細葉黃皮樹莖皮乙醇提取物\\揮發油的抑菌作用

摘要：采用紙片擴散法進行抑菌試驗以探討細葉黃皮［Ｃｌａｕｓｅｎａ ａｎｉｓｕｍ－ｏｌｅｎｓ（Ｂｌａｎｃｏ．）Ｍｅｒｒ］莖皮乙醇提取物及其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇部位的抑菌作用。結果表明，石油醚、氯仿、乙酸乙酯部位有抑菌作用，氯仿部位對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、殺螟桿菌、大腸桿菌及枯草桿菌抑菌作用最強，最小抑菌濃度為０．０２６~０．１０３ ｍｇ／片；石油醚、乙酸乙酯部位最小抑菌濃度均為０．０２６~０．４１２ ｍｇ／片；揮發油對５種供試菌均有抑制作用，最小抑菌濃度為０．４１２~０．８２３ ｍｇ／片。

關鍵詞：細葉黃皮［Ｃｌａｕｓｅｎａ ａｎｉｓｕｍ－ｏｌｅｎｓ（Ｂｌａｎｃｏ．）Ｍｅｒｒ］莖皮；提取物；最小抑菌濃度

中圖分類號：Ｓ４８２．２＋９２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）13－2668-03

Antimicrobial Activity of Ethanol Extracts and Volatile Oil from the Bark of

Clausena anisum-olens

ＳＵ Ｘｉｕ－ｆａｎｇ，ＷＥＩ Ｌｉａｎｇ－ｘｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｌｉ－ｊｕａｎ，ＦＥＮＧ Ｐｅｉ－ｚｈｅｎ

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｇｕａｎｇxｉ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｔｙ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ， Ｃｏｎｇｚｕｏ ５３２２００，Guangxi， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Bacteriostasis test ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ， ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ， ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ， ｎ－ｂｕｔａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｒｋ ｆｒｏｍ Ｃｌａｕｓｅｎａ ａｎｉｓｕｍ－ｏｌｅｎｓ ｂｙ ｄｉｓｋ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ， ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ａｎｄ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｈａd ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｈａd ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ， Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ， Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ， Ｂ. ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｗｉｔｈ a ｍｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ （ＭＩＣ） of ０．０２６~０．１０３ ｍｇ／ｐｉｅｃｅ， ａｎｄ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｓ ａｎｄ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｓｈｏｗｅｄ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈ the ＭＩＣ of ０．０２６~０．４１２ ｍｇ／ｐｉｅｃｅ． Ｔｈｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｈａｄ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｆｉｖｅ ｔｅｓｔｅｄ ｂａｃｉｌｕｓ ｗｉｔｈ the ＭＩＣ of ０．４１２~０．８２３ ｍｇ／ｐｉｅｃｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃｌａｕｓｅｎａ ａｎｉｓｕｍ－ｏｌｅｎｓ ｂａｒｋ； extracts； minimal inhibitory concentration（MIC）

細葉黃皮［Ｃｌａｕｓｅｎａ ａｎｉｓｕｍ－ｏｌｅｎｓ（Ｂｌａｎｃｏ．）Ｍｅｒｒ］為蕓香科黃皮屬植物，多年生常綠大灌木或小喬木，主產于我國廣西西南部、云南南部、廣東新會及越南北部和菲律賓［１，２］，又稱為雞皮果、山黃皮。細葉黃皮為珍稀佳果，果皮、果肉、莖皮均可食用，含有多種氨基酸、維生素及礦物質［２］。在藥用方面，果實可消積去滯、祛痰化氣、疏通腸胃。枝葉可入藥，有引氣、健胃、止痛、治跌打刀傷、消風腫、去疳積等功效［３］。細葉黃皮是崇左市大力推廣種植的經濟樹木，市內有多家細葉黃皮果加工廠，近幾年來，細葉黃皮產業已成為中越邊民增收的主要渠道之一。

目前，有關細葉黃皮的化學成分研究較少，但已有報道，汪云松等［４］從細葉黃皮中提取分離了５個化合物，分別為４－（３－ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ－４－Ｏ－β－Ｄ－ ｇｌｕｃｏｐｙａｎｏｓｉｄｅ）－２－ｂｕｔａｎｏｎｅ，３－（４－ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）－２－ｐｒｏｐｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，３－（３－ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ－４－ｈｙｄｒｏｘｙ）－２－ｐｒｏｐｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ，３－（３，４－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）－２－ｐｒｏｐｅｎｏｉｃ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ，３－ｈｙｄｒｏｘｙ－４－ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ。Ｗａｎｇ等［５］從細葉黃皮中提取到７個化合物，分別為ａｎｉｓｕｍａｒｉｎ， ｉｓｏｓｃｏｐｏｌｅｔｉｎ， ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ，ａｎｉｓｏｃｏｕｍａｒｉｎ Ｈ，ｃａｐｎｏｌａｃｔｏｎｅ，ａｕｒａｐｔｅｎ和７－［（Ｅ）－７′－ｈｙｄｒｏｘｙ－３′，７′－ｄｉｍｅｔｈｙｌｏｃｔａ－２＇，５－ｄｉｅｎｙｌｏｘｙ］－ｃｏｕｍａｒ。蘇秀芳等［６，７］研究表明，細葉黃皮各個部分都含有豐富的揮發油，其主要成分為芳香類、烯類及酸類。有關細葉黃皮的抑菌活性研究鮮見報道，為了綜合利用細葉黃皮資源，提高中越邊民的收入，本研究對細葉黃皮莖皮提取物的抑菌效果進行了實驗觀察，現將結果報道如下。

１材料和方法

１．１試驗儀器

ＬＤＺＸ－５０ＫＢＳ型立式電熱壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫療器械廠）；ＺＨＪＨ－Ｃ１２１４Ｂ型垂直流超凈工作臺（上海智城分析儀器制造有限公司）； ＧＮＰ－９２７０型隔水式恒溫培養箱（上海精寄宏實驗設備有限公司）；ＳＰＨ－２１１Ｂ搖床培養箱（上海世平實驗設備有限公司）。

１．２菌種

金黃色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ）、綠膿桿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ） 菌種購于廣東微生物研究所；枯草桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、大腸桿菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、殺螟桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）菌種由廣西大學農學院提供。

１．３植物材料

細葉黃皮莖皮于２０１０年７月采摘于龍州校縣響水鎮，由廣西民族師范學院化學與生物工程系黃秋嬋副教授鑒定為細葉黃皮（Ｃｌａｕｓｅｎａ ａｎｉｓｕｍ－ｏｌｅｎｓ）。

１．4方法

１．4．１細葉黃皮莖皮提取物的提取

１）細葉黃皮莖皮乙醇及各部分提取物的提取。細葉黃皮莖皮陰干，粉碎，用體積分數為７５％的乙醇浸泡３ ｄ，減壓蒸餾至浸膏狀，乙醇浸膏一部分留做抑菌實驗，一部分依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇萃取，得到各部位浸膏，置４ ℃冰箱保存備用。

２）細葉黃皮莖皮揮發油的提取。稱取切碎的新鮮細葉黃皮樹莖皮５００ ｇ，進行水蒸氣蒸餾，餾出液用５０ ｍＬ石油醚萃取３次，合并萃取液，加入無水Ｎａ２ＳＯ４靜置１２ ｈ，回收溶劑得揮發油，揮發盡溶劑后得乳黃色油狀物，置４ ℃冰箱保存備用。

１．4．２抑菌試驗

１）細菌懸液的制備。分別用無菌棉簽蘸取供試菌接種于１０ ｍＬ牛肉膏蛋白胨液體培養基，于３７ ℃下搖床培養１８ ｈ，進行菌種活化。活化后的細菌做１０倍系列稀釋，并活菌計數。用無菌水將細菌分別配制成約１０６ ＣＦＵ／ｍＬ濃度的細胞懸浮液。

２）抑菌圈的測定。小濾紙片（直徑為６ ｍｍ）放入干燥培養皿中，在１２０ ℃下蒸氣滅菌２０ ｍｉｎ。

把培養基倒入培養皿中，待培養基自然冷卻凝固后，用移液槍從每種菌種吸取１００ μＬ，放入到相應的培養皿中，然后均勻涂布。將試藥（以哈藥集團制藥總廠生產的頭孢拉定為對照藥劑）浸泡的紙片置于平板內，于３７ ℃左右恒溫培養，１８～２４ ｈ后觀察結果。如果濾紙片周圍無菌則說明有抑菌作用，即有抑菌圈。有明顯抑菌作用的測其抑菌圈的直徑。

２結果與分析

２．１抑菌活性初篩

按照上述試驗方法，發現細葉黃皮莖皮乙醇提取物（濃度約為１．２１ ｍｇ／片）對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、殺螟桿菌、枯草桿菌有抑制作用，因而用丙酮將乙醇提取物倍比稀釋為系列濃度，浸泡濾紙片過夜，做抑菌試驗，同時算出濾紙片所含的藥液量［８］，結果如表１。

試驗結果表明，細葉黃皮莖皮乙醇提取物對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、殺螟桿菌、枯草桿菌具有較強的抑制作用，其對大腸桿菌抑制作用最強，最低抑菌濃度為０．０２６ ｍｇ／片。

考慮到乙醇提取物為粗提物，成分很復雜，為了了解抑菌物質所存在的溶劑部位，因此做了乙醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇部位初步抑菌試驗（濃度均為１．６４５ ｍｇ／片），結果如表２所示。

試驗結果表明，石油醚、氯仿、乙酸乙酯部位對供試菌均有抑制作用，正丁醇部位在該濃度下對供試菌均無抑制作用。

２．２石油醚、氯仿和乙酸乙酯部位最低抑菌濃度

將細葉黃皮莖皮石油醚、氯仿和乙酸乙酯部位用丙酮倍比稀釋為系列濃度進行抑菌活性檢測（４片／皿），結果見表３。由表３可以看出，細葉黃皮莖皮乙醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯部位對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、殺螟桿菌、枯草桿菌均有抑制作用。這３個部位對大腸桿菌抑制作用都較強，最低抑菌濃度均為０．０２６ ｍｇ／片。而對照藥劑頭孢拉定對５種供試菌均具很強的抑制作用，最小抑菌濃度只有０．４０８ μｇ／片；細葉黃皮莖皮提取物對５種菌的抑制作用相對較弱，但其作為一種植物藥，具有安全、無毒的特點，值得深入研究。

２．３細葉黃皮莖皮揮發油最低抑菌濃度

用石油醚將揮發油倍比稀釋為系列濃度進行抑菌活性檢測。結果如表４，細葉黃皮莖皮揮發油對５種供試菌均有抑制作用，最小抑菌濃度為０．４１２~０．８２３ ｍｇ／片。

３結論

試驗結果表明，細葉黃皮莖皮乙醇提取物對革蘭氏陽性菌及革蘭氏陰性菌均有抑制作用，抑菌成分主要在石油醚、氯仿和乙酸乙酯部位，氯仿部位抑菌作用最強，最低抑菌濃度為０．０２６~０．２０６ ｍｇ／片。細葉黃皮的莖皮揮發油對５種供試菌均有抑制作用，最小抑菌濃度為０．４１２~０．８２３ ｍｇ／片，其抑菌濃度比石油醚部位相對較小。

有關細葉黃皮莖皮的有效成分提取分離及抑菌作用值得深入研究。

參考文獻：

［１］ 中國科學院中國植物志編輯委員會．中國植物志［Ｍ］． 北京：科學出版社，１９９７．１３８．

［２］ 黃峰，何銑揚，雷艷梅． 極具發展前景的細葉黃皮果［Ｊ］． 廣西熱帶農業，２００５（４）：３０－３１．

［３］ 譚江文，黃永平． 細葉黃皮是石山貧困地區農民增收致富門路——關于龍州、崇左、扶綏等縣發展細葉黃皮的調查［Ｊ］． 廣西林業，２００４（４）：２２－２３．

［４］ 汪云松，沈月毛，何紅平． 河口細葉黃皮化學成分研究［Ｊ］． 有機化學，２００３，２３（增刊）：１４４．

［５］ ＷＡＮＧ Ｙ Ｓ，ＨＵＡＮＧ Ｒ，ＬＩ Ｎ Ｚ，ｅｔ ａｌ． Ｃｏｕｍａｒｉｎｓ ｆｒｏｍ Ｃｌａｕｓｕｍ－ｏｌｅｎｓ Ｍｅｒｒ［Ｊ］． Ｂｉｏｓｃｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１０，７４（７）：１４３－１5２．

［６］ 蘇秀芳． ＧＣ－ＭＳ法分析雞皮果葉揮發油的化學成分［Ｊ］． 安徽農業科學，２００８，３６（２５）： １０９５６－１０９５７．

［７］ 蘇秀芳，梁振益． ＧＣ－ＭＳ法分析山黃皮莖根揮發油的化學成分［Ｊ］．時珍國醫國藥，２０１０，２１（６）：１５４０－１５４２．

［８］ ＫＨＡＮ Ｍ Ｒ，ＯＭＯＬＯＳＯ Ａ Ｄ． Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｎｄ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｄｒａｃｏｎｔｏｍｅｌｏｎｄａｏ． ［Ｊ］． Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，２００２，73（4）： ３２７－３３０．

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