抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體檢測在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中的應(yīng)用

張小蓮，徐春晴，張聰玲，劉和平

(宜春市人民醫(yī)院檢驗科，江西 宜春 336000)

抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 (antineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA)指與中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞胞漿中溶酶體酶發(fā)生反應(yīng)的抗體。當(dāng)中性粒細(xì)胞受抗原刺激后，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶物質(zhì)及白細(xì)胞抗原生成，刺激機體而產(chǎn)生ANCA，與臨床一些炎癥疾病密切相關(guān)的抗體。自從Davies等[1]在壞死性腎小球腎炎和系統(tǒng)性血管炎患者循環(huán)物中首先發(fā)現(xiàn)ANCA以來，在國際上逐漸引起人們的重視。現(xiàn)已證實，ANCA是系統(tǒng)性壞死性血管炎的血清標(biāo)志抗體，被廣泛應(yīng)用于血管炎的診斷和鑒別診斷。Schnabel等[2]報道在SLE中僅存在核周型 ANCA(P-ANCA)，而 Pauzner等[3]報道在SLE中還發(fā)現(xiàn)存在胞漿型ANCA(C-ANCA)，本文用間接免疫熒光技術(shù) (IIF)對92例SLE患者作血清ANCA的檢測，以探索ANCA與SLE的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例選擇 SLE患者92例，均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會1982年診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常獻血員18例。所有血清標(biāo)本置-20℃冰箱保存?zhèn)錂z。

1.1.2 試劑來源 ANCA陽性參考血清、熒光素標(biāo)記的羊抗人IgG均購自德國歐蒙公司。

1.1.3 所用儀器 電熱恒溫水浴箱 (北京東霞科學(xué)儀器廠)，熒光顯微鏡(日本Nikon公司)。

1.2 檢測方法 間接免疫熒光法(IIF)將被檢血清用PBS(pH 7.2)吐溫緩沖液作1:10稀釋，滴加于基質(zhì)片上，置室溫孵育30min，用PBS(pH 7.2)吐溫緩沖液洗滌3次，每次5min，再用熒光標(biāo)記的羊抗人IgG復(fù)染室溫孵育30min，用PBS(pH 7.2)吐溫緩沖液洗滌3次，封片。最后用熒光顯微鏡觀察結(jié)果。結(jié)果陽性者再作1:20、1:40、1:80稀釋檢測。結(jié)果判斷：乙醇固定的抗原底物片，熒光顯微鏡下可見均勻分布的中性粒細(xì)胞，陰性時中性粒細(xì)胞胞漿部分無特異性熒光染色，細(xì)胞較暗，有時有一部分粒細(xì)胞(嗜酸性粒細(xì)胞，嗜堿性粒細(xì)胞)出現(xiàn)顆粒熒光。乙醇固定的抗原底物片，主要表現(xiàn)為兩種陽性熒光型別：一種是均勻分布在整個中心粒細(xì)胞胞漿中顆粒型熒光，細(xì)胞核無熒光稱之為胞漿型ANCA(cANCA)，另一種是圍繞中性粒細(xì)胞胞核的平滑的帶狀熒光稱之為核周型ANCA(pANCA)。近年來還報道一種非典型ANCA(X-ANCA)。同時，利用基質(zhì)片中存在少量淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞來區(qū)分是ANA還是真正的P-ANCA，前者與淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，后者則不能。

2 結(jié)果

2.1 SLE患者中ANCA的陽性率 92例SLE患者中ANCA陽性者22例，陽性率23.9%；其中1∶80稀釋陽性者7例，1:40稀釋陽性者10例，1:20稀釋陽性者5例；P-ANCA陽性者21例，C-ANCA陽性者1例。正常對照組18例均為陰性。見表1。

2.2 SLE患者活動組與非活動組ANCA陽性率比較 92例SLE患者根據(jù)Urowitzde分類標(biāo)準(zhǔn)[4]，分為活動組和非活動組，結(jié)果提示：54例活動組中ANCA陽性率為31.5%(17/54)，38例非活動組中ANCA陽性率為13.2%(5/38)，兩組陽性率相比差異有顯著性(P＜0.05)。 見表2。

表1 SLE患者中ANCA的陽性率

表2 SLE患者活動組與非活動組ANCA陽性率比較

3 討論

ANCA自從1990年發(fā)現(xiàn)以來一直被作為系統(tǒng)性血管炎的血清學(xué)標(biāo)記性抗體，尤其對于血管炎的診斷與鑒別診斷具有重要的意義。IIF法可將ANCA分為C-ANCA和P-ANCA以及非典型ANCA(X-ANCA)。其中C-ANCA主要靶抗原是蛋白酶3(PR-3)，cANCA主要見于韋格納肉芽腫，系Wegener(WG)肉芽腫病的特異性抗體。C-ANCA致上下呼吸道壞死，肉芽腫形成，C-ANCA陽性也可見于少數(shù)顯微鏡下多動脈炎 (MPA)、Churg-Strauss綜合征(CSS)、結(jié)節(jié)性多動脈炎(PAN)、少數(shù)巨細(xì)胞動脈炎、過敏性紫癜、白細(xì)胞破碎性皮膚性血管炎和白塞病。P-ANCA的主要靶抗原是髓過氧化物酶，pANCA不如cANCA具有診斷特異性。pANC陽性主要見于特發(fā)性壞死性新月體性腎小球腎炎(NCGN)，顯微鏡下多動脈炎，也可見于Churg-Strauss綜合征(CSS)、結(jié)節(jié)性多動脈炎(PAN)、SLE、RA、SS、SSc。 在 NCGN、MPA中pANCA和cANCA陽性率幾乎相同。相對而言，pANCA患者的血管炎病變程度重，常有多系統(tǒng)損害。。X-ANCA的主要靶抗原目前還不十分清楚，鏡下與P-ANCA不易區(qū)分，故有的實驗室將其歸入P-ANCA，臨床上主要與潰瘍性結(jié)腸炎、自身免疫性肝炎有關(guān)。ANCA在SLE中的發(fā)病機制尚未完全清楚，有作者提出ANCA是通過激活毛細(xì)血管中的中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞，引起溶菌酶的釋放，導(dǎo)致血管損傷，或ANCA引發(fā)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫協(xié)同造成組織損傷的結(jié)果[1]。有關(guān)ANCA在SLE中的作用及其特異性仍有爭議，還有待作更深一步的研究。

本文92例SLE患者中發(fā)現(xiàn)C-ANCA和PANCA兩種類型的ANCA。ANCA的陽性率為23.9%(22/92)，其中C-ANCA的陽性率為1.1%(1/92)，低于Pauzner等報道的10.5%[3]。P-ANCA的陽性率為22.8%(21/92)，與文獻報道的 25%基本一致[2，3]。在 22例ANCA陽性中，1:80稀釋陽性有7例，1:40稀釋陽性者10例，1:20稀釋陽性者5例。1:80陽性者多為病情惡化或復(fù)發(fā)者，臨床上有腎臟損害甚至腎衰竭、蛋白尿,血尿、管型尿、出現(xiàn)多發(fā)性漿膜炎和面部皮疹，雷諾現(xiàn)象明顯，屬病情活動組；我們的實驗結(jié)果顯示具有紫癜、瘀斑、多形紅斑、指尖潰瘍、口腔潰瘍等皮膚血管炎的SLE患者ANCA陽性率較無皮膚血管炎表現(xiàn)的SLE患者顯著增高。提示活動組SLE患者較非活動組具有更明顯的血管炎。這與活動組SLE患者ANCA的陽性率明顯高于非活動組的結(jié)果是一致的。因此，有理由認(rèn)為SLE患者中ANCA的出現(xiàn)提示了臨床上合并血管炎的存在，它表明了病情的活動性，故可以作為臨床上提示病情活動的一個有用的指標(biāo)。

由上可知，在SLE患者治療中測定血液中ANCA及其滴度可協(xié)助SLE的治療，同時根據(jù)ANCA滴度的高低了解其病情變化情況。

[1]Jennette JC,Falk RJ.Antineutrophil cytoplasmic autoantibodies and associated disease:a review[J].Am J Kidney Dis,1990;15(6):517-529.

[2]Schnabel A,Csernok E,Isenberg DA et al.Antineutrophil cytoplasmi antibodies in systemic lupus erythematosus prevalence[J].Arthritis Rheum,1995,38(5):633-637.

[3]Pauzner R,Urowtz M,Gladman D,et al.Antineutrophil cytoplasmicantibodies in systemic lupus erythematosus[J].J Rheumatol,1994,21(9):1670-1673.

[4]蔣 明,田新平,李學(xué)旺,等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床.見蔣明主編.風(fēng)濕病學(xué)[M].北京:科學(xué)技術(shù)出版社,1996:1037.