PSCA基因多態(tài)性與青海地區(qū)藏族胃癌遺傳易感性的初步研究

沈國(guó)雙，趙久達(dá)* ，耿排力，王麗娟，曹成珠

(1青海大學(xué)附屬醫(yī)院，西寧810000;2青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

前列腺干細(xì)胞抗原(PSCA)來(lái)源于前列腺，在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，細(xì)胞與細(xì)胞間黏附，干細(xì)胞、祖細(xì)胞自我更新(抗凋亡)或增殖等功能方面起重要作用。有報(bào)道，PSCA基因多態(tài)性與日本彌漫型胃癌易感性相關(guān)［1］。中國(guó)為胃癌高發(fā)區(qū)，而青海省在全國(guó)發(fā)病率最高，其中藏族胃癌發(fā)病率明顯高于其他民族［2］。2009年1月～2010年12月，我們檢測(cè)了60例青海藏族胃癌患者PSCA基因rs2976392位點(diǎn)多態(tài)性，探討其與胃癌遺傳易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2009～2010年住院、無(wú)血緣關(guān)系的藏族胃癌患者60例(觀察組)，男42例，女18例;年齡(53.2±11.3)歲。均經(jīng)胃鏡或手術(shù)病理檢查證實(shí)診斷;未行放化療;低分化腺癌48例，高、中分化腺癌12例。另選取青海省海南藏族自治州60例正常藏族個(gè)體作為對(duì)照組。兩組年齡、性別有可比性。標(biāo)本取材后立即置于液氮中速凍，移至－70℃冰箱保存。

1.2 PSCA基因多態(tài)性檢測(cè)

1.2.1 基因組DNA提取、擴(kuò)增及鑒定 兩組均采集靜脈血2 ml，EDTA抗凝，3%明膠吸附紅細(xì)胞，10%SDS破膜，酚—氯仿法提取白細(xì)胞基因組DNA，經(jīng)純度鑒定后－20℃保存?zhèn)溆谩Ｒ訮SCA基因組序列為依據(jù)，設(shè)計(jì)PSCA基因rs2976392位點(diǎn)PCR引物。序列為:F5-ctggccatctgtccgcagct-3/R5-cagatggaggaggatggctgga-3，產(chǎn)物長(zhǎng)度352 bp。PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增條件:PCR反應(yīng)總體系為25 μl，含100 ng/ml DNA 模板 2 μl，10 × 緩沖液 215 μl，25 mmol/L MgCl22 μl，2.5 mmol/L dNTP 2 μl，10 μmol/L 引物正反向各 1 μl，5 U/μl Taq DNA 聚合酶 0.25 μl。反應(yīng)在溫度梯度PCR儀進(jìn)行，條件為:94℃預(yù)變性3min，95℃變性30 s，72℃延伸45 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，72℃后延伸10min。PCR產(chǎn)物2 μl行2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴(kuò)增產(chǎn)物。

1.4 基因組多態(tài)性分析 變性高效液相色譜法(DHPLC)分析基因型:5 μl PCR產(chǎn)物在PCR儀內(nèi)95℃變性3min，緩慢退火至45℃，以形成異源和同源雙鏈DNA分子混合物樣品入進(jìn)樣室。檢測(cè)溫度以WAVEMAKER 4.0軟件包和網(wǎng)站http://insertion.stanford.edu/melt.html提供的預(yù)測(cè)溫度為參照，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得各位點(diǎn)最適檢測(cè)溫度，洗脫液(A:0.1 mmol/L TEAA 含三乙胺乙酸鹽;B:0.1 mmol/L TEAA含25%乙腈)按線性遞增方式以0.9 ml/min的流速洗脫，260 nm波長(zhǎng)處讀取吸光值，形成峰型;采用部分變性法確定PSCA基因rs2976392位點(diǎn)基因型。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用用SPSS11.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。以χ2檢驗(yàn)確定兩組間三個(gè)位點(diǎn)基因型頻數(shù)分布的差異。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組PSCA基因rs2976392位點(diǎn)均為G/G、G/A、A/A三種類型;其頻率見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，胃癌組G/A基因型頻率明顯高于對(duì)照組，提示G/A基因型者胃癌的易感性高于另兩型者。

表1 兩組PSCA基因型頻率比較

3 討論

PSCA基因cDNA由660 bp組成，編碼含123個(gè)氨基酸的蛋白，與干細(xì)胞抗原-2(SCA-2)有30%的同源性。PSCA基因位于染色體8q 24.2(此區(qū)為大多數(shù)前列腺癌的等位癌基因擴(kuò)增區(qū))，嚴(yán)格表達(dá)于基底細(xì)胞，研究證實(shí)，PSCA在多數(shù)人類前列腺癌組織中過(guò)度表達(dá)，是鑒別前列腺切除標(biāo)本中正常組織與前列腺癌組織重要的標(biāo)志物［3］。

自2008年千年基因組計(jì)劃癌癥研究組報(bào)告PSCA的基因多態(tài)性與日本彌漫型胃癌易感性相關(guān)之后，研究者在韓國(guó)對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證:研究對(duì)象為457例彌漫型胃癌患者、418例腸型胃癌患者和390例對(duì)照組，結(jié)果顯示，PSCA rs2976392和rs2294008與彌漫型胃癌顯著相關(guān)，與腸型胃癌相關(guān)性較弱;PSCA在胃上皮細(xì)胞分化過(guò)程中表達(dá)，體外實(shí)驗(yàn)表明其具有細(xì)胞增殖抑制作用，但在胃癌細(xì)胞中“沉默”。認(rèn)為該基因的多態(tài)性可能參與調(diào)節(jié)胃上皮細(xì)胞增殖，并影響彌漫型胃癌易感性［4］。

本研究表明，青海地區(qū)藏族人群胃癌與PSCA基因rs2976392位點(diǎn)基因多態(tài)性呈相關(guān)性，G/A基因型者患胃癌的危險(xiǎn)性較高。PSCA基因影響胃癌的發(fā)病可能與其參與調(diào)節(jié)胃上皮細(xì)胞增殖有關(guān)，因?yàn)檠芯勘砻鳎琍SCA mRNA在正常胃黏膜中呈高表達(dá)(表達(dá)主要位于胃腺體峽部)，而胃癌組織中則檢測(cè)不到其表達(dá)。我們的研究結(jié)果與Saeki等的研究一致，提示攜帶PSCA基因rs2976392位點(diǎn)G/A基因型可能是該地區(qū)胃癌的遺傳易感因素;PSCA基因可作為該人群胃癌的標(biāo)記物。目前我們正在進(jìn)行PSCA基因其它單核苷酸多態(tài)性與胃癌遺傳易感性及擴(kuò)大其他人群的研究。

［1］Study Group of Millennium Genome Project for Cancer，Sakamoto H，Yoshimura K，et al.Genetic variation in PSCA is associated with susceptibility to diffuse-type gastric cancer［J］.Nat Genet，2008，40(6):730-740.

［2］趙久達(dá)，李豪，曹成珠，等.1962例胃癌流行病學(xué)分析［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，35(3):439-440.

［3］Elsamman EM，F(xiàn)ukumori T，Tanimoto S，et al.The expression of prostate stem cell antigen in human clear cell renal cell carcinoma.a quantiative reverse transcriptase-polymerase chain reaction analysis［J］.BJU Int，2006，98(3):668-673.

［4］Saeki N，Sakamoto H，Yoshida T.Genome-wide association study of gastric cancer and GeMDBJ database［J］.Nippon Rinsho，2009，67(6):1227-1232.