肺巖寧膏方對(duì)Lew is肺癌荷瘤鼠抗瘤作用及對(duì)免疫器官的影響

周衛(wèi)東，吳 繼，王菊勇，王立芳，蔡霄月，徐振曄※

（1．上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院腫瘤二科，上海 200032;2．上海中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)腫瘤研究所，上海 200032）

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)早就注意到，腫瘤的生成和發(fā)展與人體免疫功能低下、失調(diào)有著十分重要的關(guān)系。中藥增強(qiáng)機(jī)體免疫功能是其抗腫瘤的主要機(jī)制之一［1］。現(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為，人體的免疫系統(tǒng)具有免疫監(jiān)視功能，能監(jiān)督機(jī)體內(nèi)環(huán)境出現(xiàn)的突變細(xì)胞及早期腫瘤，并予以清除。因此，腫瘤與機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀態(tài)密切相關(guān)［2］。隨著“治未病，既病防變”思想的不斷深入，膏方在腫瘤治療中的價(jià)值也日益受到關(guān)注。應(yīng)用中醫(yī)膏方治療腫瘤，是有針對(duì)性地將名貴的補(bǔ)益中藥與具有抗瘤作用的中藥復(fù)方相結(jié)合，通過(guò)提高機(jī)體的免疫功能扶正抗癌，起到防復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的作用。肺巖寧方為龍華醫(yī)院腫瘤科徐振曄教授的經(jīng)驗(yàn)方，主要由生黃芪、白術(shù)、蜂房、干蟾皮、黃精、山茱萸、淫羊藿等組成。一方面，研究顯示肺巖寧具有明確的抗腫瘤作用［3］;另一方面，研究顯示肺巖寧對(duì)腫瘤患者有明確的免疫調(diào)節(jié)功能［4，5］。為進(jìn)一步探討其機(jī)制，該實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型，觀察以肺巖寧方為基礎(chǔ)的膏方制劑對(duì)荷瘤鼠抗腫瘤活性及免疫功能的影響。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與瘤株 C57BL/6小鼠，SPF級(jí)，雄性，6～8周齡，體質(zhì)量18～22 g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，合格證:SCXK（滬）2007-0005。Lewis肺癌種鼠由上海醫(yī)學(xué)工程院藥理研究室惠贈(zèng)。

1．2 藥物和試劑 膏方由肺巖寧方加輔料方（鱉甲膠、龜板膠、鹿角膠等組成）按一定比例組成復(fù)方，水煎，濃縮，制成膏劑，生藥濃度3 g/mL。輔料方水煎，濃縮，制成膏劑，生藥濃度2 g/mL。Bouin's液由飽和苦味酸+40%甲醛+冰醋酸配制而成。

1．3 方法

1．3．1 Lewis肺癌自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移造模 取傳代14 d左右的C57BL小鼠，無(wú)菌操作，從腋部皮下剝?nèi)∧[瘤組織，剔除纖維包膜和壞死部分，置組織研磨器中剪碎，加4℃生理鹽水輕輕研磨、過(guò)濾，制成瘤細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/mL。取上述細(xì)胞懸液0．2 mL，含細(xì)胞數(shù)2×106個(gè)，接種于 C57BL小鼠右腋部皮下。

1．3．2 分組和給藥 造模后隨機(jī)分為3組，每組11只，分別予膏方、輔料方、生理鹽水連續(xù)灌胃10 d。

1．3．3 抑瘤率檢測(cè) 末次給藥后24 h，脫頸椎處死小鼠，剝離瘤塊，電子天平稱重，計(jì)算抑瘤率。腫瘤生長(zhǎng)抑制率=（1－實(shí)驗(yàn)組平均瘤重/模型組平均瘤重）×100%。

1．3．4 肺轉(zhuǎn)移灶檢測(cè)動(dòng)物處理同前，取出小鼠完整的肺用Bruin液固定24 h，然后放入無(wú)水乙醇漂洗至黃色退出，轉(zhuǎn)移灶呈白色小點(diǎn)，用顯微鏡觀察轉(zhuǎn)移灶數(shù)，計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移率。

1．3．5 對(duì)免疫器官的影響 動(dòng)物處理同前，動(dòng)物處死后取動(dòng)物脾臟及胸腺，稱重計(jì)算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。臟器指數(shù)=臟器重量/體質(zhì)量。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)于正態(tài)分布且方差齊同的采用單因素方差分析（onefactor ANOVA）的單向分類的方差分析（one-way classification ANOVA）進(jìn)行組間比較。對(duì)多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 膏方對(duì)Lewis肺癌皮下移植瘤的影響 各組間瘤重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=0．227，P ＞0．05），膏方組、輔料組對(duì)Lewis皮下移植瘤的抑瘤率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=0．227，P ＞0．05）（表 1）。

表1 膏方對(duì)Lewis肺癌皮下移植瘤的影響

2．2 膏方對(duì)Lewis肺癌轉(zhuǎn)移灶的影響 膏方組與空白組比較，膏方組與輔料組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0．05）。膏方組影響Lewis肺癌轉(zhuǎn)移灶的作用最強(qiáng)，大于輔料組和空白組（表2）。

表2 膏方對(duì)Lew is肺癌轉(zhuǎn)移灶的影響

2．3 膏方對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影響膏方組和輔料組的體質(zhì)量分別與空白組體質(zhì)量比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），膏方組體質(zhì)量與輔料組體質(zhì)量比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。膏方組脾指數(shù)分別與空白組和輔料組脾指數(shù)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），輔料組脾指數(shù)與空白組脾指數(shù)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。膏方組胸腺指數(shù)分別與空白組和輔料組胸腺指數(shù)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），輔料組胸腺指數(shù)與空白組胸腺指數(shù)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）（表3）。

表3 膏方對(duì)Lew is肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影響

3 討論

膏方在腫瘤治療中的價(jià)值逐漸受到重視。中醫(yī)膏方個(gè)體性強(qiáng)，是根據(jù)每一個(gè)腫瘤患者的具體情況，針對(duì)性、選擇性地將一些名貴中藥和復(fù)方中藥組合在一起，再加入辨證與辨病相結(jié)合的中藥，可以起到相互協(xié)調(diào)、相得益彰的特殊作用和良好效果。中醫(yī)認(rèn)為，腫瘤的形成與“虛”有密切關(guān)系，即腫瘤是由于人體正氣不足，臟腑功能失調(diào)，以致邪毒乘虛而入，蘊(yùn)聚于經(jīng)絡(luò)、臟腑，進(jìn)而引起機(jī)體氣血失調(diào)、陰陽(yáng)失衡，導(dǎo)致氣滯、血瘀、痰凝、毒聚的病理變化，日久即成腫瘤，是一種全身屬虛局部屬實(shí)的全身疾病。正氣虛損，陰陽(yáng)失調(diào)是發(fā)生腫瘤的基礎(chǔ)。正氣不足是腫瘤發(fā)生的內(nèi)在依據(jù)，邪毒侵凌是腫瘤發(fā)生的外在條件。因此，中醫(yī)治療腫瘤可歸納為扶正與祛邪兩大方面。膏方具有補(bǔ)中寓治、治中寓補(bǔ)、補(bǔ)治結(jié)合的特點(diǎn)。正確應(yīng)用膏方，不僅能提高機(jī)體的免疫功能，糾正和修復(fù)手術(shù)、放化療對(duì)機(jī)體的損壞，而且在體內(nèi)貯存豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有助于防復(fù)發(fā)，抗轉(zhuǎn)移，對(duì)防止癌癥卷土重來(lái)大有裨益。需要一提的是，對(duì)腫瘤患者開膏滋藥，有別于其他一些由于體質(zhì)虛弱而行冬令進(jìn)補(bǔ)的人群，因?yàn)槟[瘤患者在人體內(nèi)還存在著不同程度的“邪毒”，所以還應(yīng)適度加入清熱解毒、軟堅(jiān)化痰、理氣散結(jié)的中藥，起到扶正祛邪、祛邪扶正的獨(dú)特作用。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腫瘤的生成和發(fā)展與人體免疫功能低下、失調(diào)關(guān)系密切。人體的免疫系統(tǒng)能監(jiān)督并清除機(jī)體內(nèi)環(huán)境出現(xiàn)的突變細(xì)胞及早期腫瘤。因此，提高免疫是腫瘤防復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)。這正與中醫(yī)提倡的“治未病”，通過(guò)益氣養(yǎng)精，以達(dá)到“正氣存內(nèi)，邪不可干”的指導(dǎo)思想相符。

多項(xiàng)研究已顯示，本膏方的基礎(chǔ)方肺巖寧可以提高晚期非小細(xì)胞肺癌患者CD3、CD4及自然殺傷細(xì)胞水平，降低調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平，明顯改善患者細(xì)胞免疫功能，具有明確的抗腫瘤作用［4］。加之輔料中鱉甲、人參等均具有提高機(jī)體免疫力的功效，因此，膏方組、輔料組均有不同程度的提高荷瘤小鼠免疫功能的作用。膏方組肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率的明顯下降可能與之通過(guò)激活免疫機(jī)制，對(duì)抗腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

但該實(shí)驗(yàn)中，空白組、輔料組、膏方組各組的瘤重以及抑瘤率沒有明顯的差異，其原因主要有以下幾點(diǎn):①輔料中的補(bǔ)益藥可能降低了組方抗癌的效率，影響了抑瘤作用;②臨床服用膏方有一定的指征和禁忌證，一般適用于正虛邪不甚的患者;而C57BL/6小鼠Lewis肺癌的荷瘤模型往往表現(xiàn)為邪甚正不甚虛的證候，小鼠服藥后體質(zhì)量明顯增加，活動(dòng)度較空白組明顯增大，毛色較有光澤，可見模型尚無(wú)法達(dá)到病證結(jié)合的要求。綜上所述，肺巖寧膏方能夠明顯提高Lewis肺癌荷瘤小鼠的免疫功能，對(duì)Lewis肺癌轉(zhuǎn)移有一定抑制作用，但對(duì)Lewis肺癌皮下移植瘤無(wú)明顯抑制作用。關(guān)于中藥膏方抗腫瘤治療的實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物模型的制備，組方結(jié)構(gòu)和量效關(guān)系等尚需進(jìn)一步探討。

［1］張孜，張瑾峰．中藥抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展［J］．中國(guó)現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2006，5（2）:28-32．

［2］趙峰，劉培勛．中藥抗腫瘤及其轉(zhuǎn)移機(jī)制研究進(jìn)展［J］．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，27（2）:178-181．

［3］徐振曄，王中奇，朱晏偉，等．肺巖寧對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移和血清VEGF的影響［J］．上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，17（3）:18-22．

［4］張銘，徐振曄，姜唯潔．肺巖寧方對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌患者血清調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2006，33（8）:916-917．

［5］張暉，徐振曄，王中奇，等．肺巖寧方對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌血清TSGF和免疫功能的影響［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2004，31（6）:518-519．