快速特異性免疫治療對哮喘患者血清嗜酸性粒細胞陽離子蛋白的抑制作用

程相鐸，雍 磊，梅海豫，李 波

嗜酸性粒細胞陽離子蛋白 （eosinophil cationic protein，ECP）是活化的嗜酸性粒細胞釋放的毒性蛋白，在支氣管哮喘的發生、發展中起重要作用，可作為評價哮喘療效的指標。為探索變應原快速特異性免疫治療 （fast specific immunotherapy FSIT）的機制，筆者對60例支氣管哮喘患者進行了快速特異性免疫治療，測定了治療前后血清ECP的變化，并與60例對照組進行對比觀察，結果如下。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇符合支氣管哮喘診斷標準[1]，并經過變應原特異性IgE測定確診的支氣管哮喘120例；男54例，女66例；年齡平均（35.7±9.5）歲。隨機分為治療組60例，男28例，女 32 例，年齡平均（36.8±9.4）歲，病程平均（8.5±1.8）年；對照組 60 例，男 26 例，女 34 例，年齡平均（34.6±9.7）歲，病程平均（7.8±1.3）年。 兩組間年齡、病程均無統計學差異（P>0.05）。

1.2 藥物 北京新華聯藥業公司生產的變應原浸液，均為一種變應原原液配制成各濃度級，濃度分別為1∶105（W/V）、1∶104、1∶103、1∶102。

1.3 方法 治療組： 初始治療變應原浸液濃度從1∶105（W/V）開始，以 0.1、0.2、0.4、0.8 ml劑量遞增，上午及下午各 1 次皮下注射， 爾后以 1∶104、1∶103、1∶102濃度遞增，8 d 即可達維持量，完成初始治療；從第9天開始進行維持治療，用1∶102濃度0.5 ml皮下注射1次/周，1年后療程結束[2]。對照組依據病情嚴重程度給予布地奈德氣霧劑霧化吸入，療程與治療組相同。

1.4 血清ECP檢測

1.4.1 標本采集 所有受檢患者2周內未應用皮質類固醇激素，停用抗組胺藥3 d（息斯敏停藥1周），每位患者治療前和治療后1周各抽取靜脈血2.5 ml，置普通玻璃管中，在37℃下凝血 60 min，1 000～1 350 g離心分離血清，-20℃冰箱保存備用。

1.4.2 儀器、試劑 Pharmasia Unicap100 System及ECP測定試劑盒，包括：β-半乳糖苷酶標記抗ECP抗體、抗ECP包被的固相載體（CAP）、底物（4-甲基傘形酮-β-D葡萄糖苷）、ECP標準品、質控品等均為瑞典Pharmasia公司生產。

1.4.3 測定方法及原理 包被的ECP抗體與血清中的ECP結合，經洗滌后，加入熒光底物，在β-半乳糖苷酶作用下，產生熒光，儀器動態檢測熒光強度，根據標準曲線，自動計算并報告血清標本ECP濃度（μg/L）。

1.5 統計學方法 分別對兩組患者治療前后血清ECP值求出均數和標準差（±s），采用t檢驗進行統計學分析。

2 結 果

血清ECP測定結果顯示：治療組與對照組治療前患者血清ECP值水平無顯著性差異（P＞0.05）。療程結束后兩組患者血清ECP水平具有顯著統計學差異（P<0.01）。見表1。

表1 兩組支氣管哮喘患者治療前后血清 ECP 水平（μg/L，±s）

表1 兩組支氣管哮喘患者治療前后血清 ECP 水平（μg/L，±s）

治療組 對照組 t P治療前 24.34±5.12 25.16±5.79 0.82 ＞0.05治療后 15.68±3.28 18.27±4.62 3.54 ＜0.01 t 11.03 7.20 P ＜0.01 ＜0.05

3 討 論

支氣管哮喘是一種特殊的病理免疫反應過程。當機體通過吸入、食入、注入或接觸等各種途徑，接受某種變應原后出現哮喘發作等強烈的變態反應。隨著對支氣管哮喘發病機制的深入研究及免疫治療機制的進一步了解，對哮喘治療側重于病因治療。特異性免疫治療（specific immunotherapy，SIT）是目前唯一的變態反應性疾病病因治療方法，是指給變應患者以遞增劑量的變應原提取物，改善變應原引起的相應癥狀，包括常規免疫治療和快速免疫治療等，其中快速免疫治療則是在劑量上升階段，縮短注射間隔時間，盡快遞增到維持劑量的一種脫敏治療方法，可以縮短初始階段治療時間，從而縮短療程，增加患者依從性。嗜酸粒細胞的浸潤和氣道高反應性是支氣管哮喘的兩個重要特征，嗜酸粒細胞和支氣管哮喘的密切關系已得到公認，許多的證據已說明嗜酸粒細胞是變應性疾病中最活躍的細胞之一，速發型變應性疾病的組織和器官的局部以及滲出液中均有大量的嗜酸粒細胞出現。ECP是活化的嗜酸性粒細胞釋放的一種單鏈、含鋅、強堿性糖蛋白，可引起肥大細胞釋放組胺，并具有極強的細胞毒性、神經毒性和殺菌、殺蠕蟲作用，在凝血過程中與蛋白質相互作用及纖維蛋白溶解作用[3]。一項對變應性鼻炎、哮喘患者血清嗜酸性粒細胞陽離子蛋白水平的Meta分析結果顯示，哮喘患者血清ECP比正常人升高，急性發作期變應性哮喘患者ECP水平明顯高于緩解期患者，認為ECP水平高低與變應性哮喘病程及嚴重程度相關，血清ECP水平可作為變應性哮喘的一項實驗室診斷指標[4]。本研究對60例支氣管哮喘患者在快速特異性免疫治療前后血清ECP檢測，同時測定對照組60例支氣管哮喘患者給予布地奈德氣霧劑霧化吸入治療前后血清ECP值。兩組治療后血清ECP值均低于治療前，有顯著性差異，其中治療組血清ECP值明顯降低，與對照組治療后的血清ECP值相比有顯著性差異。本研究表明快速特異性免疫治療可有效抑制嗜酸性粒細胞聚集或釋放ECP，從而起到治療哮喘的作用。

[1]中華醫學會呼吸病學分會哮喘學組.支氣管哮喘防治指南（支氣管哮喘的定義、診斷、治療機教育和管理方案）[J].中華結核和呼吸雜志，2003，26（3）：132-138.

[2]梅海豫，程相鐸，胡光榮.快速脫敏療法對真菌致敏性哮喘的療效及 IgE，ECP 的影響[J].臨床軍醫雜志，2004，32(6)：17-19.

[3]高 靜，林東紅.嗜酸性粒細胞陽離子蛋白在支氣管哮喘發病中的意義[J].醫學綜述，2005，11（3）：204-205.

[4]程 靖，林文盛，吳小海.變應性鼻炎、哮喘患者血清嗜酸性粒細胞陽離子蛋白水平的 Meta分析[J].循證醫學，2009，9（3）：158-160，167.