血清乙酰肝素酶與2型糖尿病代謝性指標的相關性研究

趙 越，余江毅，安曉飛

乙酰肝素酶 (heparanase，HPSE)是一種能特異性水解硫酸乙酰肝素 (heparan sulfate，HS)的內源性糖苷酶［1］，由HS與核心蛋白組成的硫酸乙酰肝素蛋白多糖 (heparanase sulfate proteoglycan，HSPG)廣泛存在于細胞表面、細胞外基質和基底膜中。相關研究表明，HPSE高表達可降解HS［2－3］，破壞細胞外基質和基底膜的完整性［4］，并釋放結合在HS上的多種活性分子［5］，與糖尿病 (diabetes mellitus，DM)血管病變尤其是糖尿病腎病 (diabetic nephropathy，DN)蛋白尿的產生關系密切［6］。

最近研究發現，糖尿病患者尿液中HPSE活性較健康者明顯升高［7］，高糖狀態和氧化應激可能是誘導內皮細胞中HPSE表達及活性升高的重要因素［8］。但目前關于糖尿病代謝異常與血清HPSE表達水平的關系，相關臨床研究尚不多見。本研究用酶聯免疫吸附法 (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測定120例2型糖尿病 (type 2 diabetes mellitus，T2DM)患者的血清HPSE水平，分析其與糖尿病代謝指標(血糖、血壓、血脂、腰圍等)的關系，初步探索T2DM代謝異常對血清HPSE的可能作用。

1 資料與方法

1.1 病例納入標準 入選標準:(1)符合《中國2型糖尿病防治指南 (2007年版)》T2DM診斷標準［9］;(2)年齡50～75周歲，性別不限;(3)無慢性并發癥，或僅有輕度微血管并發癥 (尿清蛋白排泄量＜200μg/min或＜300 mg/d;無明顯視網膜病變或只有輕度非增生性糖尿病視網膜病變);(4)血壓≤140/90 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa);(5)體質指數(BMI)≤30 kg/m2。排除標準:(1)空腹血糖 (FBG)≥13.9 mmol/L，或近1個月內出現糖尿病危急重癥如酮癥酸中毒、糖尿病高滲狀態;(2)已有大血管并發癥，如冠心病、腦血管意外、下肢血管病變等;(3)具有嚴重的原發性心、肝、肺、腎、血液系統疾病或影響其生存的嚴重疾病。

1.2 一般資料 選取2008年3—9月在江蘇省中醫院內分泌科門診就診的T2DM患者120例，其中男58例，女62例;平均年齡 (61.7±6.5)歲;糖尿病病程平均 (6.0±4.5)年。1.3 方法 對納入的T2DM患者測定其血清HPSE及相關代謝指標水平，分析血清HPSE與各指標間的相關性。參考《中國2型糖尿病防治指南 (2007年版)》中相關代謝性指標的控制目標將各指標分層，比較血清HPSE在分層后不同組別間的差異。

主要觀察指標:血清HPSE;腰圍、BMI;血糖 ［FBG、餐后血糖 (PBG)］、糖化血紅蛋白 (HbA1c);收縮壓、舒張壓;膽固醇 (TC)、三酰甘油 (TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)、低密度脂蛋白膽固醇 (LDL－C)。

血清HPSE檢測方法:使用人乙酰肝素酶酶聯免疫分析試劑盒 (USCNLIFE;產品編號:E0711h)檢測血清HPSE水平，檢測方法為ELISA改良雙抗體夾心法。

主要檢測儀器:HPSE檢測采用BIO－RAD Model－1575洗板機、BIO－RAD Model－680酶標儀;生化指標檢測采用Olympus－AU2700全自動生化分析儀。

1.4 統計學方法 采用SAS 9.0統計軟件進行統計分析。符合正態分布的計量資料以表示，采用t檢驗。不符合正態分布時可改用其他統計方法或進行數據轉換。相關分析采用Pearson單因素相關分析。采用雙側檢驗，以P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清HPSE與糖尿病代謝指標的相關性 120例T2DM患者血清 HPSE為 (1.32±1.37)U/L，腰圍為 (84.3±8.1)cm，BMI為 (24.0±2.7)kg/m2，FBG為 (7.0±1.9)mmol/L，PBG為 (10.3±3.8)mmol/L，HbA1c為 (6.5±1.3)%，收縮壓為 (130.0±13.3)mm Hg，舒張壓為 (76.8±9.3)mm Hg，TC為 (4.78±0.84)mmol/L，TG為 (1.49±0.94)mmol/L，HDL－C為 (1.28±0.31)mmol/L，LDLC為 (2.86±0.66)mmol/L。血清HPSE與上述代謝指標均無相關性 (P＞0.05，見表1)。

2.2 T2DM患者血清HPSE水平在不同代謝指標分層間的比較FBG≥5.6 mmol/L組患者血清HPSE水平顯著高于FBG＜5.6 mmol/L組，差異有統計學意義 (p＜0.05);其余糖尿病代謝指標分層間血清HPSE水平比較，差異均無統計學意義(P＞0.05，見表2)。

表1 120例T2DM患者血清HPSE與糖尿病代謝指標的相關分析結果Table 1 The correlation analysis between serum HPSE and the metabolic index in 120 type 2 diabetic patients

3 討論

有研究報道，高糖和氧化應激壓力增加可使豬主動脈內皮細胞HPSE表達水平和活性明顯升高［8］，其機制可能是高糖激活了Sp1、Egr－1、Ets等轉錄因子導致 HPSE基因轉錄增加［10］。而糖尿病正是以長期血糖升高為主要表現的一組代謝異常綜合征，糖尿病患者高血糖和各種引起氧化應激壓力增加的危險因素與HPSE水平之間應具有一定相關性。本研究結果顯示，血清HPSE水平與FBG、PBG、HbA1c、腰圍、BMI、收縮壓、舒張壓、血脂均無相關性。而在對各種危險因素進行不同的分層后進一步比較不同組別的HPSE水平時發現，血清HPSE水平在FBG＜5.6 mmol/L組顯著低于FBG≥5.6 mmol/L組 〔(0.92±1.25)U/L與 (1.52±1.41)U/L，p＜0.05〕;其余各危險因素分層后比較，血清HPSE水平均未見明顯差異。

FBG水平較高的T2DM患者血清HPSE水平也較高，這為血糖調節HPSE高表達從而參與糖尿病血管病變的假設提供了一定的證據，但仍存在以下幾點問題:(1)本研究缺乏與正常人群的對照，因此尚不確定糖代謝異常的T2DM患者較正常人群血清HPSE水平是否升高。(2)血清HPSE在FBG以5.6 mmol/L為切點的分層比較有明顯差異，而在FBG以6.1 mmol/L為切點的分層比較未見明顯差異。由此提示，血糖升高誘導HPSE表達增加是否存在一個激發域值，當血糖高于某個域值時，即可激活轉錄因子使HPSE表達增加及活性HPSE向細胞外轉移增多，而在低于這個域值時，血糖的變化不會引起HPSE的改變，但目前研究尚未見此方面的發現和報道。(3)相關研究顯示，30 mmol/L葡萄糖培養內皮細胞1周后，在細胞裂解液中檢測到HPSE表達及活性較空白對照組、高糖加胰島素組明顯升高［8］。30 mmol/L葡萄糖是在實驗室條件下使用的特殊手段，與本調查中FBG平均 (7.07±2.01)mmol/L、PBG平均 (10.27±3.87)mmol/L的血糖水平有較大差距，是否只有在如此高水平的葡萄糖濃度下才能誘導HPSE轉錄增加?其他葡萄糖水平對HPSE轉錄影響如何?表達增加的HPSE是否會從溶酶體釋放到血清中?上述問題尚無明確的答案。因此，目前的研究結果尚不能得出血糖升高可調節T2DM患者血清HPSE表達增加的結論，但血糖可能是T2DM患者血清HPSE升高的重要危險因素。

表2 不同糖尿病代謝指標分層間血清HPSE水平比較 (U/L)Table 2 The comparison of serum HPSE in groups divided by different DM metabolic index levels

綜上所述，本研究在現有的關于HPSE研究結論的基礎上，分析了T2DM患者血清HPSE與血糖、血壓、血脂等代謝指標之間的關系，初步探索了血清HPSE受血糖影響的可能依據，若能在后續的研究中克服一些資料和方法學上的局限，采用更為科學、合理的設計，可能會獲得更有意義的結果。

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