昆仙膠囊對狼瘡鼠外周血 IL-10、TNF-α表達的影響*

廣東省深圳市第四人民醫院香密湖風濕病分院

高建華 張劍勇△ 何偉珍 黃 華△ 邱 俠△ 鐘 力△ 葉志中 （深圳 518040）

系統性紅斑狼瘡 （SLE）是以多克隆B細胞高度增生活化,免疫球蛋白增多、多種自身抗體的生成及諸多炎癥因子高表達、細胞內外免疫反應異常為其病理特征。其發病機制尚不明確,現代醫學多采用激素、免疫抑制劑等治療,效果顯著,可毒副作用較大,故中醫中藥的應用得到廣泛重視。筆者研究發現:昆仙膠囊在治療 SLE、LN的臨床療效中效果較佳,但其作用機制尚未明了,本研究正是通過觀察昆仙膠囊對其外周血中白介素-10（IL-10）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達的影響來探討昆仙膠囊治療 SLE的可能機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 純系昆明小鼠 60只,雌性,8周齡,平均體重 （21±2.4）g,由廣東省醫學實驗動物中心提供,SPF級飼養,實驗動物合格證號:SCXK（粵）2008-0002粵監證字 2008A 049,小鼠飼養在室溫 （22±2）℃、濕度55%～70%的實驗室中,自由飲水、進食,自然晝夜非直接光照。

1.2 實驗藥品和試劑 醋酸潑尼松片,天津力生制藥股份有限公司生產,批號:H 12020123;昆仙膠囊,廣州陳李濟藥廠提供,每克膠囊粉末相當于生藥 33.33 g,批號:TX 1511;TNF-α、IL-10 ELISA試劑盒 （美國 Santa Cruz公司）,550型酶標儀 （Bio-Rad公司）,低溫離心機 （Sigma公司）。

1.3 方法

1.3.1 造模、分組及方法:參照 WHO免疫研究教學中心報道造模方法,腹腔皮下注射 LPS,按 LPS 2.5mg/kg?只-1的劑量給藥造模。將小鼠隨機分為 5組 （空白組、模型組、潑尼松組、昆仙膠囊組、聯合用藥組）,每組 12只,除空白組不造模外,各組造模同時開始灌胃給藥。潑尼松組給予 10mg/kg?d-1（10倍于人類用量）,昆仙膠囊組給予 10g/kg?d-1（相當于人類用量的 10倍）,聯合用藥組給予潑尼松 5mg/kg?d-1、昆仙膠囊 5 g/kg?d-1。空白組、模型組給予生理鹽水 0.5m L/d灌胃。每日上午定時灌胃給藥,連續給藥 3周。末次給藥后 6 h,小鼠摘眼球取血,靜置 30m in,以3 000 r/m in離心 10 min,吸取上層血清,按組編號,置于-20℃保存,統一測定指標。

1.3.2 檢測項目及方法:ELISA法檢測血清中 IL-10、TNF-α水平,參照ELISA試劑盒說明書,用酶標儀測定 OD值。

1.4 統計學處理 采用SPSS15.0統計軟件包進行統計分析。計量資料均用 （±s）表示,多樣本均數比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用t檢驗。

2 結果

各組小鼠 IL-10、TNF-α水平的比較,見表 1。模型組IL-10、TNF-α水平明顯高于空白組 （P＜0.05）,提示造模成功;各藥物治療組 IL-10、TNF-α水平與模型組比較為低,差異有顯著性 （P＜0.05）;昆仙膠囊組IL-10、TNF-α水平與潑尼松組比較,差異無顯著性 （P＞0.05）;聯合用藥組 IL-10、TNF-α水平較昆仙膠囊組、潑尼松組降低,差異有顯著性 （P＜0.05）。

表1 昆仙膠囊對狼瘡樣小鼠 IL-10、TNF-α產生的影響 （±s）

表1 昆仙膠囊對狼瘡樣小鼠 IL-10、TNF-α產生的影響 （±s）

注:與空白對照組比較,*P＜0.05;與模型對照組比較,△P＜0.05;與潑尼松組比較,□P＞0.05;與聯合用藥組比較,#P＜0.05

組別 n IL-10（pg/mL） TNF-α（pg/mL）空白組 12 30.12±2.12 56.5±6.3模型組 12 135.23±16.35* 167.0±25.9*潑尼松組 12 80.11±6.21△# 122.0±21.2△#昆仙膠囊組 12 78.12±6.13△#□ 120.0±10.9△#□聯合用藥組 12 55.36±5.78△ 80.2±10.8△

3 討論

昆仙膠囊是雷公藤多甙片升級換代產 品,主要是克服昆明山海棠的毒副作用。以昆明山海棠為主藥,輔以淫羊藿等中藥,具有祛風除濕、活血通絡、護腎等功效,有類似激素的治療作用,但副作用較小。臨床運用治療 SLE、LN效果較好。該動物實驗采用 LPS誘導 SLE的小鼠模型,通過空白、模型組之間 IL-10、TNF-α之間的比較,差異有顯著性,且國內相關研究結果[1]表明該模型小鼠病理學結果與 SLE臨床病變基本相符,這為狼瘡鼠模型成功建立提供可靠依據。研究結果顯示,昆仙膠囊組與潑尼松組對狼瘡鼠的TNF-a、IL-10抑制作用相當,聯合用藥組較單一使用昆仙膠囊、潑尼松對上述指標的抑制作用更為明顯,由此推測,昆仙膠囊能抑制炎性細胞因子,具有抗炎鎮痛作用。

TNF-α是一種單核因子,主要由活化的單核細胞及巨噬細胞合成和分泌,是一種多功能細胞因子,同時參與天然免疫和獲得性免疫,是特異性免疫應答和炎癥反應間的重要連接紐帶。[2]

IL-10主要由 Th2細胞產生,是一種重要的B細胞刺激因子,能夠抑制巨噬細胞激活及其抗原呈遞功能,從而直接或間接抑制 T淋巴細胞功能及誘導T細胞的無反應性,從而減弱其對 B淋巴細胞的調理作用,刺激 SLE患者外周血 B細胞產生抗 DNA自身抗體。[3-4]1996年 Hagiwara等[5]報道 IL-10可通過促進Fas/FasL表達影響 T細胞的凋亡,使之發生活化誘導的細胞死亡。TNF-α主要由單核巨噬細胞合成和分泌,并通過與其相應受體結合,參與自身免疫的炎癥過程,是介導自身免疫反應的重要效應因子之一,[6-7]TNF-α有助于自身細胞表面主要組織相容性復合體（MHC）抗原表達使自身細胞與激活T淋巴細胞相互反應,這為 SLE疾病發生創造了先決條件。

從本課題組的實驗研究可見,昆仙膠囊療效主要體現在免疫調節、抗炎方面。由此推論:免疫抑制、調節功能可能是昆仙膠囊治療 SLE的重要機制之一。實驗結果表明,昆仙膠囊具有一定的免疫抑制劑作用,在SLE的治療中有一定療效,但其確切作用機制有待于進一步深入研究。

[1] 周素榮,周翠英,王福勝,等.中藥聯合環磷酰胺治療SLE模型鼠的實驗研究 [J].中國皮膚性病學雜志,2008,22（10）:594-596

[2] 周光炎.免疫學原理 [M].上海:上海科學技術文獻出版社,2000.86

[3] Lopez P,Gomez J,Prado C,et al.Influence of functional interleukin10/tumor necrosis factor-alpha polymorphisms on interferon-alpha,IL-10,and regulatory T cell population in patients with system ic lupusery-thematosus receiving antimalarial treatment[J].JRheumatol,2008,35（8）:1 559-1 566

[4] Chun H Y,Chung JW,Kim H A,et al.Cytokine IL-6 and IL-10 as biomarkers in system ic lupus erythematosus[J].J Clin Immunol,2007,27（5）:461-466

[5] Hagiwara E,GourleyM F,Lee S,et al.Disease severity in patients with systemic lupus erythematosus correlates with an increased ratio of interleukin-10:interferon-gamma-secreting cells in the peripheral blood[J].Arthritis Rheum,1996,39（3）:379–385

[6] AringerM,Smolen JS.The role of tumor necrosis factor-alpha in system ic lupus erythematosus[J].Arthritis Res Ther,2008,10（1）:202

[7] 劉劍平,盧來春 .青藤堿對狼瘡鼠外周血 IL-10、TNF-α、抗dsDNA抗體表達的影響 [J].第三軍醫大學學報,2010,32（8）:856-858

（2011-03-18 收稿）