喉鱗癌組織中Ezrin和VEGF表達的相關性研究

米 洋，徐 琳，金小平，胡建功，李連賀，陸鴻略

(1承德醫學院附屬醫院，河北承德067000;2河北民族師范學院數學系)

喉癌是頭頸部常見惡性腫瘤，其發病率呈逐年上升趨勢，浸潤和轉移是影響其預后的主要原因。埃茲蛋白(Ezrin)和血管內皮生長因子(VEGF)是近年來研究較多的腫瘤相關蛋白因子。本研究采用免疫組織化學技術檢測喉鱗癌中Ezrin和VEGF的表達，旨在探討它們在喉鱗癌的發生、發展及浸潤轉移中的作用及相互關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集40例我科2006年3月～2008年12月診斷為喉鱗癌患者手術標本，癌中心區、癌旁組織(距腫瘤邊緣≥1 cm，經病理證實無癌細胞)，術前均未接受放、化療。其中男33例、女7例，年齡42～84歲、平均61歲;高分化22例，中分化18例;按TNM分期標準，Ⅰ期、Ⅱ期24例，Ⅲ、Ⅳ期16例;12例頸淋巴結轉移，28例無轉移。術中取標本后即刻10%甲醛固定，常規石蠟包埋。取20例非喉癌患者的喉部正常黏膜組織(13例為聲帶息肉黏膜、7例為雙側喉返神經麻痹切除的單側杓黏膜)作對照。

1.2 主要試劑 鼠抗人Ezrin單克隆抗體、SP即用型試劑盒及VEGF鼠抗人單克隆抗體、SP即用型試劑盒均為福建Maixinbio公司產品。免疫組化方法按試劑盒說明書操作。

1.3 結果判定 Ezrin陽性反應為胞膜和(或)胞質呈清晰棕黃色顆粒，VEGF陽性反應為細胞核和(或)細胞質呈明顯棕黃色反應。先在低倍視野(100×)下選取細胞分布均勻的視野，再在高倍視野(400×)下，分別計數出每個視野中陽性腫瘤細胞數與細胞總數，每張切片計數5個高倍視野，計算其平均陽性細胞數，以百分數表示。

1.4 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件，計量資料以±s表示，多組間采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗;采用Spearman行相關分析，以 P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Ezrin和VEGF的表達 見表1。

表1 各組Ezrin、VEGF的表達(±s)

表1 各組Ezrin、VEGF的表達(±s)

注:與癌旁組織和正常喉黏膜組織比較，*P＜0.05

Ezrin VEGF喉癌組織 40 43.08 ±12.98* 47.39 ±14.24組別 n*癌旁組織 40 12.86 ±6.15 11.00 ±4.44正常喉黏膜組織20 9.06 ±3.19 9.92 ±2.19

2.2 Ezrin和VEGF的表達與喉癌臨床病理參數的關系 見表2。

表2 Ezrin和VEGF的表達與喉癌臨床病理參數的關系

2.3 相關性分析 在喉癌組織中Ezrin表達水平與 VEGF表達水平呈正相關(r=0.991 4，P=0.001)。

3 討論

Ezrin蛋白為膜細胞骨架連接蛋白，主要參與上皮細胞中細胞骨架與胞膜的連接，具有維持細胞形態和運動、連接黏附分子及調節信號轉導等功能［1］。近年來研究發現Ezrin蛋白通過調節黏附分子和信號轉導等途徑，參與細胞與細胞、細胞與基質之間的相互作用，從而在腫瘤發展、浸潤和轉移過程中起著重要作用［2］。本實驗結果顯示Ezrin在喉癌組織中的表達高于癌旁組織和喉部正常黏膜組織，而癌旁組織和喉部正常黏膜組織比較差異無統計學意義。提示在喉癌組織中可能存在Ezrin蛋白表達調控機制的失調，其表達上調，從而促進喉癌的發生。本研究還顯示Ezrin的表達與喉癌組織中的淋巴結轉移、臨床分期和病理分級相關。Ezrin為腫瘤侵襲轉移的促進因素，在多種侵襲性癌組織中高表達，參與腫瘤細胞侵襲與轉移［3～5］。VEGF 作為一種同型二聚體糖蛋白，通過與受體特異性結合而發揮作用，在多種腫瘤中存在不同程度表達，可以為腫瘤細胞的生長和新生血管形成提供營養，從而為腫瘤的生長、浸潤和轉移奠定基礎。

本研究結果表明，喉癌組織中Ezrin和VEGF的表達呈正相關，且Ezrin和VEGF表達高的患者易出現淋巴結轉移。有關Ezrin和VEGF在腫瘤轉移中相互作用的機制目前還不清楚，需要進一步的研究。但可以觀察到Ezrin高表達及VEGF高表達的患者預后差。我們認為檢測Ezrin和VEGF可以為臨床治療方案選擇提供幫助并可作為預后評估的一項指標。

［1］Auvinen E，Kivi N，Vaheri A.Regulation of ezrin localization by Rac1 and PIPK in human epithelial cells［J］.Exp Cell Res，2007，313(4):824-833.

［2］Martin TA，Harrison G，Mansel RE，et al.The role of the CD44/ezrin complex in cancer metastasis［J］.Crit Rev Oncol Hematol，2003，46(2):165-186.

［3］Elliott BE，Meens JA，SenGupta SK，et al.The membrane cytoskeletal crosslinker ezrin is required formetastasis of breast carcinoma cells［J］.Breast Cancer Res，2005，7(3):R365-373.

［4］Weng WH，Ahlén J，Astrom K，et al.Prognostic impact of immunohistochemical expression of ezrin in highly malignant soft tissue sarcomas［J］.Clin Cancer Res，2005，11(17):6198-6204.

［5］Ilmonen S，Vaheri A，Asko-Seljavaara S，et al.Ezrin in primary cutaneousmelanoma［J］.Mod Pathol，2005，18(4):503-510.