脂氧酶12遺傳變異與胃癌發病風險相關性研究

張 志，宋文廣，王瑞林，楊照環，陳 紅，劉 靜，付占昭

胃癌是嚴重影響我國人民健康和生活質量的惡性腫瘤之一。其發病率和病死率在不同國家或同一國家的不同地區都有很大的差別。在我國，特別是農村其病死率一直居于各種惡性腫瘤之首。目前普遍認為胃癌的發生是環境和基因相互作用的結果。其中，環境是外因，而遺傳因素是內因。已經有很多研究證明了個體某些基因遺傳變異在胃癌發生過程中的重要作用。這些基因包括炎癥相關基因、致癌物代謝基因、DNA修復基因、細胞周期和凋亡基因等［1－7］。

脂氧酶12(LOX12)是重要的多不飽和脂肪酸代謝基因，其代謝產物在癌癥進展中發揮著重要的作用［8－9］。目前，已經在許多腫瘤發現該基因的過度表達［10－11］。位于該基因啟動子區的遺傳多態，有可能改變其轉錄活性，進而影響該基因對多不飽和脂肪酸的代謝。本研究旨在利用病例對照研究的方法，探討位于LOX12基因啟動子區的－183G＞A單核苷酸多態與胃癌發病風險之間的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2004年12月—2009年12月在唐山市工人醫院就診的胃癌患者100例為研究對象，其中男66例，女34例;年齡38～64歲。均為漢族人。所有病例均經病理學確診。同時選取同時期唐山市健康體檢人群119例為對照組，均無腫瘤病史和體征，其中男76例，女43例;年齡34～68歲。兩組男女比例及年齡分布具有均衡性。

1.2 方法 研究對象均捐獻2 ml靜脈血以分離DNA進行基因分型。

1.3 LOX12基因型分析 以聚合酶鏈反應－限制性片段長度多態性 (PCR－RFLP)方法對LOX12－183 A＞G(rs312466)進行基因分型。PCR擴增引物序列為:正向引物:5'－CTT CCC GGG AGG TCC AGG AAG GTC CCG CCG CAC C－3'和含錯配位點的反向引物:5'－CAG AGCGGT AGA GCC GGC TGT GGG GACTGG CTG TTC－3'(下劃線堿基由G錯配為T，引入Mbo II酶切位點)。PCR產物大小為120 bp。在25μl PCR反應混合液中含0.1μg模板DNA、0.4μmol/L各引物、0.1 mmol/L dNTP、1.5 mmol/L MgCl2、1.0 U Taq聚合酶。PCR條件為:95℃預變性2 min后于94℃ 30 s、54℃ 30 s和72℃30 s進行35個循環，最后72℃延伸10 min。取10μl PCR產物與限制性核酸內切酶MBOII于37℃溫育過夜。酶切產物于3%瓊脂糖凝膠電泳分析。LOX12基因－183A等位基因有1個MBO II酶切識別位點，產物有111 bp和24 bp兩個片段;－183G等位基因無酶切位點，故只有135 bp 1個片段;而雜合子則產生135 bp、111 bp和24 bp 3個片段。

1.4 統計學方法 采用SAS 6.12統計軟件進行統計學處理，計數資料采用χ2檢驗，以比值比 (odds ratio，OR)及其95%可信區間 (confidence interval，CI)表示相對危險度，以p＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

LOX12－183G和－183A等位基因頻率在對照組及胃癌組中分別為59.7%、40.3%和48.0%、52.0%，兩組比較差異有統計學意義 (p＜0.05)。－183GG、AG和AA三種基因型頻率在胃癌組分別為25.0%、49.0%和29.0%，對照組為38.7%、42.0%和19.3%，基因型分布均符合Hardy－Weinberg平衡定律(P=0.65，見表1)。Logistic回歸分析顯示，與GG基因型攜帶者相比，AA基因型顯著增加胃癌發病風險〔OR=2.36;95%CI(1.12，5.70)〕。未發現AG基因型與胃癌發病風險的相關性。

表1 LOX12基因型在對照組和胃癌組中的分布［n(%)］Table 1 The distribution of LOX12 genotype in cases and controls

3 討論

LOX12是花生四烯酸代謝通路的關鍵酶之一，其代謝終產物為12羥基二十碳四烯酸 (12－HETE)。12－HETE是人體內重要的生物活性分子，參與機體的許多生理過程，它可以刺激蛋白激酶C和促進許多生長因子和細胞因子的生物反應，從而在腫瘤生長過程中調節轉錄因子的激活和癌基因的誘導［8，12］。由于LOX12的代謝產物在細胞增殖、凋亡以及分化中的重要作用，該基因的表達及活性將直接影響細胞增生和凋亡，進而影響腫瘤的發生發展。研究報道了位于該基因編碼區的261 Arg＞Gln變異直接影響該酶的反應活性，而且該變異顯著改變個體對食管鱗癌的易感性［13］。

本研究采用病例對照的研究方法調查了位于LOX12啟動子的遺傳多態對胃癌發病風險的影響。并發現LOX12啟動子區－183G＞A多態顯著增加胃癌的發病風險，特別是－183純合AA基因型攜帶者增加胃癌的發病風險約2.4倍。已經有研究表明，12－HETE和 (或)LOX12的過度表達和許多腫瘤，包括胃癌的發生、發展相關［14－16］。本研究和這些結果正好吻合。針對LOX12的抑制劑可以抑制腫瘤增生，誘導細胞凋亡，預防腫瘤的形成［17－18］。

總之，本研究發現花生四烯酸代謝基因LOX12啟動子區基因多態可能是胃癌的重要遺傳易感因素，這個研究結果為花生四烯酸代謝基因參與腫瘤的發生提供了重要的遺傳學證據。

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