氣相色譜法測定卵磷脂絡合碘片在人體中的血藥濃度

于忠輝，范 青，張 寧，張 策，呂慧怡

沃麗汀是卵磷脂絡合碘片劑，臨床用于治療血管痙攣性視網膜炎、出血性視網膜炎、缺碘性甲狀腺腫、缺碘性甲狀腺機能減退等［1］。本實驗原理為酸性條件下血樣中的碘與重鉻酸鉀發生氧化還原反應析出碘單質，碘與丁酮1∶1絡合生成碘丁酮，碘丁酮被環己烷有機溶劑萃取，用氣相色譜法測定碘丁酮的濃度即為碘的濃度，適用于沃麗汀藥代動力學的研究。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 氣相色譜儀:GC-17A氣相色譜儀;檢測器:火焰離子化檢測器(日本島津公司);色譜柱類型:CV-1701;載氣:氮氣;燃氣:氫氣;助燃氣:空氣;METTLER萬分之一分析天平(日本)。

1.2 藥品 卵磷脂絡合碘片(日本第一株式會社，規格:1.5 mg，批號:200803)。

1.3 試劑 硫酸、硫代硫酸鈉、丁酮、重鉻酸鉀、環己烷，均為分析純。

2 方法

2.1 對象的選擇 6位健康受試者均為男性，年齡(23±4)歲，身高(175±5)cm，體重(75±5)kg。受試者體格檢查肝腎功能、血常規、心電圖、血壓和脈搏均屬正常;試驗前2周及試驗前期未服用其他藥物，每位受試者均簽署知情同意書。

2.2 方法 試驗前隨機編號，禁食12 h后，清晨空腹口服沃麗汀片劑，用溫開水200 mL送服。受試者采血期間禁煙酒，采血后4 h給予低碘飲食。自給藥后 0、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、10、15、24 h取上肢靜脈血1.5 mL，并立即移入肝素化試管中。離心30 min(1 000 r/min)分離血漿。于-20℃冰箱中保存待分析。

2.3 血藥濃度的測定

2.3.1 色譜條件的建立 采用CV-1701型色譜柱(50 mm×0.53 mm)，柱溫105℃，氮氣流速10 mL/min，汽化室溫度230℃。檢測器溫度260℃，進樣量1.0 μL。在選定的色譜條件下，血漿中的碘與內源性物質分離良好，保留時間為1.708 min，峰形尖銳。1號峰與2號峰分離度為1.51。見圖1。

圖1 碘的色譜圖注:1.卵磷脂絡合碘，2.內源性物質

2.3.2 血漿樣品的預處理 取血漿樣品0.5 mL，加水至5 mL，混勻。加入硫酸0.1 mL，搖勻后加入0.1 mol/L硫代硫酸鈉溶液0.2 mL，再次混勻，加入丁酮0.5 mL，混勻后加入0.25 mol/L重鉻酸鉀溶液1 mL，混勻后放置10 min，加入環己烷。輕輕正反倒置30次，待其靜置分層，提取上清液。進樣，進樣量1.0 μL，記錄峰面積，求出血藥濃度。

2.3.3 標準曲線的制備 預先將KI粉末在110℃烘干至恒重，精稱KI粉末0.013 8 g用水定容至100 mL。臨使用前將KI儲備液稀釋1 000倍。取儲備液0.1 mL，用水定容至100 mL。分別取KI標準液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 5 支 10 mL帶塞比色管中，并加入空白(未服藥)血漿0.5 mL混勻。加入水至5 mL。按血漿樣品處理項下的方法操作，取1.0 μL上清液進樣，記錄峰面積(A)，以濃度(C)對應峰面積(A)進行線性回歸。得標準曲線方程:A=106 977.319C+5 499 093.095，r=0.999 2。由此可見，在 2 ～10 μg/dL的血藥濃度范圍內，血漿中的碘與其峰面積成良好的線性關系。

2.4 方法學考察

2.4.1 精密度試驗 取5 mL的刻度試管，分別加入空白血漿，然后加入高、中、低3個濃度的標準碘液。使混勻配成含碘2、5、10 μg/dL的血漿樣品，按“血漿樣品的處理”項下的方法操作，取上清液進樣，記錄峰面積，處理后的樣品置于冰箱中保存，于同一天內進樣，每個濃度各進5針，計算日內精密度。連續5 d，每天每個濃度進一次樣，計算日間精密度。日間精密度(3.26% ±7.21%)，日內精密度(2.43% ±6.31%)。

2.4.2 穩定性試驗 取碘化鉀標準液配制的5 μg/dL血漿溶液，按“血漿樣品的處理”項下的方法操作，處理后的樣品置于冰箱中保存。分別0、2.0、4.0、8.0、15、24.5 h 取上清液進樣，記錄峰面積，實驗結果表明，在24 h內碘化鉀標準溶液配制的血漿溶液的峰面積穩定，RSD值為0.725%。

2.4.3 回收率試驗 取健康人血漿，加入KI標準液配成濃度2.0、5.0、10.0 μg/dL的溶液，各 6份，按“血漿樣品的處理”項下的方法操作，用回歸方程求得碘濃度，計算回收率，分別為101.11%、98.4%、97.96%，RSD為1.72%。

2.5 數據的處理 將測得的數據代入標準曲線得出血漿藥物濃度。

3 結果

應用3P97進行數據處理，得到結果:tmax=(1.625 ±0.25)h，t1/2=(3.932 ±0.941)h，Cmax=(57.9±1.651)μg/L。血藥濃度時間曲線見圖2。

圖2 血藥濃度時間曲線

4 討論

4.1 本實驗結果沃麗汀血藥濃度在1.6 h達峰，至24 h已基本代謝完全。表明氣相色譜法適用于卵磷脂絡合碘片(沃麗汀片)血漿藥物濃度的測定，為進一步提供藥物代謝動力學監測提供了依據。其結果準確、可靠、簡便。

4.2 由于人體甲狀腺攝取碘，在饑餓等狀態下可能釋放碘。人體自身碘值的影響會干擾實驗結果。所以在實驗過程中特別注意飲食和飲水平衡，給予低碘飲食，使得人體內基礎碘值處于相對恒定的水平［4］。

4.3 本實驗存在樣本少的缺點，可為進一步臨床試驗提供依據，溫度對本實驗影響不大，室溫放置與置于冰箱中保存后測定結果相差微小，所以本實驗中對溫度要求不很嚴格。

［1］ 王曉通，姚金瑞.沃麗汀聯合腸溶阿司匹林治療視網膜靜脈阻塞［J］.實用醫學雜志，2007，23(13):2114-2115.

［2］ 蔡克波.卵磷脂絡合碘片對非缺血型視網膜分支靜脈阻塞的療效［J］.實用醫學雜志，2007，23(7):1051-1052.

［3］ 陳永信，張承芬，譚柯.卵磷脂絡合碘片(沃麗汀)臨床應用的安全性和有效性驗證［J］.臨床眼科雜志，2007，3(15):251-253.

［4］ 許啟榮，龍敏，曹民，等.離子色譜法測定尿碘濃度［J］.中國藥房，2006，17(23):1794.