丙型肝炎患者血清中HCV抗體、HCV-RNA、ALT聯合檢測及臨床意義

彭澤軍

(湖北省十堰市武當山醫院，湖北 十堰 442714)

丙型肝炎病毒(HCV)是小的有包膜的單股正鏈RNA病毒，屬黃病毒科丙型肝炎病毒屬。顆粒大致呈球形，直徑約50nm，基因全長約9400個核苷酸[1]，主要由輸血和注射等途徑傳染，在HCV感染后，有75%～85%的病人轉變為慢性肝炎，其中10%～15%發展為肝纖維化，最終每年有1%～4%成為肝癌，故建立一種針對HCV的具有較高敏感度、特異性和穩定性的檢測方法，對HCV感染的早期診斷和治療具有重要意義。關于丙型肝炎病毒含量與肝損傷之間的關系至今尚無定論，本文通過檢測丙肝病人治療過程中血清HCV-RNA含量與抗-HCV及其ALT的變化，為丙型肝炎的診斷和治療提供科學依據，為不同病程患者提供有價值的檢測方案。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2010年1月至2011年7月在我院治療的174例丙型肝炎患者，診斷均符合2000年西安全國傳染病與寄生蟲病學術會議修訂的病毒性肝炎防治方案中擬訂的診斷標準，所有病例均排除甲、乙、戊型肝炎，且在3月內未使用免疫抑制劑。其中急性丙型肝炎者103例，男性45例，女性58例，年齡20～67歲；慢性丙型肝炎者71例，男性25例，女性46例，年齡23～62歲，兩組年齡、性別差異無統計學意義。抽取靜脈血(HCV-RNA檢測標本用帶分離膠專用試管抽血3ml)，靜脈血標本離心取血清，放置于-80℃冰箱保存。

1.2 檢測方法

1.2.1 抗-HCV測定 采用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)，樣品OD值/C0值(S/CO值)≥1為 HCV抗體反應陽性，試劑由德國歐盟公司提供，檢測方法嚴格按照試劑說明書進行。

1.2.2 HCV-RNA檢測 采用熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(FQ-RT-PCR)檢測，儀器用英國TECANE PC擴增儀，試劑由德國歐盟公司提供，操作方法嚴格按照試劑說明書進行，定量測定范圍為103～105copies/ml， 低于 103copies/ml判定為 HCV-RNA陰性。

1.2.3 ALT檢測 血清ALT檢測采用干化學試劑條法，正常參考值：5～40U/L(37℃)，用 Reflotron plus 快速全自動干式生化分析儀及專用試劑條，檢測操作步驟及結果判斷嚴格按照試劑盒說明書進行。

2 結果

2.1 HCV-RNA及抗-HCV檢測 在急性丙型肝炎組中抗－HCV和HCV-RNA同時陽性所占百分率(30.09%)顯著低于慢性丙型肝炎患者 (59.15%)(P＜0.05)；抗-HCV陰性和HCV-RNA陽性在急性丙型肝炎組所占百分率(56.31%)顯著高于慢性丙型肝炎患者 (25.35%)(P＜0.05)；而抗-HCV陽性和HCVRNA陰性在急性丙型肝炎和慢性丙型肝炎患者中存在的百分率均較低(13.60%和15.49%)，兩者間差異不具有統計學意義(P＞0.05)。 (見表1)。

表1 急慢性丙型肝炎HCV-RNA及抗－HCV檢測結果(%)

2.2 HCV-RNA含量變化與ALT異常率比較

在治療前，根據HCV-RNA含量 (copies/ml)將174例HCV患者分為大于105copies/ml(高劑量組)、103～105copies/ml(中劑量組)、小于 103copies/ml(低劑量組)，共有127例標本ALT異常，其異常率隨著HCV-RNA含量的升高而增高，經相關性分析，ALT異常率與HCV-RNA含量呈正相關性 (γ=0.726，P＜0.01)，且ALT含量與HCV-RNA含量呈正相關性(γ=0.697，P＜0.01)。 (見表2)。

表2 174例丙型肝炎患者血清HCV-RNA與血清ALT含量關系

3 討論

丙型肝炎病毒(HCV)是導致慢性肝炎、肝硬化和肝細胞癌的主要原因之一，盡早診斷和治療可望終止或延緩病變發展，從而改善患者預后。目前對丙型肝炎篩查的實驗室指標主要是檢測血清中的抗-HCV，而對現癥患者的診斷多依據抗-HCV及HCV-RNA陽性結果，但抗－HCV檢測存在 “窗口期”，HCV感染后血清中產生HCV抗體的平均時間即窗口期為82天[2]，因此早期感染者易漏診；而且產生后可長期存在，不能區別既往感染和現癥感染;受機體免疫水平影響、使用免疫抑制劑治療的患者或患其它嚴重疾病導致體內免疫低下的病人，均可致體內抗體無法檢出。同時抗HCV ELISA法試劑盒采用的酶標抗體是廣譜抗人IgG抗體，一些慢性和感染性疾病如結核、肝病患者及自身免疫性疾病患者，由于體內IgG含量高，易產生假陽性結果。因此單憑抗-HCV檢測容易漏診。HCV-RNA能直接反映病毒是否存在及復制和傳染性，其陽性是判斷HCV感染和觀察抗病毒效果的最直接、最可靠證據。感染HCV后1～2周即可在血中檢出，陽性出現早，“窗口期”短。但感染后的病毒血癥有持續、一過和間隙3種時間模式，此時可使HCV-RNA檢測結果為假陰性。一些晚期肝病患者的病毒載量太低，也無法測出。ALT存在于肝細胞的胞質中，在肝細胞損傷時通過細胞膜釋放入血中，造成血清ALT升高，血清ALT水平是反映肝臟組織損傷最敏感的指標之一，肝臟組織細胞的急性損傷越重，ALT水平越高。同時檢測血清ALT，為臨床診斷丙型病毒肝炎，判斷病情和療效提供參考依據。本實驗研究結果顯示，抗-HCV和HCV-RNA同時陽性在急性丙型肝炎中顯著低于慢性丙型肝炎患者，而抗-HCV陰性和HCV-RNA陽性在急性丙型肝炎顯著高于慢性丙型肝炎，同時發現在急性丙型肝炎和慢性丙型肝炎患者中存在少部分抗-HCV陽性而HCV-RNA陰性的患者，分析原因可能是由于體內HCV-RNA雖已被清除，但抗-HCV仍然存在。ALT異常率及平均含量均隨HCV-RNA含量的增高而增高。對患者血清含量的對數值與ALT含量進行相關性分析，表明HCV-RNA含量與ALT含量及異常率均呈正相關，ALT水平升高反映肝細胞破壞程度加劇，提示HCV-RNA含量與肝功能損傷呈正相關。

綜上所述，抗-HCV與HCV-RNA及ALT同時檢測可提高對丙型肝炎的診斷，HCV-RNA是反映HCV復制的可靠指標，結合ALT的結果可幫助了解HCV在體內的復制狀況及肝臟的炎癥狀態。聯合檢測血清中HCV抗體、HCV—RNA、ALT在正確診斷和預測肝臟損傷及早期療效觀察中具有重要的臨床意義。

[1]桂亞萍,鄭 惠,沃 垮,等.九江地區丙型肝炎病毒基因分型[J].實驗與檢驗醫學,2010,28(5):514.

[2]史玉嶺.丙型肝炎核心抗原檢測在丙型肝炎診斷中的應用價值[J].實驗與檢驗醫學,2009,27(1):47.