HPLC法測定鹽酸度洛西汀的有關物質

黃文姝，董愛軍，金紅雨，劉 心

鹽酸度洛西汀是對5-羥色胺(5-HT)和去甲腎上腺素(NE)的攝取有雙重抑制作用的化合物，目前研究表明，該藥對抑郁癥［1-2］、糖尿病性周圍神經病引起的疼痛以及緊張性尿失禁等均有一定的療效。鹽酸度洛西汀在合成過程中可能帶進原料、中間體、副產物，同時合成及放置過程中可能會產生降解物質［3］。為了更加有效地控制本品質量，本文建立高效液相色譜法對鹽酸度洛西汀中的有關物質進行測定。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(600泵、2487紫外檢測器、996二極管陣列檢測器、Millennium32色譜工作站，美國Waters公司);鹽酸度洛西汀精制品(自制，純度99.9%)，鹽酸度洛西汀(自制，批號:20050201、20050202、20050203)，中間體(自制);乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 色譜條件

色譜柱:Inertsil CN-3(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流動相:0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用三乙胺調節 pH 值為 6.0)-乙腈(30∶70)［4］，流速為1.0 mL/min，檢測波長為228 nm。柱溫:室溫，進樣量:20 μL，理論板數按鹽酸度洛西汀計算，應不低于2 000，鹽酸度洛西汀與相鄰色譜峰的分離度應大于1.5，實際測定時，鹽酸度洛西汀與最鄰近的雜質色譜峰分離度為2.8。

3 溶液制備

取本品適量，加流動相溶解并制成每1 mL中約含40 μg的溶液，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液適量，用流動相稀釋制成每1 mL中約含0.4 μg的溶液，作為對照溶液。

4 方法學考察

4.1 檢測限 取鹽酸度洛西汀精制品適量，加流動相使其溶解，并逐級稀釋，按2項下的色譜條件取20 μL進樣測定，計算其信噪比S/N=3時，檢測限為0.013 ng。

4.2 專屬性試驗

4.2.1 主要原料與中間體的檢出 取本品、合成用主要原料及中間體適量，制成混合溶液，按2項下的色譜條件注入二極管陣列檢測器(PDA)液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1、圖2。幾個主要原料、中間體均能與鹽酸度洛西汀得到良好分離。

4.2.2 粗品的檢測 取本品粗品適量，加流動相溶解后，按2項下的色譜條件注入液相色譜儀，見圖3。本品粗品中所含雜質在此色譜條件下能夠得到檢出，并能與主成分得到良好分離。

4.2.3 降解試驗 酸破壞試驗:取本品10 mg，用0.1 mol/L鹽酸溶液10 mL溶解，水浴加熱30 min后，用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，再用 流動相稀釋至250 mL。

圖1 鹽酸度洛西汀HPLC圖譜注:1.鹽酸度洛西汀

圖2 鹽酸度洛西汀、主要原料、中間體混合溶液HPLC圖譜注:1.中間體Ⅱ;2.原料Ⅱ;3.原料Ⅰ;4.中間體Ⅰ;5.鹽酸度洛西汀

圖3 鹽酸度洛西汀粗品HPLC圖譜注:1.鹽酸度洛西汀

堿破壞試驗:取本品10 mg，用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL溶解，水浴加熱30 min后，用0.1 mol/L鹽酸溶液中和至中性，再用流動相稀釋至250 mL。

氧化破壞試驗:取本品10 mg，加入雙氧水溶液適量(約0.5 mL)，水浴煮沸除去未反應的雙氧水后，再用流動相稀釋至250 mL。

光照破壞試驗:取本品適量，于4500LUX光強度下照射10 d后，用流動相溶解并稀釋制成每1 mL中約含40 μg的溶液。

高溫破壞試驗:取本品，于60℃條件下放置10 d后，用流動相溶解并稀釋制成每1 mL中約含40 μg 的溶液。

分別取上述溶液20 μL，按2項下的色譜條件進行測定。色譜圖見圖4(因本品在光照及高溫條件下質量穩定，無降解物產生，故色譜圖未附)。本方法能夠有效檢測出各破壞試驗中產生的降解產物，且降解產物均能與主成分峰達到良好分離，表明本方法對降解產物檢查的專屬性較好。

圖4 鹽酸度洛西汀降解實驗HPLC圖譜A.酸破壞;B.堿破壞;C.氧化破壞

4.2.4 峰純度檢查 為檢查樣品的HPLC色譜峰是單一成分還是多個成分，取上述樣品、主要原料及中間體的混合液，用二極管陣列檢測器對主成分色譜峰的峰純度進行檢查，結果純度因子大于閾值，主峰純度符合要求。

5 有關物質檢查

取3項下的對照溶液20 μL注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰高約為滿量程的20%，再精密量取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(1.0%)。測定精制品與 3批樣品(批號:20050201、20050202、20050203)中有關物質的含量分別為0.04% 、0.22% 、0.36% 、0.18% 。

6 討論

6.1 檢測波長的選擇 經多步反應得到的終產品鹽酸度洛西汀，其主要原料、主要中間體和粗品等經PDA檢測器檢測，各種樣品的最大吸收波長均在228 nm左右，因此，選擇228 nm作為檢測波長，以有利于雜質的檢出。

6.2 流動相的選擇 文獻報道有采用磷酸二氫鉀緩沖液、乙腈或甲醇等做流動相，梯度洗脫的方式，雖然能夠有效檢出各種雜質，但不適合快速檢測。在此基礎上對流動相的有機溶劑進行選擇，考察了甲醇和乙腈兩種溶劑，結果表明，乙腈分離效果較好。

6.3 色譜柱的選擇 筆者曾對C18柱及氰基柱分別進行了考察，結果表明，氰基柱的分離效果要優于C18柱，因此，選擇氰基柱作為本品有關物質檢查用色譜柱。

［1］ 鐘靜玫，張昆林，武紹遠，等.度洛西汀治療持續性軀體形式疼痛障礙臨床研究［J］.中國醫藥，2008，3(12):765-766.

［2］ 肖云，何茹.度洛西汀對軀體化障礙患者抑郁癥狀療效及生活質量的研究［J］.實用藥物與臨床，2008，11(3):135-136.

［3］ 梁偉，王如偉，夏亞君.反相高效液相色譜二極管陣列檢測器測定鹽酸度洛西汀的有關物質［J］.中國藥業，2006，15(15):36.

［4］ 金沖，周燕，唐加剛，等.高效液相色譜法測定鹽酸度洛西汀的含量［J］.中國醫藥，2008，3(4):223-224.