經HE染色的細胞涂片上再行免疫組化染色法簡介

成玉霞，孫 青

胸腹水細胞涂片通常行HE染色診斷，有時需再進行免疫組織化學染色以滿足鑒別診斷之用。但由于再次取材受限，往往使工作陷于被動或無法進行。筆者在工作中成功摸索出一種在一張涂片上同時進行多種抗體的免疫組織化學染色，并保留一部分HE染色的方法，現以1例會診的HE涂片為例介紹如下。

材料和試劑：免疫組化油筆、一抗和試劑盒。方法：將切片放入二甲苯中浸泡，直到蓋玻片脫落（封存太久的切片可先將蓋玻片加熱取下再放入二甲苯中）。溶解掉中性樹膠后，經梯度乙醇水化后，放入鹽酸酒精（70%乙醇，1%鹽酸）中去除HE染色。切片經水洗后，用免疫組化油筆（購自福州邁新公司）圈定3處需要行免疫組化標記的區(qū)域（根據原HE染色涂片細胞情況確定），行免疫組化染色，步驟如下：①用0.1%TritonX-100處理 30 min，在細胞膜上打孔；②PBS洗3 min×3次，把TritonX-100徹底洗掉；③3%H2O2處理10 min，去除內源性過氧化物酶；④PBS洗3 min×3次；⑤在3個圈定區(qū)域分別加上不同的一抗 （CK5/6、LCA和Calretinin均購自福州邁新公司），室溫1 h；⑥PBS洗3 min×3次；⑦加二抗（邁新公司的MaxVisionTM試劑盒編號KIT5020）孵育15min；⑧PBS洗3 min×3次；⑨DAB顯色。

顯色后的切片用蘇木素復染核2 min，脫水透明后，將免疫組化染色部分用小蓋玻片封片，加熱干燥。然后將蓋玻片外部分再行伊紅染色，脫水透明的同時將小蓋玻片去掉，重新用一大蓋玻片封片。如此，1張同時具有3種免疫組化染色，而且保留了部分HE染色結果的細胞涂片成功完成（圖1～5）。

圖1 3個圈從左到右分別為LCA，CK5/6和Calretinin染色。圈外是保留的HE染色。

圖2 CK5/6癌細胞（+）

圖3 LCA淋巴單核細胞（+）

圖4 Calretinin間皮細胞（+）

圖5 保留的HE染色細胞

這種染色方法在取材受限的情況下不失為一種良策，關鍵是用免疫組化油筆圈定細胞的時候一定得嚴密，保證抗體之間不能有交叉，以保證結果的可靠性。這種方法同樣適用于經過HE染色的組織切片再進行免疫組化染色，只是需根據抗體要求進行修復，不用TritonX-100處理。