蓮房花青素誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡的研究

梁慧敏 時(shí)小燕 隨裕敏 朱 斌

原花青素是一種廣泛存在于植物內(nèi)的酚類聚合物，在葡萄皮和籽內(nèi)含量最高，有很強(qiáng)的生物學(xué)活性及藥理作用［1］。有報(bào)道，原花青素對(duì)乳腺癌、肺癌及白血病等腫瘤有顯著的抑制作用［2］。而對(duì)蓮房原花青素(procyanidins from the seedpod of the lotus，LSPC)的研究較少。目前發(fā)現(xiàn)LSPC有抗腫瘤作用，為進(jìn)一步探討LSPC抑制細(xì)胞增殖的機(jī)制，本研究探討了LSPC是否能誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721細(xì)胞凋亡，以期為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 材料、化學(xué)試劑和儀器 人肝癌細(xì)胞 SMMC-7721購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;胎牛血清購(gòu)于Gibco公司;RPMI 1640購(gòu)于Gibco公司;LSPC由本實(shí)驗(yàn)室自制，純度＞98%為棕褐色粉末;DMSO、MTT均購(gòu)自Promega公司;其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 MTT實(shí)驗(yàn) 選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SMMC-7721細(xì)胞，將濃度為1×105/ml細(xì)胞接種于96孔板(200μl/孔)。24 h后換含不同濃度(0.025，0.25，2.5，25，250 μg/ml)LSPC 培養(yǎng)液200 μl，分別于24，48 h后棄上清，加5 mg/ml MTT液20 μl/孔，4 h后棄上清，加DMSO 150μl/孔，振搖待藍(lán)色晶體溶解，測(cè)定570 nm吸光值(A值)，空白孔調(diào)零。設(shè)陰性孔(加200 μl含細(xì)胞完全培養(yǎng)基)和空白孔(只加200μl完全培養(yǎng)基)，每組濃度設(shè)3個(gè)平行孔，取均值。按下列公式計(jì)算抑制率:

細(xì)胞增殖抑制率/%=(對(duì)照組A值-處理組A值)/(對(duì)照組A值-空白組A值)×100%。

2 結(jié)果

不同濃度LSPC對(duì)SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響 由圖1可知，LSPC作用24 h，低濃度組(0.025μg/ml)細(xì)胞增殖抑制率與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中高濃度(0.25～250 μg/ml)組顯著高于對(duì)照組;LSPC作用48 h，試驗(yàn)組細(xì)胞抑制率均顯著高于對(duì)照組。

圖1 LSPC對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖抑制率的影響

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，一些中藥復(fù)方或單味藥有效成分有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用［3］。原花青素是植物中多酚類化合物，也是一種氧自由基清除劑和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制劑［4，5］。蓮房中含蛋白質(zhì)、脂肪、糖、維生素 B2及微量蓮子堿等，有“化瘀止血”功效。

本文用MTT法觀察LSPC對(duì)SMMC-7221細(xì)胞增殖的抑制作用，發(fā)現(xiàn)LSPC在0.25～250μg/ml對(duì)SMMC-7221細(xì)胞凋亡有顯著的抑制(P＜0.01)，且細(xì)胞抑制率呈濃度、時(shí)間依賴，與文獻(xiàn)報(bào)道LSPC的作用類似［6］。至于LSPC誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡的具體過(guò)程，及哪些分子參與，還需進(jìn)一步證實(shí)。本研究發(fā)現(xiàn)了LSPC能抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡，為傳統(tǒng)中藥在腫瘤治療研究和應(yīng)用開拓新思路。

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