平均51歲，AJCC分期為Ⅰ～Ⅱ期12例，Ⅲ～Ⅳ期10例;無頸淋巴結轉移31例，均為Ⅰ～Ⅱ期，其中男10例，女21例;年齡35～70歲，平均48歲。

1.2 CXCR4蛋白及SDF-1蛋白表達測定 采用免疫組化SP法分別檢測癌組織、癌旁組織CXCR4蛋白表達及頸部淋巴結組織SDF-1蛋白表達。鼠抗人CXCR4單克隆抗體、鼠抗人SDF-1單克隆抗體、SP試劑盒均購自北京中山生物技術有限公司。所有標本均經常規(guī)石蠟包埋，制備4 μm厚連續(xù)切片;二甲苯及梯度乙醇脫蠟水化，抗原修復，加30 ml/L過氧化氫溶液室溫20min;100 ml/L山羊血清室溫封閉10min;加一抗4℃冰箱中過夜;加二抗室溫30min;加SP復合物30min;二氨基聯(lián)苯胺(DAB液)顯色，蘇木素復染脫水、透明、封片，以PBS代替一抗作陰性對照。結果判定:由兩位高級病理醫(yī)師進行染色結果評定。CXCR4、SDF-l陽性細胞均為細胞質或胞膜出現淡黃至棕黃色著色顆粒，分別按染色強度及陽性細胞率計分。染色強度:陰性為0分，弱陽性為1分，陽性為2分，強陽性為3分。陽性細胞率:無陽性細胞為0分，陽性細胞率＜25%為1分，25% ～50%為2分，＞50%為3分。二者得分之和為3～6分為陽性，＜3分為陰性。分析CXCR4蛋白及SDF-1蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關系及二者表達的相關性。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS13.0軟件行統(tǒng)計學處理。相關性分析采用Spearman等級相關分析，率的檢驗采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 CXCR4蛋白表達 癌旁組織及癌組織CXCR4蛋白陽性率分別為 3.8%(2/53)、73.6%(39/53)，P＜0.01。相關性分析顯示，CXCR4蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌患者性別、年齡、腫瘤直徑無明顯相關性;與臨床分期及頸部淋巴結轉移有關，P均＜0.05，r=0.832 1、0.798 2。

2.2 SDF-1蛋白表達 有、無頸部淋巴結轉移者中，SDF-1蛋白陽性率分別為 86.4%(19/22)、5.8%(2/31)，P ＜0.01。相關性分析顯示，SDF-1 蛋白表達與甲狀腺乳頭狀癌性別、年齡、腫瘤直徑均無明顯相關性;僅與頸部淋巴結轉移有關，P＜0.05，r=0.812 1。

2.3 CXCR4蛋白及SDF-1蛋白表達的相關性CXCR4蛋白及SDF-1蛋白表達呈顯著負相關(r=－0.320 7，P= －0.017 1)。

3 討論

頸部淋巴轉移是甲狀腺乳頭狀癌早期轉移的主要途徑。近年研究發(fā)現CXCR4/SDF-1能夠控制腫瘤細胞遷移方向，進而達到器官特異性轉移的作用。Salvucci等［1］報道，CXCR4在乳腺浸潤癌中的表達(67%)遠高于導管原位癌(43%);Yoon等［2］報道，頭頸部原位移植鱗狀細胞癌小鼠癌轉移淋巴結中CXCR4表達水平明顯高于無癌轉移的淋巴結;Muller等［3］報道，乳腺癌淋巴結中的淋巴內皮細胞以及基質細胞能夠分泌SDF-1，而SDF-1可與腫瘤細胞上的CXCR4受體相結合，促使腫瘤細胞向淋巴管移動，發(fā)生淋巴結的定向轉移。

Zeelenberg等［4］認為，CXCR4 是結直腸癌細胞轉移所必須的;CXCR4只能被其惟一的配體SDF-1激活，CXCR4促使腫瘤細胞定向轉移且呈現SDF-1濃度依賴性［5，6］。本研究結果顯示，甲狀腺乳頭狀癌組織CXCR4表達呈高水平，甲狀腺乳頭狀癌頸部轉移淋巴結中SDF-l表達呈高水平，兩者呈負相關;CXCR4高表達與性別、年齡無關，與臨床分期及淋巴結轉移有關，而SDF-1高表達僅與淋巴結轉移有關。由此可以推測CXCR4、SDF-1高表達可能是判斷甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生淋巴轉移的一個早期重要指標。

Castellone等［7］發(fā)現，應用 CXCR4 抗體能夠抑制SDF-1對甲狀腺癌遷移的誘導效應。Li等［8］研究發(fā)現，CXCR4抑制劑AMD3100通過下調VEGF等的表達從而抑制SW480細胞株的侵襲與轉移能力。由此可以推斷，阻斷CXCR4/SDF-1表達有可能成為甲狀腺乳頭狀癌治療的一個新途徑。CXCR4、SDF-1抑制劑、單克隆抗體等在甲狀腺乳頭狀癌治療中的作用有待進一步研究證實。

［1］Salvucci O，Bouchard A，Baccarelli A，et al.The role of CXCR4 receptor expression in breast cancer:a large tissue microarray study［J］.Breast cancer Res Treat，2006，97(3):275-283.

［2］Yoon Y，Liang ZX，Zhang X，et al.CXC chemokine receptor-4 antagonist blocks both growth of primary tumor and metastasis of head and neck cancer in xenograft mouse models［J］.Cancer Res，2007，67(15):7518-7524.

［3］Muller A，Homey B，Soto H，et al.Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis［J］.Nature，2001，410(6824):50-56.

［4］Zeelenberg IS，Ruuls-Van Stalle L，Roos E.The chemokine receptor CXCR4 is required for outgrowth of colon carcinoma micrometastasis［J］.Cancer Res，2003，63(13):3833-3839.

［5］Libura J，Drukala J，Majka M，et al.CXCR4-SDF-1 signaling is active in rhabdomyosarcoma cells and regulates locomotion，chemotaxis and adhesion［J］.Blood，2002，100(7):2597-2606.

［6］Hwang JH，Chung HK，Kim DW，et al.CXC chemokine receptor 4 expression and function in human anaplastic thyroid cancer cells［J］.J Clin Endocrinol Metab，2003，88(1):408-416.

［7］Castellone MD，Guarino V，De Faleo V，et al.Functional expression of the CXCR4 chemokine receptor is induced by RET/PTC oncogenes and is a common event in human papillary thyroid carcinomas［J］.Oncogene，2004，23(35):5958-5967.

［8］Li JK，Yu L，Shen Y，et al.Inhibition of CXCR4 activity with AMD3100 decreases invasion of human colorectal cancer cells in vitro［J］.World J Gastroenterol，2008，14(15):2308-2313.