膠體金免疫層析法檢測心肌標志物在診斷急性心肌梗死中的應用

劉 宇，周榮斌

急性心肌梗死 (AMI)是嚴重危及生命的心血管常見急危重癥，臨床上通過檢測特異性心肌損傷標志物來早期診斷AMI。我科采用血清肌鈣蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶 (CKMB)/肌紅蛋白三合一診斷試劑盒，對140例AMI患者進行檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年4月—2010年3月北京軍區總醫院急診科患者共140例。根據2007年ACC/AHA發布的急性ST段抬高性心肌梗死指南與不穩定心絞痛與非ST段抬高性心肌梗死指南，所有研究對象均證實為AMI;且抽血時間選擇在發病4 h后 (因發病時間＜4 h心肌標志物未在時間窗內而導致假陰性，不在本研究范圍內);排除慢性腎功能不全、心肌炎、急性腦血管病者。

1.2 研究方法 本試驗采用雙盲、自身對照方法。140例確診為AMI患者在發病4 h后抽取靜脈血，以北京科衛臨床診斷試劑有限公司 (簡稱科衛公司)研制生產的肌鈣蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶/肌紅蛋白三合一診斷試劑盒 (膠體金法，批號:200808001)作為試驗組，以杭州艾康生物技術有限公司 (簡稱艾康公司)生產的肌鈣蛋白Ⅰ/肌酸激酶同工酶/肌紅蛋白診斷試劑盒(膠體金法，批號:200809021)作為對照組，分別對血液標本進行測試并比較。

所有待檢測血液標本嚴格按待考核試劑盒和對比試劑盒的使用說明書進行操作。在操作時必須在說明書規定的實驗條件下進行比較，即在同一檢測室、同一儀器設備、同一檢測人員按說明書進行。對比試劑和待考核試劑分別按各自說明書進行平行檢測。

1.3 統計學方法 所有數據輸入到EXCEL表中，分別統計兩種試劑盒的陰性和陽性樣本數，列成2×2列聯表，計算兩種試劑盒的敏感性、特異性、誤診率、漏診率。采用SPSS 13.0統計軟件進行統計學分析，采用χ2檢驗進行統計學分析。

2 結果

本組140例AMI患者中115例為ST段抬高性心肌梗死，25例為非ST段抬高性心肌梗死。試驗組和對照組檢測的肌鈣蛋白Ⅰ、肌紅蛋白、CK－MB結果間差異無統計學意義 (P＞0.05，見表1)。根據表2結果，試驗試劑 (科衛公司)三合一試劑盒與對比試劑 (艾康公司)肌鈣蛋白Ⅰ/CK－MB/肌紅蛋白三合一診斷試劑盒進行標本比對，試驗試劑肌鈣蛋白Ⅰ、CK－MB、肌紅蛋白敏感度與特異性均大于90%(見表3)。

表1 兩種試劑檢測心肌標志物結果比較Table 1 Comparison of cardiac markers between the two groups

表2 兩組試劑檢測肌紅蛋白、肌鈣蛋白Ⅰ、CK－MB結果Table 2 Results about Myo，TnI and CK－MB between two groups

表3 試驗試劑敏感度與特異度 (%)Table 3 Sensitivity and specificity of trial group

3 討論

心肌肌鈣蛋白Ⅰ、CK－MB和肌紅蛋白是目前診斷和排除AMI應用最多的血生化標志物，在發生心肌梗死后，這3種標志物的釋放時間和t1/2不同，因此可以檢測這三項互補的指標來診斷AMI，現已成為診斷AMI的有效工具。

歐洲心臟學會 (European Society of Cardiology，ESC)和美國心臟學會 (American College of Cardiology，ACC)于2000年重新定義了AMI的標準［1］。修改以后的標準是:(1)心肌壞死的生物化學標志物肌鈣蛋白，呈現典型的升高和逐漸的下降，或者CK－MB快速升高和下降，伴隨有:a心肌缺血的癥狀;b心電圖上出現了病理性Q波;c心電圖改變提示缺血(ST段升高或者下降);d冠狀動脈介入，如冠狀動脈成形術。(2)AMI的病理診斷標準。可見心肌標志物在診斷AMI的核心地位。

國內外已有檢測心肌標志物的試劑盒上市，單項檢測產品較多，主要采用酶聯免疫法 (ELISA)、化學發光法、金標層析法、生物芯片等，僅少數公司產品采用三合一檢測法，并獲美國食品藥品管理局 (FDA)注冊。雖然檢測的試劑、方法很多，但是臨床應用研究中發現，各種方法測定結果之間差異很大［2］。例如心肌肌鈣蛋白是目前發現的診斷心肌損傷最特異、最敏感的標志物之一［3］，1995年美國FDA批準用于臨床AMI的診斷。不同檢測方法間測定值最大可差36倍［4］，原因包括各種檢測方法采用的抗體各不相同，肌鈣蛋白Ⅰ分子內的不同片段和不同抗原決定簇受氧化－還原反應、磷酸化反應或蛋白水解酶作用等而降解的影響各不相同。各生產廠商的肌鈣蛋白Ⅰ校準品各不相同，甚至使用同一份標定肌鈣蛋白I值的人血清進行校準也未能完全消除不同測定系統之間測定值的差異。為加快檢測速度，許多檢測系統設計采用血漿或全血標本，抗凝劑的選用是否得當將直接影響檢測結果。

金標層析法以其標本用量少、簡便快速、無污染等優點，已被大量試驗證實有效、可靠［5－7］。肌鈣蛋白Ⅰ/CK－MB/肌紅蛋白三合一診斷試劑盒采用膠體金免疫層析原理，通過雙抗體夾心法快速一步檢測血清、血漿、全血中肌鈣蛋白Ⅰ/CKMB/肌紅蛋白三項指標，當血樣被滴入點樣孔后，紅細胞在分離系統中被移除。樣品中含有的相應的待檢物即與特異抗體－染料復合物結合，移至檢測區與固定的特異抗體或親合素顯色。沒有結合的染料復合體移出檢測區域最終被陽性對照區捕獲。該方法可用于檢測人血清、血漿、全血中的肌鈣蛋白Ⅰ、肌紅蛋白和CK－MB，適用于AMI的輔助診斷。本研究結果顯示應用膠體金免疫層析法測定的心肌標志物，與艾康公司同類產品比較，科衛公司的試驗試劑檢測肌鈣蛋白Ⅰ、肌紅蛋白、CK－MB的相對敏感度分別為98.4%、99.2%及97.6%，特異度分別為94.4%、90.9%及94.1%，兩組產品的檢測結果無統計學差異，能較好地檢測患者血樣中的肌鈣蛋白Ⅰ/CK－MB/肌紅蛋白，且操作快捷、簡便，適用于臨床特別是急診科對AMI的輔助診斷。

1 Myocardial infarction redefined:a consensus document of the Joint European Society of Cardiology/American College of Cardiology Committee for the redefinition of myocardial infarction ［J］.J Am Coll Cardiol，2000，36:959－969.

2 Apple FS.Clinical and analytical standardization issues confronting cardiac troponin I［J］.Clin Chem，1999，45:18－20.

3 Apple FS，Murakami MM.The diagnostic utility of cardiac biomarkers in detecting myocardial infarction ［J］.Clin Comerstone，2005，7:25－30.

4 Datta P，Foster K，Dasgupta A.Comparison of immunoreactivity of five human cardiac troponin I assay toward free and complexed forms of the antigen:implications for assay discordance［J］.Clin Chem，1999，45:2266－2269.

5 Cai Jia－ li，Zhou Wei－ ying，Jiang He.Development of a colloidal gold－immunochromatography used for early diagnosis of acute myocardial infarction ［J］.Immunological Journal，2005，21:528－531.

6 朱健.心肌標志物檢測對急性心肌梗死的快速診斷價值 ［J］.實用心腦肺血管病雜志，2010，18(8):1117.

7 Piras L，Reho S.Colloidal gold based electrochemical immunoassays for the diagnosis of acute myocardial infarction ［J］.Chemical，2005，111:450－454.