活血化瘀藥對乙酸致胃潰瘍大鼠表皮生長因子及其受體表達的影響*

河北省石家莊市中醫院 白建樂 張書金 劉建平 楊世鋒 （石家莊 050051）

胃潰瘍 （GU）是臨床常見消化系統疾病,胃潰瘍活動期被WHO列為癌前高危狀態,嚴重威脅人類健康。目前治療胃潰瘍的藥物很多,且近期療效都較滿意,但停藥后仍難免復發,長期服藥又有諸多不良反應。筆者在臨床上以活血化瘀為法,組成愈瘍煎,治療胃潰瘍取得了滿意療效,復發率低。本文主要通過活血化瘀藥愈瘍煎對乙酸致胃潰瘍大鼠 EGF、EGFR的影響,進一步探討其治療胃潰瘍的內在機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 32只 wistar大鼠,雌雄各半,體重 180～250g,購自河北醫科大學實驗動物中心,合格證編號:71043。喂以固定的平衡飼料。

1.2 藥物及試劑

1.2.1 活血化瘀藥 （愈瘍煎）:虎杖 12 g,當歸、川芎各 9 g,白芍20g,元胡 12g,丹參 20g,三七3 g（沖服）,甘草 5 g。藥材由石家莊樂仁堂藥店提供,經生藥學鑒定,常規水煎 2次,濃縮至 100%,使每毫升含生藥 1g。

1.2.2 雷尼替丁膠囊:每粒 150mg,江西匯仁制藥有限公司出品,批準文號:國藥準字 H 36021340。

1.2.3 表皮生長因子 （EGF）放免試劑盒:中國原子能科學院提供。

1.3 主要儀器 低溫離心機 LDR4-8.4C,北京醫用離心機廠;液體閃爍計數器 FJ-2107G,同善二六二廠。

1.4 方法

1.4.1 模型復制:實驗性乙酸致大鼠胃潰瘍模型參照張氏[1]的方法并加以改進。

1.4.2 分組及喂藥:大鼠隨機分為 4組:空白組 （8只,為非造模大鼠,用生理鹽水灌胃）、模型組 （8只,用與中藥等容積的生理鹽水灌胃）、活血化瘀組 （8只,用愈瘍煎煎劑灌胃）、雷尼替丁組（8只,用生理鹽水溶解的雷尼替丁膠囊混懸液灌胃）。用藥劑量換算按體重計算 dB=dA×KB/KA。各組大鼠均在造模 3天后灌胃,每天 1次,0.5 m L/100g,連續灌胃 14天。

1.4.3 標本收集及確定潰瘍損傷指數:將大鼠的胃取出,自然展開,濾紙汲干,用游標卡尺測量潰瘍的長度和寬度,長度指潰瘍的最大直徑,寬度為與直徑垂直的最寬距離,潰瘍損傷指數用潰瘍的長 ×寬表示。剪取含潰瘍邊緣約 3mm組織在內的潰瘍組織塊,迅速置于 10%福爾馬林溶液中固定 24h以上。

1.4.4 血清中 EGF的含量測定:采用RIA法測定。

1.4.5 胃組織中 EGF的含量測定:將胃組織研成 10%生理鹽水勻漿液。計算:組織 EGF含量 （μg/gp rot）=測定結果 ÷4÷組織蛋白定量 （g/L）÷勻漿濃度。

1.4.6 EGFR的檢測:EGFR的表達采用免疫組織化學SP法。圖像分析:經高清晰度病理圖文分析系統處理,每組每張切片隨機選取 5個視野作圖像分析,記錄積分光密度值及陽性細胞占總面積的百分比。

2 結果

2.1 潰瘍損傷指數 與模型組相比,雷尼替丁組、活血化瘀組大鼠潰瘍損傷指數均明顯降低 （P＜0.05）;雷尼替丁組與活血化瘀組大鼠潰瘍損傷指數差異無顯著性 （P＞0.05）。結果見表 1。

表1 活血化瘀中藥對大鼠胃潰瘍損傷指數（UI）的影響 （±s）

表1 活血化瘀中藥對大鼠胃潰瘍損傷指數（UI）的影響 （±s）

注:與模型組比較,△P＜0.05

組別 n 潰瘍指數模型組 8 4.39±3.51雷尼替丁組 8 1.88±1.80△活血化瘀組 8 2.38±1.78△

2.2 胃組織 EGF含量的變化 與空白組相比,模型組、雷尼替丁組、活血化瘀組 EGF含量均明顯增高 （P＜0.05,P＜0.01）;與模型組相比,雷尼替丁組、活血化瘀組EGF含量均明顯增高 （P＜0.01）;雷尼替丁組與活血化瘀組 EGF含量差異無顯著性 （P＞0.05）。結果見表 2。

2.3 血清 EGF含量的變化 與空白組相比,模型組、雷尼替丁組、活血化瘀組EGF含量均明顯增高 （P＜0.05,P＜0.01）;與模型組相比,活血化瘀組 EGF含量明顯增高（P＜0.05）,雷尼替丁組 EGF含量增高沒有顯著性 （P＞0.05）;雷尼替丁組與活血化瘀組 EGF含量差異無顯著性 （P＞0.05）。結果見表 2。

表2 各組大鼠胃組織和血清 EGF的含量 （±s,ng/g）

表2 各組大鼠胃組織和血清 EGF的含量 （±s,ng/g）

注:與空白組比較,*P＜0.05,**P＜0.01;與模型組比較,△P＜0.05,△△P＜0.01

組別 n 組織EGF 血清EGF空白組 8 22.99±4.67 0.55±0.08模型組 8 33.34±8.47* 0.68±0.16*雷尼替丁組 8 49.27±9.29**△△ 0.71±0.20*活血化瘀組 8 49.69±13.50**△△ 0.82±0.10**△

2.4 EGFR的表達 各組大鼠胃組織中均有 EGFR的表達,表達部位均以胃黏膜的壁細胞、頸黏液細胞為主。EGFR定位于細胞漿及細胞膜,在胃腺頸部、基底部都有表達。經高清晰度病理圖文分析系統測定EGFR陽性細胞的平均面積百分比和平均積分光密度,結果見表3。可見,與空白組相比,模型組、雷尼替丁組、活血化瘀組 EGFR的面積百分比明顯增高 （P＜0.01）;與模型組相比,雷尼替丁組、活血化瘀組 EGFR的面積百分比明顯增高 （P＜0.05）;雷尼替丁組與活血化瘀組EGFR的面積百分比差異無顯著性 （P＞0.05）。與空白組相比,模型組、雷尼替丁組、活血化瘀組 EGFR的積分光密度明顯增高 （P＜0.05,P＜0.01）;與模型組相比,活血化瘀組 EGFR的積分光密度明顯增高 （P＜0.05）;雷尼替丁組與活血化瘀組EGFR的積分光密度差異無顯著性 （P＞0.05）。

表3 胃組織EGFR免疫組織化學表達

3 討論

胃潰瘍屬于中醫胃脘痛之范疇。筆者認為其發病機理即所謂 “不通則痛”,氣滯血瘀是共同病機,胃絡損傷為基本病變。基于此,筆者在臨床上以活血化瘀為治法組成愈瘍煎,治療胃潰瘍取得了滿意療效,復發率低。本研究也提示愈瘍煎對乙酸致胃潰瘍大鼠的胃潰瘍損傷指數 （UI）有明顯改善,作用與雷尼替丁相似。

隨著潰瘍愈合質量 （QOUH）的概念提出,認為潰瘍愈合不僅需要黏膜缺失的充填和修復,而且需要黏膜下組織結構的修復和改建,更要重視潰瘍局部防御功能的恢復。并認為 QOUH低下是消化性潰瘍治愈后復發的病理學基礎。胃黏膜損傷的發病機制是一個復雜的病理、生理過程,概括地說,即攻擊因子對胃黏膜破壞作用和胃黏膜防御機制的保護作用平衡失調所致。尤以防御機制重要。EGF在保護胃黏膜免受損傷因子破壞、維持胃黏膜完整性起到非常重要的作用。[2]這種作用主要依賴于 EGF和 EGFR的作用。[3]EGFR是一帶有酪氨酸激酶活性的跨膜黏蛋白,對EGF有高度的特異性和親和力。胃黏膜受到損傷時 （如潰瘍）其黏膜層 EGFR表達大量增加,[4]EGFR的增加除了介導黏膜上皮細胞的分裂、修復外,還介導減少胃酸的分泌。[5]因此,EGFR對于胃黏膜保護作用已逐漸被人們所認識。

本研究結果顯示,模型組大鼠胃組織和血清中 EGF均高于空白組,說明在潰瘍自愈過程中 EGF起到一定作用。雷尼替丁組、活血化瘀組胃組織和血清中EGF含量高于模型組,說明藥物可能通過顯著增加EGF的含量加速了潰瘍的愈合,其中雷尼替丁主要通過增加組織中的 EGF含量來發揮作用,而活血化瘀中藥即可通過增加組織中的 EGF含量,又能通過增加血液中的 EGF含量來發揮作用。免疫組織化學顯示,正常大鼠胃組織中有 EGFR的表達,呈弱陽性;模型組、雷尼替丁組、活血化瘀組 EGFR的表達均強于空白組,并且雷尼替丁組、活血化瘀組的表達強于模型組;雷尼替丁組、活血化瘀組EGFR的面積百分比沒有差異,積分光密度活血化瘀組強于雷尼替丁組,說明活血化瘀組 EGFR的表達強度略高于雷尼替丁組。與血清中 EGF含量比較,可見組織中EGFR的表達與血清中 EGF含量具有同步性。進一步說明EGF可能是通過與EGFR結合后才具有促進潰瘍愈合的作用。EGFR的表達部位以胃黏膜的壁細胞、頸黏液細胞為主。EGFR定位于細胞漿及細胞膜,在胃腺頸部、基底部都有表達。與一般報道說EGFR只位于胃腸上皮的基底側膜不盡相同。可見,活血化瘀中藥發揮作用的途徑比較廣泛,其胃組織和血清中的 EGF都可能通過與其受體 EGFR結合而起到促進潰瘍愈合的作用,這是愈瘍煎治療胃潰瘍療效滿意、復發率低的機制之一。

[1] 張叔行,陳玲,陳東明,等.大鼠胃潰瘍模型的制作方法[J].解剖學雜志,1989,10（2）:158-159

[2] 譚永港,舒晴,邱猛進,等 .表皮生長因子及其受體 mRNA在胃潰瘍發生與愈合過程中的表達 [J].世界華人消化雜志,2005,13（14）:1 768-1 770

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[4] Tarnawski A,Stachura J,Durbin T,et al.Increased expression of epidermal growth factorreceptor during ulcerhealing in rats[J].Gastroenterology,1992,1（2）20:695

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（2011-04-26 收稿）