不同年齡組大鼠抑郁癥模型評價

董海影 興桂華 張曉杰

(齊齊哈爾醫學院醫學技術學院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

抑郁癥是一種包括多種精神癥狀和軀體癥狀的復雜的情感性精神障礙，其發病率和自殺率高，危害性大〔1〕。研究發現，大腦增齡性變化是神經系統退行性疾病的最初級階段變化〔2〕。因此，對于大腦中樞神經系統增齡性變化的研究可以作為多種神經系統疾病的研究基礎，為防治神經退行性疾病提供新的思路。本實驗從行為學和生化兩個方面對不同年齡組大鼠抑郁癥動物模型進行評價，旨在分析年齡的增長與抑郁癥發生、發展的相關性，為探討抑郁癥的發病機制和防治抑郁癥提供理論基礎和實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物與試劑 SD雄性大鼠60只:幼年(4～5周齡)組20只，體重90～110 g;成年(4～5個月齡)組20只，體重360～380 g;中年(14～15個月齡)組20只，體重600～620 g。由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證編號:SCXK(京)2007-0001。單胺氧化酶(MAO)測定試劑盒、考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)，促腎上腺皮質激素釋放激素(CRH)、促腎上腺皮質激素(ACTH)、皮質酮/腎上腺酮(CORT)試劑盒(ADL，美國)。

1.2 方法

1.2.1 分組 大鼠在自然晝夜節律光照、室溫18℃ ～20℃、無噪音環境下，適應性生活1 w后稱重，開野法(Open-Field)評分，每個年齡組隨機分為對照組和模型組各10只。

1.2.2 造模 模型組單籠飼養，進行21 d慢性輕度不可預見性應激刺激(chronic mild unpredictable stress，CMUS)〔1，2〕:電擊足底(電流強度 1 mA，電壓 45 mV，10s/次，間隔 1 min，共 30次)、冰水游泳(4 ℃，5 min)、搖晃(1 次/s，15 min)、夾尾(3 min)、熱應激(45℃，5 min)、禁食(24 h)、禁水(24 h)、晝夜顛倒、束縛(8 h)、傾斜鼠籠與潮濕墊料(100 g墊料中加入200 ml水)。每日給予1種刺激，順序隨機。

1.2.3 Open-Field 評分實驗裝置為高40 cm、底邊長80 cm、周壁涂黑、底板為白色的無蓋方箱，底板用黑線劃成16 cm×16 cm的25個方格。實驗在安靜環境下進行，將大鼠輕放于方箱底板中心，每只動物單獨測定，每次測定時間為3 min，兩只動物之間用體積分數為10%的酒精清洗方箱周壁及底板，以免上次動物余留的異味影響下次實驗結果。計分方法:以大鼠穿越底面格數為水平活動得分，大鼠4只腳均在同一格子內為一格，穿越一格計1分，如大鼠沿線行走，以每10 cm為1分;以大鼠直立次數為垂直活動得分，雙足離開底面為標志。兩項之和為敞箱實驗總得分。

1.2.4 糖水消耗量實驗 造模前，大鼠進行1%蔗糖水攝取訓練，即每籠同時放置2個水瓶，第一個24 h，2瓶均裝有1%蔗糖水;隨后的24 h，1個瓶裝有1%蔗糖水，1個瓶裝純凈水。1%蔗糖水消耗量:24 h禁食禁水后，測定1 h動物飲用1%蔗糖水和純水的量，以攝入溶液的量(mg)/動物體重(g)和糖水偏愛(糖水偏愛=糖水消耗/總液體消耗×100%)進行評定。

1.2.5 指標檢測

1.2.5.1 CRH、ACTH、CORT含量測定 行為學測試后，經大鼠眼靜脈采血，靜置4 h，4℃離心分離血清(1 500 r/min，10 min)，采用ELISA試劑盒測定各激素含量。

1.2.5.2 MAO活性的測定 斷頭處死大鼠，冰上分離出海馬，按照重量和體積比1∶9的比例，加入預冷的生理鹽水，在冰浴中制成10%的組織勻漿，4℃離心分離上清(3 500 r/min，10 min)，按試劑盒說明測定MAO活性，同時測定組織蛋白含量。

1.3 統計學分析 所有數據運用SPSS13.0統計軟件進行處理，數據以x±s表示。

2 結果

2.1 年齡對抑郁癥模型大鼠行為學指標的影響 見表1。

2.2 年齡對抑郁癥模型大鼠生化指標的影響 見表2。

表1 各組大鼠應激前后Open-Field行為測定和液體消耗實驗比較(x ± s，n=10)

表2 各組大鼠海馬區MAO活性和血清CRH、ACTH、CORT含量的比較(x±s)

3 討論

3.1 抑郁癥模型行為學指標評價 CMUS抑郁癥模型理論依據與人類抑郁癥中慢性、低水平的應激源導致抑郁癥的發生并加速抑郁癥發展的機制更接近，CMUS引起的行為改變能夠持續數周甚至數月被觀察到，且經典的抗抑郁治療對之有效，故作為抑郁模型具有較高的價值，常用于抑郁癥病理生理機制的研究及抗抑郁藥物的篩選〔3〕。CMUS抑郁癥模型模擬了抑郁癥的核心癥狀——快感缺乏以及社會活動能力和探索行為能力下降等癥狀。糖水消耗實驗和敞箱實驗是檢測模型成功與否的有效客觀指標。糖水消耗量反映動物的獎賞反應程度，水平活動反映動物的活動度，垂直活動反映大鼠探究行為和好奇程度。本實驗采用CMUS和孤養兩種經典模型結合的造模方式，利用孤養模擬人類失去社會和家庭支持的孤獨狀態，長期輕度不可預見應激模擬抑郁癥發病的壓力源，造成孤養動物的抑郁狀態。模型組動物經21 d慢性綜合應激后水平穿越格數減少，直立次數減少，糖水消耗量和糖水偏愛度降低，表現出抑郁癥患者具有的精神運動遲滯、興趣喪失、快感缺乏的特征。三個年齡段的大鼠模型組比較，隨著年齡的增長，抑郁癥模型大鼠的行為學指標變化更加顯著。

3.2 抑郁癥模型生化指標評價 Schildkraut和Bunney提出的中樞5-羥色胺(5-hydroxy tryptamine，5-HT)和去甲腎上腺素能(noradrenaline，NE)低下假說是抑郁癥發病機制的經典學說。MAO是5-HT和單胺類神經遞質的主要代謝酶，MAO活性升高會導致突觸間隙二者含量的降低，引起抑郁〔4〕。并且經過多方研究證明〔5～7〕，抑郁癥時下丘腦-垂體-腎上腺軸 (hy-Pothalamus-pitutary-adrenal gland，HPA)功能亢進。本實驗中模型組較對照組MAO活性均升高，CRH、ACTH、CORT含量均升高，中年模型組較其余兩個模型組 MAO活性均升高，CRH、ACTH、CORT含量均升高，說明相同刺激強度下，隨著年齡的增長，抑郁癥模型大鼠的生化指標變化亦更加明顯。

1 Kessler RC，Berglund P，Demler O，et al.The epidemiology of major depressive disorder:results from the National Comorbidity Survey Replication(NCS-R)〔J〕.JAMA，2003;289(23):3095-105.

2 Oda Y.Choine acetyltransferase:the structure，distribution and pathologic changes in the central nervous system〔J〕.Pathol Int，1999;49(11):921-37.

3 李曉秋，許 晶.抑郁動物模型的研究進展〔J〕.中華精神科雜志，2002;35(3):184-5.

4 Du L，Faludi G，Palkovits M，et al.High activity-related allele of MAO-A gene associated with depressed suicide in males〔J〕.Neuroreport，2002;13(9):1195-8.

5 Pitchot W，Herrera C，Ansseau M.HPA axis dysfunction in major depression:relationship to5-HT(1A)receptor activity〔J〕.Neuropsychobiology，2001;44(2):74-7.

6 Hauger RL，Shelat SG，Redei EE，et al.Decreased corticotropin-releasing factor receptor expression and adrenocorticotropic hormone responsiveness in anterior pituitarys cells of Wistar-Kyoto rats〔J〕.J Neuroendocrinol，2002;14(2):126-34.

7 曹碧茵，施建蓉.心理應激動物模型的研制及其應用〔J〕.中國行為醫學科學，2005;14(2):191-2.