痰標本采集、儲存及運輸過程對培養結果影響的分析

宋紅煥 孟爾旺 時金艷 彭紅 許衛國

(1.江蘇省疾病預防控制中心 南京 210009;2.江蘇省連云港第四人民醫院 連云港 222000)

痰標本采集、儲存及運輸過程對培養結果影響的分析

宋紅煥1孟爾旺2時金艷2彭紅1許衛國1

(1.江蘇省疾病預防控制中心 南京 210009;2.江蘇省連云港第四人民醫院 連云港 222000)

目的通過分析某市級結核病實驗室痰培養數據,總結縣級運送陽性痰標本至市級進行痰培養工作模式對痰培養結果的影響因素>。方法對江蘇省某市級結核病實驗室2010年4月—10月痰培養數據進行分析>。結果該實驗室初診涂陽病人痰培養共計475例,對痰標本采集、儲存、運輸、培養等各個環節進行分析,得出：不同送樣縣區(P=0.007),不同痰標本數量(P=0.008),不同送樣時間間隔(P=0.037),不同痰標本陽性級別(P=0.001)的痰培養結果均有統計學意義>。結論由縣級運送痰標本至市級進行痰培養,應在采集標本時嚴格按照《中國結核病防治規劃實施工作指南》(以下簡稱《指南》)要求采集即夜晨3份痰標本,提高送檢痰標本質量,盡快送檢,并加強對不同縣區樣品采集運送人員的培訓。

分枝桿菌,結核;痰;細菌學技術

近年來全球基金結核病項目、中國衛生部-蓋茨基金會耐多藥結核項目依次在江蘇省啟動,按照項目設計要求,由縣級結核病實驗室收集涂陽患者痰標本送至市級結核病實驗室進行痰培養,并由市或省級實驗室進行藥物敏感性試驗,以便進一步的診斷和治療。江蘇省中蓋結核病項目某項目市采用縣級運送初診涂陽病人痰標本至市級的工作模式開展相關實驗室檢查。本文探討該工作模式可行性,并分析在這種模式下,影響痰培養結果的主要因素,旨在總結經驗,找出存在的問題和困難,明確今后該模式下痰培養工作的重點,提出改進意見。

1 資料和方法

1.1 資料來源

1.1.1 標本收集 2010年4—10月,江蘇省某市所轄6個縣區475例初診病人陽性痰標本656份。

1.1.2 標本運輸 該市級所轄6縣區將初診涂陽痰標本運至市級,項目要求縣級標本收集后儲存于4℃冰箱,并在3d內送至市級結核病實驗室進行結核分枝桿菌分離。運輸過程采用合格的包裝并要求冷藏。

1.1.3 實驗室痰培養 根據項目要求及《指南》[1]選擇涂片檢查陽性的標本進行培養,患者用于涂片的3份痰標本中選取2份做培養：(1)3份痰標本均為陽性：選取陽性級別高的2份痰標本進行培養;(2)3份痰標本2份陽性：選取2份陽性痰標本進行培養;(3)3份痰標本1份陽性：選取陽性標本和1份質量好的陰性標本進行培養。

該市級實驗室按照規定選取痰標本,采用中性離心處理法[2],前處理完成后,以無菌吸管吸取前處理液0.1 ml,均勻接種在2支酸性羅氏培養基斜面上。保持斜面水平向上37℃培養24 h后,直立放置37℃繼續培養。接種后第3和7 d觀察培養情況,此后每周觀察1次,并在分離培養結果記錄本上記錄生長結果。如第8周末培養基無菌落生長報告培養陰性。

1.1.4 實驗室質量要求 (1)涂陽培陰率(以病例計算)：對于未治療的患者,一般涂陽培陰率不超過10%。(2)污染率(以培養管數計算)：污染率以接種的培養管為計算單位,不以標本為計算單位,一般實驗室污染率在3%～5%之間。

1.2 方法 采用 excel 2003進行數據錄入,SPSS13.0進行數據分析,統計方法采用行×列 χ2檢驗

2 結果

2.1 市級實驗室痰培養檢測結果 2010年4—10月該市級實驗室共收集來自6個縣區的初診涂陽結核病人475例(痰標本656份,其中有652份痰標本進行了培養),其中培養成功385例(即在病人的痰標本中成功分離出結核分枝桿菌),培養失敗90例(培養失敗即在病人的痰標本中未分離出結核分枝桿菌,包括培養陰性及污染,污染指選取培養的病人痰標本所有培養管在生長過程中全部出現污染)。該市級結核病實驗室痰培養污染率為5.1%(67/1 304)。不同縣區痰標本培養結果比較分析見表1。6個縣區培養成功率的差異有統計學意義(P=0.007),其中F縣培養成功率最高(89.4%),E縣培養成功率最低(67.7%),表明在標本采集、儲存、運輸等工作環節有待進一步加強。

2.2 不同季度培養結果比較分析 比較分析不同季度的培養結果,無統計學意義(P=0.065),即不同氣溫下的培養結果無統計學意義,表明6縣區在收集、儲存、運送痰標本時對儲存溫度的控制不是影響培養結果的主要因素(表2)。

2.3 不同送樣間隔培養結果比較分析 送樣間隔(自縣級實驗室收集痰標本至運送到市級實驗室的時間(d)間隔),由表3可知不同的送樣間隔培養結果有統計學差異(P=0.037),且≥7 d的培養成功率最低(65.6%),比較0～3 d的培養成功率(81.2%)與4～6 d的培養成功率(86.6%)差異無統計學意義(P=0.27),不能認為2個送樣間隔有差別。

表1 不同縣區培養結果比較分析

表2 不同季度培養結果比較分析

表3 不同送樣間隔培養結果比較分析

表4 不同接種時間間隔培養結果比較分析

表5 不同送樣間隔+培養間隔培養結果比較分析

2.4 不同接種時間間隔培養結果比較分析 接種時間間隔為市級實驗室在接收痰標本到接種的時間間隔,由表4可知不同接種時間間隔培養結果無統計學差異(P=0.0572)。且市級在接收到痰標本后大部分(96%,456/475)均在3 d以內完成接種。僅有4%病例(19/475)間隔時間在3 d以上。通過分析不同接種時間間隔可間接了解該市級實驗室的工作質量。

2.5 不同送樣間隔+接種間隔培養結果比較分析表3、表4分別分析了不同送樣間隔與不同接種間隔培養結果,旨在從一個側面了解痰標本運輸以及市級實驗室培養工作質量,表5分析了不同送樣間隔+培養間隔培養結果,即痰標本收集至接種的時間間隔,旨在了解2個時間環節對培養結果的總體影響,由表5可知,不同送樣間隔+培養間隔的培養結果差異無統計學意義,但由表5可知,在痰培養日常工作中從樣品采集到接種在7 d內完成較優。

2.6 不同陽性級別培養結果比較分析(以標本計算) 對不同陽性級別痰標本培養結果進行分析,由表6可知,有統計學差異,且與理論相符,陽性級別越高,培養成功率越高。

表6 不同陽性級別培養結果比較分析(以標本計算)

表7 不同標本數量培養結果比較分析

2.7 不同標本數量培養結果比較分析 由表7可知,不同標本數量培養結果有統計學差異(P=0.008)。

3 討論

結核分枝桿菌分離培養是結核病細菌學檢查的主要部分,隨著我國結核病耐藥工作的開展,傳統的涂片已遠遠不能滿足日常工作的需求,新型的耐藥診斷技術在推廣過程中亦需傳統的藥敏方法進行驗證,故結核分枝桿菌培養工作逐步提上日程,而目前在大部分縣級實驗室一時難以達到生物安全二級的要求,本文通過分析江蘇某市級實驗室2010年4月—10月7個月的實驗室初診病人培養登記本及縣區標本運輸登記本,總結縣級運送陽性痰標本至市級進行結核分枝桿菌分離工作模式對痰培養結果的影響因素。現從以下幾個方面進行探討。

3.1 標本數量及質量保證 《指南》對痰標本收集有明確的要求,由本文可知,收集的痰標本份數與培養結果之間差異有統計學意義,收集3份痰標本培養成功率為 93.3%,2份為 88.1%,1份僅為77.0%,另外,還要保證痰標本質量及標本量(一般在3～5ml),在日常工作中應嚴格按照《指南》要求,對醫務人員加強培訓,對就診者進行充分宣教,使其充分了解痰標本收集份數對實驗室診斷結果的影響。具體措施可采用醫務人員示范或者印制宣傳畫、無痰患者采用霧化引痰的方式,保證標本的數量及質量。

3.2 低溫儲存,盡快送檢 本文數據顯示不同的送樣時間間隔有統計學意義,7 d內培養成功率為82.2%,7 d及以上為65.6%,原則上痰標本在采集后應立即運送至培養實驗室進行培養,若不能立即送檢則應將標本置于4℃短時冰箱冷藏,并從留取痰標本至接種不應超過7 d,在運輸過程中應注意冷藏,另外本文通過分析得出不同接種間隔,不同送樣間隔+接種間隔的培養結果比較差異無統計學意義,國外有研究表明,痰標本收集在合格的容器里,冷藏不加防腐劑,即使短時間無冷藏運送到痰培養實驗室亦可有較高的陽性培養率[3],與本次研究結果一致,在3個時間間隔的比較分析中,只有不同的送樣時間間隔差異有統計學意義,由此可見,在整個標本儲存和運輸的過程中,縣級運送標本時間間隔較實驗室接種時間間隔更難以控制,加強痰標本運輸環節管理及質量保證是該工作模式中重要組成部分。

3.3 嚴格按照操作流程,保證實驗室質量 痰培養實驗室在接收到痰標本后應立即進行處理,若不能立即處理則應置于4℃冰箱短時儲存,本文有5例病人標本因各種原因不能盡快送檢,工作人員將標本置于-20℃冰箱保存,從標本留取到接種時間間隔在15～20 d,5例病人標本全部培養成功,故若因各種原因近期不能送檢或者完成標本處理,應置于-20℃冰箱保存。實驗室痰培養檢測應嚴格按照操作程序進行,并每天檢測培養箱溫度,避免因培養溫度過高或者過低引起假陰性。

3.4 污染率分析 該市級實驗室,痰培養污染率為5.1%,現場督導未發現實驗室人員在操作中存在的問題,故污染率偏高的主要原因出現在標本儲存和運輸環節的可能性更大。在該工作模式下,加強標本收集、儲存、運輸質量管理,是實驗室成功檢出結核分枝桿菌的關鍵。

[1]衛生部疾病預防控制局,衛生部醫政司,中國疾病預防控制中心.中國結核病防治規劃實施工作指南[S].北京：中國協和醫科大學出版社,2009：12-13.

[2]中國防癆協會基礎專業委員會.結核病診斷實驗室檢驗規程[M].北京：中國教育文化出版社,2006：30-37.

[3]Lumb R,Ardian M,Waramori G,Syahrial H,Tjitra E,Maguire GP,Anstey NM,Kelly PM.An alternative method for sputum storage and transport formycobacterium tuberculosisdrug resistance survey s[J].Int J T uberc Lung Dis,2006,10(2)：172-177.

Analysis of influencing factors for culture results during sputum collection,storage and transport

Song Honghuan1,Meng Erwang2,Shi Jinyan2,Peng Hong1,Xu Weiguo1
(1.Jiangsu Center for Disease Control and Prevention,Nanjing210009,China;2.the Fourth Hospital of Lianyungang,Lianyungang222000,China)

ObjectiveTo analyze the influencing factors for sputum culture during sputum collection,storage and transport.MethodsThe data of sputum culture from a municipal TB lab in Jiangsu province from April to October in 2010 were analyzed.ResultsThe process including sputum specimen collection,storage,transportation and culture in 475 smear-positive patients were analyzed,and found that the sputum specimens from different counties(P=0.007),different specimen quantity(P=0.008),different specimen storage time(P=0.037)and different positive class(P=0.001)all had statistic significance for culture quality.ConclusionsThe procedure of specimen collection,storage,transportation and culture influence the result of culture.Their standard procedure required by the NTP should be strictly followed,and the training for health workers in county laboratory should be strengthened to improve sputum culture quality.

Mycobacterium tuberculosis;sputum;bacteriological techniques

Xu Weiguo(jsjkmck@163.com)

許衛國(jsjkmck@163.com)

2011-04-08)

(本文編輯：張曉進)