經方補陽還五湯對神經功能缺失影響的一種藥理學評價方法

白雪松 蔡光先 尹天雷

(1遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧省沈陽市皇姑區北陵大街33號，110032;2湖南省中醫藥研究院)

中風是一種常見的臨床疾病。按照世界衛生組織心血管病趨勢及其決定因素監測方案(WHO-MONICA)進行的心血管患者群監測結果表明:我國各地人群腦卒中事件發病率及死亡率與國際相比屬較高水平［1］。近年來腦卒中發病率呈上升趨勢而死亡率卻呈下降趨勢［2］。測算結果顯示，25歲以上人群因腦血管疾病而損失的能力喪失調整生存年(DALYs)在2000年為12.51DALYs/千人口。在2000年，缺血性腦卒中的疾病經濟負擔為126億元～196億元［3］。如何提高腦血管病在恢復期的治愈率，已成為國內外醫學研究的重點課題。補陽還五湯出自清代王清任的《醫林改錯》，是臨床治療中風后遺癥的經典方劑，有很好的療效，文獻報道總有效率為90%以上［4-7］，并能減少后遺癥的發生［8］。本實驗綜合評價了動物模型感覺、運動等多種神經功能缺失恢復情況，并探討了補陽還五湯對中風后遺癥期神經功能缺失的治療效應。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物 處方由黃芪120g、當歸尾6g、川芎3g、紅花 3g、赤芍 4.5g、桃仁 3g、地龍 3g組成，由湖南省超微工程技術中心提供，濃度為0.78g/mL。

1.2 實驗器材與試劑 手術器材、電凝器(上海滬通電子有限公司，GD350-S1型)、水合氯醛(五聯化工廠提供，批號:w20051122)、肝素鈉注射液(上海生物化學制藥廠提供，批號:005006)。

1.3 實驗動物 SD大鼠，單一雄性，體重280±20g。由上海希普爾-必凱試驗動物有限公司提供［許可證編號:SCXK(滬)2003-0002］。

1.4 造模方法 大鼠以10%水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉。頸正中切口，分離暴露右頸總動脈、頸內動脈和頸外動脈，頸外動脈遠心端打一活結，于活結外凝斷，在頸外動脈剪一小口，將栓線插入，向顱底輕輕推送，約21mm左右感覺到輕微阻力，再輕輕回抽約2mm左右，固定。缺血損傷后1h，將栓線抽回至頸外動脈，形成缺血再灌注。動物清醒24h后，以Zea Longa評分標準［9］初步評價動物造模情況，剔除0分和4分動物。具體的評分標準:0分，無神經功能障礙;1分，左側前爪不能完全伸展，輕度神經功能障礙;2分，行走時大鼠向左側(癱瘓側)轉圈，中度神經功能缺失;3分，行走時大鼠身體向左側(癱瘓側)傾倒，重度神經系統功能缺失;4分，不能自發行走，有意識喪失。

1.5 分組及給藥方法 術后Zea Longa評分剔除后，動物存活超過14天者可納入實驗，舍去狀態極差的動物，最終納入大鼠20只，隨機分成模型組、補陽還五湯組(以下簡稱治療組)，每組10只。另取10只同批次的動物作為空白對照組。實驗動物分早晚2次給藥，藥物按人與動物體表面積折算。治療組每只每次灌胃傳統煎劑2mL，相當于成人每日劑量為142.5g;模型組與空白組各灌胃2mL自來水。

1.6 神經損傷嚴重度評分(Neurological Severity Score，NSS)方法 參考文獻［10］的方法，通過一系列的行為學測試來獲得更詳細的神經學判定。主要包括運動能力和感覺情況等一系列10個測試項目。21分是試驗鼠能達到的最高分，即正常大鼠得分。實驗動物手術前每日撫摸若干次，建立良好的反射，適應神經行為學評分測試，使給藥前基線平穩。1)爪放置:動物在長凳的邊緣縱向抓握，每爪依次放在凳子的邊緣。每只成功放置到凳子上的爪積1分。2)翻正反射:動物仰臥放在手掌，如果能翻過來積1分。3)單杠測試:前肢放在有棱的棒上，積分情況如下:3分，兩后肢向上隆起到棒上;2分，一后肢向上隆起到棒上;1分，動物吊著;0分，動物掉下來。4)傾斜平臺:動物面向下放置45°斜面，積分情況如下:3分，15s內動物轉身，使頭向上;2分，16～30s內轉身;1分，轉身花費時間超過30s;0分，掉下來或還保持指頭向下方向。5)旋轉:拿著動物尾巴根部，然后順時針旋轉，再逆時針旋轉，動物應該向旋轉對側方向轉圈，每側積1分。6)前爪視覺范圍:動物能在輕拿，使其位置到達長凳邊緣，每成功前肢放置積1分。7)轉圈:1分，不轉圈;0分，轉圈。8)對側反射:0分，反射;1分，不反射。9)活動能力:2分，正常活動能力;1分，搖擺、不穩;0分，不能活動。10)一般條件:2分，正常(皮毛光澤，警覺，自由走動);1分，不整潔(皮毛臟、駝背姿勢、好斗);0分，瘦弱，軟弱，肌肉緊張性下降。

1.7 統計學方法計量資料以ˉx±s的形式表示，滿足正態性與方差齊性，以析因設計方差分析檢驗NSS評分時間與組間效應，以Dunnett-t檢驗對多組與一組數據差別進行比較。如果數據不滿足方差分析條件，則以秩和檢驗進行分析。

2 結果

2.1 一般情況 造模后大鼠精神萎靡，喜臥少動，易激惹;體重下降，皮毛枯槁無光澤，豎毛，并有掉毛現象;部分有呃逆，流涎，稀便。出現不同程度的神經缺失表現，表現為左側肢體運動和感覺的缺失。這些表現可持續到實驗結束。

2.2 行為學測試結果 NSS評分總體結果見表1、表2。

表1 NSS評分結果(ˉx±s)

表2 NSS評分結果統計檢驗(n=10)

統計結果顯示，NSS評分時間和組間差異具有統計學意義，并且時間與組間具有交互作用，提示NSS評分恢復情況受組間和時間2種因素影響，可以說隨著時間延長，NSS評分有恢復的趨勢。具體不同時間點組間比較結果，各時間點模型組和治療組NSS評分與空白組比較均有統計學意義，而治療組與模型組比較，在給藥后2、4、6周NSS評分差別有統計學意義，可以說治療組能改善模型動物神經缺失癥狀。

3 討論

大腦支配調控機體的感覺、運動等多種生命活動。如果腦的血流供應發生障礙，導致供血區域缺血性損傷，導致運動、感覺、反射等功能缺損。實驗研究常采用阻塞大腦中動脈來復制局灶性腦梗死動物模型。動物常表現為神經功能缺失:如對側肢體，特別是前肢運動功能障礙，對側感覺功能障礙，反射協調障礙等。對于這些表現，最常用的評測方法是一些簡單的分級方法如Zea Longa評分方法來進行神經學判定［9］。這些方法往往比較粗糙，無法體現模型感覺、運動、平衡協調等功能的全部變化。目前已經有不同的研究者根據需要開發了一系列方法更敏感精確的方法評測這種功能損傷。這些包括肢體放置、橫木行走、網屏行走、旋轉試驗、粘性標簽粘貼測試、樓梯測試等［11-12］。對于中風模型理想的功能結果測試應該是對于各種功能損傷敏感，能檢測到慢性長期功能不足，不會因為重復測量過分影響，并且對損傷是有針對性的。但是測試選擇一直是爭論相當多的論題，關于哪個實驗該被選擇以及最少的測試數目是多少仍沒有一致意見。如果大量動物被檢測，就會受時間和資金限制。神經損傷嚴重程度評分綜合了運動、感覺、反射、整體情況以及感覺運動整合等能力，從一定程度上彌補了單一測試的的缺點。

中風多發于中老年人，大部分存活患者留有不同程度的后遺癥。究其病因病機多為氣虛血瘀，其病性多為本虛標實、虛實夾雜。王清任創制補陽還五湯，以黃芪四兩補氣為君，伍以活血化瘀藥為輔，以補氣活血立法治療本病，是臨床上治療中風后遺癥的經典方劑，療效確切，在本實驗中能明顯提高NSS評分，改善神經缺失癥狀，從中藥藥理學角度論證了其療效。

［1］吳兆蘇，姚崇華，趙冬.我國人群腦卒中發病率、死亡率的流行病學研究.中華流行病學雜志，2003，24(3):236-239.

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［3］胡善聯，龔向光.中國缺血性腦卒中的疾病經濟負擔.中國衛生經濟，2003，22(12):18-20.

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［6］周勇軍.補陽還五湯加味治療中風康復45例觀察.時珍國醫國藥，2006，17(2):250］.

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［11］M.Josh Hasbant，Suzanne M.Underhill，et al.Synapse Loss and Regeneration:A Mechanism for Functional Decline and Recovery after Cerebral Ischemia.THE Neuroscientist，2002，6(2):110-119.

［12］Barbay S，Plautz EP，Friel KM，et al.Delayed rehabilitative training following a small ischemic infarct in nonhuman primate primary motor cortex(M1).Soc Neurosci Abstr，2001，27:931-934.