HPLC法測(cè)定返魂草中4-羥基苯乙酸的含量

苗艷平，苗艷波，張憲平

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130021；3.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 長(zhǎng)春 130033)

返魂草為菊科千里光屬植物SeneciocannabifoliusLess.的干燥地上部分[1]。包括單葉返魂草SeneciocannahifoliusLess.Var.integrifolius(Koidz.)Kitag.和寬葉返魂草(又名麻葉千里光，SeneciocannabifoliusLess.)。具有清熱解毒，散血消腫，下氣通經(jīng)，清熱祛痰，鎮(zhèn)咳平喘。用于瘀血腫痛，跌打損傷，肺內(nèi)感染，慢性支氣管炎，喘息性支氣管炎，急性呼吸道感染等癥[2]。為更好的控制返魂草藥材質(zhì)量，本文采用4-羥基苯乙酸作為測(cè)定對(duì)象，建立了用HPLC測(cè)定返魂草[3-5]中4-羥基苯乙酸的方法。

1 材料

島津LC-2010CHT全自動(dòng)高效液相色譜儀，CLASS-VP色譜工作站；4-羥基苯乙酸(C8H8O3)對(duì)照品(批號(hào)：140736-200501；含量：98.5%；規(guī)格:約10 mg/支)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇為優(yōu)級(jí)純；水為自制超純水；其他均為分析純。樣品提供：吉林敖東力源藥業(yè)股份有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 色譜柱：鉆石C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸(14∶86∶1)混合液；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為224 nm；理論塔板數(shù)按4-羥基苯乙酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于8 000。

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取4-羥基苯乙酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品中粉約5 g，精密稱定，精密加水100 mL，稱定重量，加熱回流提取3 h,放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液15 mL,濃縮近干，殘?jiān)蛹状佳心ナ谷芙猓D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限及定量限 取4-羥基苯乙酸對(duì)照品溶液(43.14 μg/mL)。分別精密吸取1、5、10、15、20 μL進(jìn)樣，結(jié)果進(jìn)樣量在43.14～862.8 μg范圍內(nèi),回歸方程為Y=6 266.7X+1 369.5，r=0.999 9。檢測(cè)限為0.4 μg；定量限為1.3 μg。

2.3 儀器精密度和樣品穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)

2.3.1 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一樣品溶液10 μL，注入HPLC儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定對(duì)照品溶液峰面積積分值，結(jié)果RSD=0.8%。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取同一供試品溶液在0、2、4、7、12、21 h進(jìn)樣10 μL，以4-羥基苯乙酸峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差反映樣品的穩(wěn)定性，結(jié)果RSD=1.0%。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品依含量測(cè)定項(xiàng)下方法獨(dú)立制備6分供試品，分別依法測(cè)定，結(jié)果RSD=1.4%。

2.4 準(zhǔn)確性試驗(yàn) 取樣品(0.0225%)適量，研細(xì)，精密加入4-羥基苯乙酸對(duì)照品溶液4 mL，精密加水50 mL，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，進(jìn)樣10 μL，共6分，進(jìn)行回收率試驗(yàn)。

2.5 含量測(cè)定 取樣品，按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液后，精密吸取供試品溶液10 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算返魂草中4-羥基苯乙酸的含量，結(jié)果見表1。

表1 6批樣品4-羥基苯乙酸含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本文為首次采用HPLC法以4-羥基苯乙酸為定量指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定。根據(jù)4-羥基苯乙酸對(duì)照品的流動(dòng)相溶液的紫外吸收光譜掃描圖，顯示在278 nm和224 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，但在224 nm波長(zhǎng)處響應(yīng)值明顯高于278 nm波長(zhǎng)處響應(yīng)值，最終確定224 nm為本法的測(cè)定波長(zhǎng)。對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了篩選。1)甲醇-水-冰醋酸(14∶86∶1)混合液，2)甲醇-1%冰醋酸(30∶70)混合液。方法:分離效果較好，保留時(shí)間適中，故選擇其作為本文方法。專屬性:按正文條件采用二極管陣列檢測(cè)器檢查4-羥基苯乙酸峰純度，結(jié)果表明峰純度較好,無(wú)雜質(zhì)峰包埋。

[1]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1991:附錄.

[2]嚴(yán)仲鎧,李萬(wàn)林.中國(guó)長(zhǎng)白山藥用植物彩色圖志[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1997:78.

[3]馬鴻雁,楊莉.單麻葉千里光中的一個(gè)新化學(xué)成分[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2008,43(6):626-629.

[4]吳斌,吳立軍.麻葉千里光抗菌化學(xué)成分的研究(Ⅰ)[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2004,21(5):341-344.

[5]吳斌,吳立軍.麻葉千里光抗菌化學(xué)成分的研究(Ⅱ)[J].中草藥,2005,36(10):1447-1450.