全自動(dòng)生化分析儀試劑間攜帶污染及解決方法

杜立水

(山東省肥城礦業(yè)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 肥城 271608)

全自動(dòng)生化分析儀是臨床實(shí)驗(yàn)室必備的檢驗(yàn)儀器，具有快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好及多樣本處理能力等優(yōu)點(diǎn)，隨著檢測方法學(xué)的改進(jìn)和校準(zhǔn)品質(zhì)量的提高，使得臨床生化分析的準(zhǔn)確度和精密度得到了進(jìn)一步的提高。但在分析過程中由于生化分析儀共用試劑針、攪拌棒以及比色杯，經(jīng)過長期使用或保養(yǎng)不當(dāng)致其清洗能力下降時(shí)，則達(dá)不到應(yīng)有的清洗效果，從而引起試劑間的攜帶污染[1]。我們在日常工作中，使用日立7170S型全自動(dòng)生化分析儀觀察到同時(shí)測定含有肌酐和脂蛋白a、前白蛋白的項(xiàng)目組合以及總蛋白和銅離子的組合項(xiàng)目時(shí)，發(fā)現(xiàn)脂蛋白a、前白蛋白和銅離子結(jié)果明顯增高，而單獨(dú)復(fù)查時(shí)結(jié)果正常。用去離子水增加沖洗量和專用清潔劑清洗不能完全消除攜帶污染。通過改變以上項(xiàng)目的位置和分析順序，則可以有效地避免試劑間的相互污染。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 日立7170S型全自動(dòng)生化分析儀。肌酐試劑(堿性苦味酸法，批號(hào)60055970/4)為上海申能－德賽診斷技術(shù)有限公司產(chǎn)品。脂蛋白(a)試劑(免疫比濁法，批號(hào)100505)為北京利德曼生化技術(shù)有限公司生產(chǎn)。前白蛋白試劑(免疫比濁法，批號(hào)100303)為浙江伊利康生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。總蛋白試劑(雙縮脲終點(diǎn)法，批號(hào)012301L)為北京利德曼生化股份有限公司產(chǎn)品。銅離子試劑(終點(diǎn)法，批號(hào)006081E)為北京利德曼生化股份有限公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 測定參數(shù) 嚴(yán)格按試劑說明書提供的參數(shù)進(jìn)行設(shè)定。

1.2.2 交叉干擾實(shí)驗(yàn)方法 50份健康體檢人員的血清標(biāo)本，單獨(dú)測定脂蛋白a和前白蛋白，其脂蛋白a測定值范圍為38.20～300mg/L，前白蛋白測定值范圍為208～391mg/L。然后再按照如下順序分別進(jìn)行混合血清測定，肌酐→脂蛋白(a)、肌酐→前白蛋白；測肌酐后用蒸餾水加強(qiáng)沖洗一次，再次測定脂蛋白(a)和前白蛋白。

1.2.3 用同樣方法先單獨(dú)測定銅離子，測定值范圍為6.5～38.2μmol/L。再測總蛋白，然后再測銅離子。

1.3 攜帶污染率的計(jì)算 單獨(dú)測定的項(xiàng)目結(jié)果用A表示，測定施污染項(xiàng)目后再次測定的受污染項(xiàng)目的結(jié)果用B表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件作配對資料的t檢驗(yàn)處理，以P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 按照實(shí)驗(yàn)方法，對50份標(biāo)本進(jìn)行分析，結(jié)果對比見表1。從表中可看出，在日立7170S全自動(dòng)生化分析儀上設(shè)置清除試劑間攜帶交叉干擾的清洗程序，再從肌酐項(xiàng)目轉(zhuǎn)向脂蛋白a項(xiàng)目時(shí)再對試劑針用蒸餾水加強(qiáng)沖洗一次。仍不能消除試劑攜帶交叉干擾。同樣將上述清洗程序中使用的蒸餾水分別換為酸性、堿性清洗液加強(qiáng)清洗，將清洗后的測定結(jié)果與單獨(dú)測定脂蛋白a和前白蛋白所得結(jié)果分別進(jìn)行t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示除用堿性清洗液清洗后結(jié)果與單獨(dú)測定結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余結(jié)果差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)，具體結(jié)果見表1。

2.2 改變儀器檢測順序 在肌酐與脂蛋白a之間穿插一個(gè)項(xiàng)目或增加水沖洗量時(shí)，結(jié)果仍然存在試劑交叉污染。將脂蛋白a排在血脂組合項(xiàng)目中間，進(jìn)行盲法測定，測定結(jié)果為146±38mg/L，分別與單獨(dú)測定脂蛋白a所得結(jié)果進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，P＞0.05。用同樣方法，在測定銅離子時(shí)，將該項(xiàng)目排在組合中間，就可以避免雙縮脲試劑對銅試劑的試劑針攜帶污染。

表1 50份標(biāo)本測定結(jié)果

3 討論

3.1 多通道生化分析儀的試劑加樣針需接觸各種試劑成分，按常規(guī)清洗，一般難以清洗干凈，特別是攪拌棒在反應(yīng)杯中將血清和試劑混勻時(shí)，就容易在兩個(gè)樣品間或兩個(gè)測試項(xiàng)目之間出現(xiàn)攜帶污染。以去離子水清洗，如果清洗不干凈，前一測試項(xiàng)目的試劑針、樣品針或混勻器的殘留部分將對下一測定項(xiàng)目造成很大影響，導(dǎo)致生化分析儀試劑之間存在交叉污染。如果某一試劑含有下一測試所要測定的底物或含有的某種成分與下一反應(yīng)所要測定的底物有作用，則直接干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果。在試劑污染情況下，下一反應(yīng)進(jìn)程是前后兩種試劑綜合作用的結(jié)果，也干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果[2]。因此生化分析儀在吸取不同試劑時(shí)，要對試劑針內(nèi)外壁用蒸餾水進(jìn)行徹底清洗。常規(guī)清洗有時(shí)難以將取樣針清洗干凈，從而造成項(xiàng)目之間的試劑污染而影響測定結(jié)果[3]。特別是儀器老化、維護(hù)欠缺時(shí)的清洗能力低下和儀器內(nèi)污垢的積聚致黏附增加使得儀器不能有效消除攜帶污染。增加清洗次數(shù)，可明顯降低儀器的攜帶污染率；用專用清洗液加強(qiáng)清洗，可提高清洗效果[4]。日立生化分析儀專用的堿性清洗液，能夠比較徹底地對儀器管道及針腔清洗，對于污染性較強(qiáng)的項(xiàng)目，如肌酐、總蛋白等，在設(shè)置分析程序時(shí)，要增加堿性清洗液沖洗量和沖洗次數(shù)，降低攜帶污染。

3.2 實(shí)驗(yàn)表明，僅用蒸餾水、酸性清洗劑加強(qiáng)清洗試劑針仍不能消除部分檢驗(yàn)項(xiàng)目之間干擾現(xiàn)象。通過改變儀器的檢測順序，將被干擾項(xiàng)目的順序排在干擾項(xiàng)目順序之前或中間增加其它項(xiàng)目，隔絕兩者的直接聯(lián)系，可降低污染。因此建議，在生化分析儀上如果出現(xiàn)交叉污染時(shí)，可以用更改檢測順序的方法，同時(shí)設(shè)置使用蒸餾水加強(qiáng)清洗程序，從而大大減低試劑之間的交叉污染，對于污染嚴(yán)重的項(xiàng)目，應(yīng)在測定該項(xiàng)目后設(shè)置使用堿性清洗液、蒸餾水進(jìn)行清洗，將對下一個(gè)項(xiàng)目的干擾降到最低限度。

3.3 要求檢驗(yàn)人員對儀器的工作狀態(tài)要了如指掌，熟悉各種試劑反應(yīng)的原理和各種試劑的組成成份，并在一個(gè)樣本的項(xiàng)目選擇或一個(gè)樣本的最后一項(xiàng)與下一樣本的第一個(gè)項(xiàng)目選擇時(shí)對于試劑交叉污染的可能性加以考慮，合理安排項(xiàng)目順序或樣本順序，以便得到更為合理的結(jié)果。

3.4 加強(qiáng)儀器的日常保養(yǎng)和維護(hù)，是保證測定結(jié)果準(zhǔn)確性的基礎(chǔ)。試劑針和攪拌棒應(yīng)每天用無水乙醇從上往下輕輕擦拭，在擦拭攪拌棒時(shí)勿損傷其表面的疏水物質(zhì)。有加強(qiáng)清洗程序的儀器應(yīng)當(dāng)啟用該程序以減低交叉污染[5]。鑒于試劑成分的復(fù)雜性、儀器工作原理的差異，每個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室所發(fā)生的攜帶污染也不完全相同，所以要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室目前情況將攜帶污染項(xiàng)目和程度作一具體評估，并采取相應(yīng)的對策，才能使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠[6]。本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對各個(gè)檢測項(xiàng)目進(jìn)行合理安排分析順序，對污染項(xiàng)目進(jìn)行隔開或?qū)⒈蝗菀孜廴镜捻?xiàng)目放到其他分析項(xiàng)目的前面以及用堿性清洗液清洗試劑針等措施，在日常工作中對每天的高、中、低值質(zhì)量控制運(yùn)用Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法進(jìn)行控制[7]，對失控情況盡快查找原因及時(shí)處理，對具體檢測過程進(jìn)行回顧性分析。并認(rèn)真做好儀器的每日、每周和每月的維護(hù)和保養(yǎng)工作，使儀器處于最佳工作狀態(tài)，提高了測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度，取得了非常滿意的效果。

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