萬孚瘧疾快速檢測試劑在蘇丹維和任務區的應用

薛成軍，張勝利，翟慎軍，陳治水

近年來，我國已派出多批維和部隊在非洲數個國家和地區執行維和任務。由于非洲一直是瘧疾疫情高發區，每年因瘧疾病死人數近一百萬，因此各任務區維和部隊在做好預防工作的前提下，及時準確的對瘧疾感染者作出診斷尤為重要。目前，瘧原蟲顯微鏡檢查仍是確診瘧疾的最可靠方法，但其費時，耗力，且需要熟練的專業技術人員及一定的實驗室條件，因此具有快速、簡便等特點基于免疫層析技術的瘧疾快速診斷測試（RDTs）逐漸普及應用。現利用廣州萬孚瘧疾快速檢測試劑對RDTs在蘇丹瓦烏維和任務區的應用效果進行評估和探討。

1 材料與方法

1.1 試劑 由廣州萬孚生物技術有限公司開發的瘧疾快速檢測試劑盒（膠體金法）。包裝規格：鋁箔袋單人份包裝測試卡，25 人份/盒。

1.2 一般資料 2009-10～2010-07聯合國蘇丹維和團第二戰區（瓦烏）中國二級醫院門診和當地一級醫院的215例門診發熱患者（包括各出兵國軍事人員，民事人員和當地雇員等）血液樣本共236份，男193份，女43份；年齡19～54歲。其中個別患者血液樣本采集2～3次。血液樣本皆用EDTAK2抗凝真空管采集保存。

1.3 方法

1.3.1 顯微鏡鏡檢 每份血液樣本制作厚、薄2張涂片，采用快速瑞氏染液進行染色，高倍油鏡下查找瘧原蟲，并進行分類，結果作為瘧疾診斷的金標準。

1.3.2 萬孚瘧疾快速診斷試劑檢測 每份血液樣本嚴格按照試劑盒說明書進行操作，在規定時間內判斷結果并記錄。

2 結 果

2.1 試劑效果 共使用萬孚瘧疾快速檢測試劑進行測試標本246份次，樣本檢測236次，重復試驗10次，其中0次無效。隨機抽取10例瘧疾快速檢測試劑陽性血樣進行重復試驗，符合率100%。

2.2 檢測結果 共檢測發熱患者236例次。顯微鏡檢查陽性39例次，陰性197例次；萬孚瘧疾快速檢測試劑檢測陽性37例次，陰性199例次。具體檢測結果見表1。

2.3 試劑檢測效果 以顯微鏡檢查結果為標準，萬孚瘧疾快速檢測試劑檢測靈敏度92.3%，特異性99.5%，總有效率98.3%。

3 討 論

瘧原蟲泛乳酸脫氫酶（panLDH）是其有性生殖階段在糖酵解途徑中產生的一種可溶性終端酶，它的產生和積累可以作為瘧原蟲體內或體外活動的指標，屬于廣譜瘧原蟲抗原（pan-malaria antigen，PMA）。可感染人類的四種類型的瘧原蟲都可產生這種酶，但分別是四種不同的乳酸脫氫酶異構體。惡性瘧原蟲特異性乳酸脫氫酶（pfLDH）就是其中的一種異構體。作為瘧疾快速診斷測試（RDTs）商品試劑的一種，萬孚瘧疾快速檢測試劑則是通過采用雙抗夾心法檢測紅細胞中或釋放與紅細胞外的panLDH和pfLDH來檢測血液中是否存在瘧原蟲。

表1 萬孚試劑和鏡檢結果（例次）

萬孚瘧疾快速檢測試劑的總體靈敏度92.3%，特異性99.5%，表現出很好的檢測效能，符合文獻報道[1]。其中，萬孚試劑對惡性瘧、非惡性瘧和混合感染的靈敏度分別為91.7%、90%和100%，表現出一定的差異。雖然由于樣本的基礎統計量多少不等，不能完全說明真實狀況，但是其影響其靈敏度的假陰性結果是確實存在的。當血液中的瘧原蟲密度>200/μl時，RDTs對惡性瘧原蟲診斷的靈敏度通常>90%，如果低于這個密度，RDTs的靈敏度會顯著降低[2，3]。而且由于該統計樣本來源多為聯合國工作人員，部分長期服用預防量的抗瘧藥物，導致部分陽性血液樣本中的瘧原蟲的密度偏低，影響快速檢測試劑的靈敏度。同時，當地的高溫濕熱環境也可能對其靈敏度產生影響[4]，因此良好的試劑保存條件也是保證RDTs試劑檢測效能的關鍵因素之一。雖然非惡性瘧的陽性標本較少，不能完全反映萬孚試劑的靈敏度，但有文獻報道，非惡性瘧相對惡性瘧在RDTs的檢測效能上都表現出較低的靈敏度[5]，可能與其檢測抗原的不同或試劑所含抗體的不同有關。

由于采用免疫層析技術，并利用特異性抗體捕獲瘧原蟲抗原，使萬孚瘧疾快速診斷試劑表現出很高的特異性（99.5%）。RDTs的特異性都能保持在較高的水平，多數保持在95%～100%[1,6]。表1中出現的1例假陽性樣本，影響了該試劑的特異性。經詢問病史得知，該患者2周前曾瘧疾發作，并經過治療好轉。因此，出現假陽性可能由于患者血液中的游離瘧原蟲特異性乳酸脫氫酶未被完全清除所造成[7]；也可能是患者血液中瘧原蟲未被完全清除，而因藥物的作用表現出很低的密度，并低于顯微鏡檢出底線的緣故。

RDTs由于存在多種影響因素，在可能的情況下，應該對其結果的準確性做出專業評估，并進一步實施有效的驗證方法。RDTs的陽性結果可信度較高，陰性結果不能排除瘧疾感染的可能。RDTs在血液中的瘧原蟲密度>40 000/μl時可能會因前帶現象而產生假陰性[8]。因此在出現臨床癥狀而RDTs結果陰性的情況下，可適當稀釋血液樣本進行重新檢測，并盡可能的通過其它檢測方法得到確認診斷，避免對致命性瘧疾發作患者的治療延誤。

綜上所述，雖然萬孚瘧疾快速檢測試劑在蘇丹瓦烏維和任務區的現場應用中存在一定的假陽性和假陰性，但仍保持了較好的敏感性和很高的特異性，以及良好的穩定性和重復性，可以為顯微鏡檢查提供有用的信息。國內外文獻也報道了數種商品試劑，在現場試驗中檢測效能都表現優秀[3,9,10]。再者，由于我國部分維和官兵分散在多個地點長期執行任務，而當地缺乏實驗室條件和技術人員，這給瘧疾及時正確的診斷帶來困難。瘧疾快速診斷試劑因其操作簡便，結果易于判斷，可用于維和部隊長期在外執行任務人員的現場檢測，并結合臨床癥狀作出初步診斷。

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