高效液相法測定琦紅丸中酸式及內酯洛伐他汀含量

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(1.吉林省生物研究所，吉林 長春 130012；2.長春金賽藥業(yè)股份有限公司，吉林 長春 130012)

琦紅丸是吉林省生物研究所開發(fā)的由功能性紅曲、荷葉、黑木耳等制成的具有降血脂作用的保健食品，功能性紅曲所含有的洛伐他汀是體內膽固醇合成酶Hmg-COA還原酶的專一性抑制劑，能夠有效減少或阻斷內源性膽固醇的合成，達到降血脂作用。其存在形式分酸式和內酯2種,酸式結構的洛伐他汀空間結構與體內Hmg-COA更為接近，無需水解，其活性較內酯式高約一倍。而內酯結構的洛伐他汀本身無生物活性，但在人體內可以被水解成酸式結構而具有活性。有關文獻[1-3]對洛伐他汀含量測定報道只測定內酯洛伐他汀，鑒于洛伐他汀在功能性紅曲米中的存在特點,本文采用酸式和內酯2種形式的洛伐他汀含量之和作為制定琦紅丸中洛伐他汀含量測定標準的依據，更為合理、科學，能夠較好地控制產品的質量。

1 儀器與試劑

安捷倫1100高效液相色譜儀，安捷倫自動進樣器，低速離心機，超聲波清洗器；甲醇為色譜純，無水乙醇、磷酸、氫氧化鈉等試劑均為分析純；洛伐他汀(內酯)標準品(批號：100600-200502,供含量測定用)購自中國藥品生物制品鑒定所，規(guī)格:100 mg；琦紅丸樣品由吉林省生物研究所提供。

2 適應性試驗

色譜柱：XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇∶0.12%磷酸溶液(V/V)=77∶23；柱溫：24 ℃；流速：1 mL/min；檢測波長238 nm；進樣量：20 μL。規(guī)定其理論塔板數按洛伐他汀(內酯)峰面積計算，應不低于2 000。

3 洛伐他汀標準品溶液制備

精密稱取洛伐他汀(內酯)標準品40.0 mg，以75%乙醇定容100 mL。此溶液濃度為400 μg/mL。

4 操作方法

4.1 洛伐他汀(內酯)標準工作液制備 準確量取洛伐他汀標準品溶液1 mL，以75%乙醇定容至10 mL。此溶液濃度為40 μg/mL。

4.2 供試品溶液制備 取20袋琦紅丸，粉成細粉，混勻，取粉末約0.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入30 mL 75%乙醇(體積分數)，室溫下超聲50 min，加75%乙醇至接近刻度,再超聲10 min，之后冷卻至室溫，用75%乙醇定容至50 mL，混勻。以3 500 r/min的轉速離心10 min，取上清液，0.45 μm微孔濾膜過濾，濾液待用。

4.3 定性用酸式洛伐他汀的制備 稱取洛伐他汀(內酯)標準品4 mg，以0.2 mol/L氫氧化鈉溶液定容至100 mL，在50 ℃條件下超聲轉化1 h，放置到室溫后再放置1 h。

4.4 供試品中洛伐他汀含量測定 取洛伐他汀內酯標準工作液、洛伐他汀酸式對照品溶液、供試品溶液各20 μL分別注入高效液相色譜儀，以供試品中洛伐他汀酸式峰面積與內酯峰面積之和與洛伐他汀內酯標準品峰面積之比計算琦紅丸中洛伐他汀的含量。洛伐他汀(內酯)色譜圖見圖1；洛伐他汀(酸式)色譜圖見圖2；供試品色譜圖見圖3。

圖1 洛伐他汀(內酯)標準品色譜圖

圖2 洛伐他汀(酸式)標準品色譜圖

圖3 琦紅丸供試品色譜圖

5 方法學考察

5.1 標準曲線的制備 分別精密吸取洛伐他汀標準品溶液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 mL置10 mL容量瓶中，加75%乙醇定容至刻度，0.45 μm微孔濾膜過濾，分別注入液相色譜儀。測定峰面積，以峰面積為縱坐標，以洛伐他汀(內酯)含量為橫坐標，繪制標準曲線。測得回歸方程為Y=67.471 14X-8.914 04(r=0.999 9)。結果表明洛伐他汀(內酯)在8.44～253.2 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

5.2 空白試驗 取不含功能性紅曲的陰性對照樣品，按上述方法檢測，結果陰性對照色譜中，在洛伐他汀酸式與內酯的保留時間處，無干擾峰出現。

5.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液20 μL，分別在0、2、4、6、8、10 h照上述方法測定，以洛伐他汀酸式與內酯峰面積之和計，結果表明供試品在10 h內，未發(fā)生明顯變化。峰面積的RSD值為0.23%。

5.4 精密度試驗 取同一標準品溶液20 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積值，結果，RSD=0.11%。

5.5 重復性試驗 取同一批號供試品(批號：20100801)6分，按4.2項下方法制備供試品溶液，分別按上述方法測定含量，結果RSD=0.47%。

5.6 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品(批號：20100801)6分，分別加入等量的內酯洛伐他汀標準品。按照上述方法進行測定，計算出回收率，測定結果平均回收率=99.25%，RSD=1.42%。

5.7 3批樣品的含量測定 批號20100801、20100802、20100803的含量(mg/100 g)分別為350、349、352。

6 結論

通過比較紅曲原料、按配方比例混合的樣品及生產的3批樣品含量測定結果發(fā)現，生產過程酸式洛伐他汀部分脫水轉成內酯結構，而且洛伐他汀含量有少量下降現象，可能是生產過程中受熱所造成的，但不影響產品質量及功效。總之，本方法操作簡便，結果準確，重現性好，用于琦紅丸中洛伐他汀的含量測定，能夠很好的控制該產品的質量。

[1]廖一民,向世學.高效液相同時測定保健食品中兩種結果形式洛伐他汀的含量[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,16(3):286-287.

[2]宋洪濤.HPLC法對不同來源紅曲中洛伐他汀的定量分析[J].中草藥,1999,30(2):49.

[3]文鏡,常平.紅曲中內酯型Lovastatin的HPLC測定方法研究[J].食品科學,2000(12):56.