溫州地區阿爾茨海默病患者精神行為障礙與載脂蛋白E基因多態性的關系

朱未名 虞海萍 林長闖 胡海燕

(溫州市鹿城區精神病醫院，浙江 溫州 325003)

阿爾茨海默病(AD)是老年人的常見病、多發病。其首要癥狀是智力、記憶力、感官定向能力、判斷力、語言思維能力不可逆的進行性退化，并常伴有性格改變。其病理特征為:神經元外的β-淀粉樣蛋白(Aβ)聚集形成老年斑(SP)，神經元內tau蛋白異常聚集形成神經纖維纏結(NFTs)，腦皮質、海馬膽堿能神經元及其突觸大量丟失，累及皮層動脈和小動脈出現血管淀粉樣變性。從基因多態性角度來審視本病成為重要的研究思路。人們發現了越來越多的與AD相關的基因，使其在預測和治療AD方面起到積極的作用。本研究旨在探討溫州地區AD病人的精神行為特征與載脂蛋白E(ApoE)基因之間的關系。

1 對象和方法

1.1 對象

1.1.1 病例收集 2009年2至12月在溫州市3個社區里對60歲以上老人進行篩查，篩選出AD患者51例，選擇同社區非AD老年人54例進行對照。AD組男20例，女31例，年齡60～90〔平均(71.34±7.34)〕歲，其中文盲18例，小學13例，初中14例，高中4例，大學2例。簡易智力狀態檢查(MMSE)評分(10.4±7.9)分，日常生活活動能力量表(ADL)評分(61.3±17.2)分。對照組54例，男21例，女33例，平均年齡(70.68±8.65)歲。其中文盲11例，小學15例，初中18例，高中6例，大學4例。MMSE評分(26.2±3.2)分，ADL評分(27.3±6.9)分。AD組與對照組之間無任何血緣關系，所有患者居住溫州1年以上。各組間患者的性別、年齡分布、病程比較無顯著性差異(P＞0.05)。

1.1.2 診斷標準 采用DSM-IV-RAD關于AD的診斷標準和老年性癡呆和相關疾病學會(NINCDS-ADRDA)的可能AD標準〔1〕，MMSE評分為13～24分的輕、中度癡呆患者;年齡≥50歲的男性或絕經后的女性;Hachinski缺血指數＜4分;無重大軀體疾病;排除腦外傷、抑郁性障礙、研究前1個月使用精神藥物或血管活性藥物者。

1.2 認知功能及精神行為檢查 包括MMSE、ADL、阿爾茨海默病行為病理評定量表(BEHAVE-AD)。其中BEHAVE-AD對AD患者2 w精神行為進行評定，共有25條項目，按7個分量統計:偏執和妄想觀念、幻覺、行為紊亂、攻擊行為、日夜節律紊亂、情感障礙、焦慮和恐懼。收集符合上述AD診斷標準的患者及60歲以上正常對照者，分別進行抽血檢查。AD患者由二名精神科醫師進行診斷評價，評定認知功能、情感行為障礙，資料存檔。

1.3 ApoE基因檢測

1.3.1 DNA提取 抽取5 ml全血，EDTA抗凝，采用苯酚-氯仿法抽提基因組DNA。

1.3.2 ApoE基因的PCR擴增 根據引物設計基本原則與已知ApoE基因序列，采用以下引物(由上海生工生物技術公司合成)，P1:5'ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC3';P2:5'TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA3'。PCR反應體系:總體系30 μl，基因組 DNA 2 μl，10 × Buffer(含鎂)3 μl，4 × dNTP 2 μl，上游及下游引物各1 μl，TaqDNA 聚合酶0.2 μl，無菌雙蒸水21μl。PCR反應條件:97℃預變性5 min，然后按95℃變性1 min，67℃退火1 min，72 ℃延伸2 min，共30個循環，最后進一步72℃延伸7 min，4℃保存。所得產物用2%瓊脂糖凝膠電泳進行鑒定，紫外光下呈現265 bp特異PCR擴增片段。

1.3.3 ApoE基因型鑒定 在8μl PCR擴增產物中加入0.5μl限制性內切酶HhaⅠ (寶生物公司)，10倍緩沖液1μl，無菌雙蒸水0.5μl，37℃保溫6 h。酶切產物加入8%聚丙烯酰胺凝膠板樣品槽中，8 V/cm電壓下垂直電泳1.5 h后，溴化乙錠染色，紫外光下觀察，根據電泳帶型確定ApoE的基因型。

1.4 統計學處理 應用SPSS 13.0統計軟件，ApoE基因型和等位基因頻率以百分率(%)表示，組間比較用χ2檢驗。

2 結果

2.1 AD組精神行為障礙與ApoE基因型頻率比較 AD組精神行為障礙分7個分量統計，主要包括偏執妄想觀念、幻覺、行為紊亂、攻擊行為、日夜節律紊亂、情感障礙、焦慮和恐懼等方面。在ApoE的基因型中ε4/4在偏執和妄想觀念、幻覺及行為紊亂、攻擊方面與其他基因型有差異(P＜0.05)。見表1。

表1 AD精神行為障礙與ApoE基因型頻率比較〔n(%)〕

2.2 AD組與對照組ApoE基因頻率分布 共檢出ApoE基因型有 ε2/2、ε2/3、ε3/3、ε2/4、ε3/4、ε4/4，AD 組與對照組 ApoE基因型頻率分布比較 ε2/3、ε3/4、ε4/4有差異(P ＜0.05)。等位基因兩組比較ε2、ε4有差異(P＜0.05)。見表2，表3。

表2 AD組與對照組ApoE基因型頻率分布〔n(%)〕

表3 AD組與對照組的等位基因頻率分布〔n(%)〕

3 討論

ApoEε4被認為是AD的危險因素，可以影響AD的發病時間，ε4 的危險效應與年齡、性別相關〔4〕。陳等等〔5〕對中國漢族人群中160例散發性AD患者和195例正常對照組老年人ApoE基因多態性分布的差異進行了研究，結果表明，ApoE三種等位基因 ε2、ε3和 ε4的頻率在 AD組和對照組分別為0.056、0.713、0.231 和 0.082、0.844、0.074。ApoE 等位基因攜帶個體患AD的危險為非攜帶個體的3.82倍。麥以成等〔6〕對廣東佛山地區88例晚發AD及97例正常老年人ApoE基因多態性進行了比較研究，結果表明，ε4基因頻率 AD患者為0.188，正常老年人為0.082，并與晚發AD呈正相關。本文研究結果也證實了ε4基因在AD發病中起重要作用。

ApoE基因與中樞神經系統損傷及智力障礙有關。張許來等〔7〕的結果提示，AD患者在偏執和妄想、幻覺、行為紊亂和攻擊行為等方面與正常對照組比較差異顯著，而ApoE基因檢查結果顯示攜帶ApoEε4基因的AD患者精神行為障礙更為明顯。對AD患者執行功能障礙與ApoE基因相關性的研究結果顯示，AD患者的記憶、執行功能、計算力較健康對照組有明顯差異，而攜帶ε4基因型者認知功能損害更明顯〔8〕。任艷峰等〔9〕結果表明，ApoEε4 與 ApoEε2 基因均與認知有關，其中ApoEε4基因是輕度認知障礙的可疑危險因素，而ApoEε2可能是降低輕度認知障礙危險性的因素。

ApoE基因可能影響中樞神經系統和智力。在對ApoEε4基因缺失的純合子和雜合子鼠在Morris迷宮中進行空間學習能力測驗中發現，純合子鼠無此學習能力，而雜合子鼠則無任何困難。Raber等的研究發現ApoEε4同ApoEε2及ApoEε3相比增加了對認知損害的危險性〔10〕。海馬及毗鄰皮質區對ApoEε4基因的損傷作用有較強的易感性，攜帶ε4基因的非癡呆老年人在言語學習實驗中得分比未攜者低〔11〕。ApoE基因影響中樞神經系統及人類智力的機制可能是多方面的。首先ApoE與中樞膽堿能系統功能有關。其次ApoE與神經突觸的整復有關。ApoEε4等位基因與AD病人海馬萎縮有關，它可能在AD的病理機制中扮演了一定的角色。本研究也表明AD組精神行為障礙明顯，通過BEHAVE-AD量表分7個分量測評，主要包括偏執妄想觀念、幻覺、行為紊亂、攻擊行為、日夜節律紊亂、情感障礙、焦慮和恐懼。結果表明，在ApoEε4的基因型中ε4/4在偏執和妄想觀念、幻覺及行為紊亂、攻擊方面與其他基因型有差異。

1 American Psychiatric Association.Diagnostic and statistical Manual of Mental Disorders〔M〕.4th ed.Washington DC:American Psychiatric Association，1994:143.

2 洪 震.我國近年阿爾茨海默病流行病學研究現狀與展望〔J〕.老年醫學與保健，2005;11(4):195-8.

3 屈秋民，喬 晉，楊劍波，等.西安地區中老年人的癡呆患病率調查〔J〕.中華老年醫學雜志，2001;20(4):283-6.

4 Munoz D G，Feldman H.Causes of Alzheimer’s disease〔J〕.CMAJ，2000;162(1):65-72.

5 陳 等，張俊武，張振馨，等.載脂蛋白E基因多態性與阿爾茨海默病〔J〕.遺傳學報，2003;30(12):1167-70.

6 麥以成，羅有年，顧 鴻，等.載脂蛋白E基因多態性與Alzheimer病的關聯研究〔J〕.臨床精神醫學雜志，2007;17(6):365-6.

7 張許來，張曉莉，陶領知，等.阿爾茨海默病精神行為障礙與載脂蛋白E基因研究〔J〕.臨床精神醫學雜志，2008;18(3):156-8.

8 張許來，張曉莉，陶領知，等.阿爾茨海默病的執行功能障礙與APOE基因相關性研究〔J〕.中國老年學雜志，2007;27(19):1897-9.

9 任艷峰，曲成毅，苗茂華.輕度認知障礙與APOE基因多態性關系〔J〕.中國公共衛生，2007;23(7):862-3.

10 Raber J，Wong D，Buttini M，et al.Isoform-specific effects of human apolipoprotein E on brain function revealed in ApoE knockout mice:increased susceptibility of females〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，1998;95(18):10914-9.

11 Bondi MW，Salmon DP，Monsch AU，et al.Episodic memory changes are associated with the ApoE-epsilon 4 allele in nondemented older adults〔J〕.Neurology，1995;45(12):2203-6.