老年下肢動脈疾病患者中CXCL16與血管新生的關系

諸葛欣，孫 寧，王麗莉，陳翊玲，張 蘊

(1天津醫科大學總醫院，天津300052;2 Old Dominion University，USA)

周圍動脈性疾病是老年人中的高發病，其中下肢動脈疾病(PAD)可導致老年人活動能力下降，進一步影響患者的生活質量。有研究提示，PAD的加重是遠期心血管事件死亡的獨立危險因素［1］。動脈粥樣硬化性血管閉塞導致了組織的缺血和不同程度的側支血管形成，其中由血管內皮生長因子(VEGF)為代表的一系列血管生長因子對血管新生過程的調控決定了側支循環的程度，影響著臨床表現和預后。巨噬細胞趨化因子配體16(CXCL16)是近年來被發現的具有清道夫受體功能的炎性趨化因子［2］，體外實驗提示該分子具有對內皮細胞的促血管新生作用［3］，本研究旨在探索老年PAD患者中CXCL16的水平及其促血管新生的意義。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 選擇2007年1月～2009年12月在天津醫科大學總醫院干部病房查體和就診的老年男性50例，年齡60～92歲。將入選者隨機分為對照組［踝臂指數(ABI)＞1．0］和 PAD組(ABI＜0．9)。PAD有間歇性跛行或行下肢血管重建、有明確影像學診斷證據。排除心肌梗死、心衰、腦血管病、腎臟功能異常、惡性腫瘤、免疫系統疾病以及其他研究者認為不適合入選的疾病。

1．2 方法

1．2．1 血生化指標的檢測 對照組和PAD組于清晨空腹采集靜脈血，送生化室按照規定方法進行空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)等指標的檢測。

1．2．2 ABI的檢測 采用日本Colin公司的全自動動脈硬化檢測儀，在清晨安靜狀態下，讓患者取平臥位，在上臂和踝部分別綁扎傳感器，輸入相關信息由機器自動完成。

1．2．3 血管生長因子的檢測 研究對象于清晨空腹靜脈采血，立即放入4℃ 冰箱，1 h內4℃離心(2 500 r/min)，取上層血清－80℃保存待測。CXCL16、VEGF的檢測采用R＆D Systems試劑盒，酶聯免疫分析法進行檢測，操作按試劑盒說明進行，批內差異＜10%，批間差異＜15%。

1．2．4 EPCs的分離和檢測 按常規方法分離外周血的單核細胞［4］，并懸浮于 200 μl的 PBS 中(含0．5%小牛血清和2 mm的EDTA)，加入標記的單克隆抗體 CD133/CD34，經流式細胞儀(BD FACS ArisTM，美國BD公司)計數測定。

1．3 統計學方法 采用SPSS13．0統計軟件，計量資料符合正態分布以±s表示，不符合正態分布的用中位數(四分位數間距)表示，組間比較符合正態分布的用方差分析，不符合正態分布的用Mann-Whitney檢驗;計數資料用百分比表示，比較采用列聯表χ2檢驗。CXCL16與EGFR、EPCs之間的相關性用Spearman相關檢驗。P≤0．05為有統計學差異。

2 結果

2．1 兩組基本資料比較 PAD組中糖尿病、高血壓、高血脂的患病例數分別為9、16、11例。兩組基線資料的比較見表1。

2．2 兩組促血管新生因子和EPCs的比較 見表2。

2．3 CXCL16與VEGF和EPCs的相關分析 對照組中 CXCL16與VEGF和EPCs均呈正相關(r=0．463，P=0．033;r=0．359，P=0．043);PAD 組中CXCL16 與 VEGF 呈正相關(r=0．307，P=0．031)，與 EPCs不相關(r=0．114，P=0．265)。

表1 兩組基本資料比較

表2 兩組促血管新生因子和EPCs的比較

3 討論

PAD是老年人中的高發病，特征主要為周圍動脈特別是下肢動脈的粥樣硬化性病變導致的組織缺血，以及不同程度的側支循環形成，并因此決定了臨床癥狀的嚴重程度和預后。

CXCL16是近年來被發現的具有清道夫受體功能的炎性趨化因子［2］，體外實驗證明，該分子可以促進內皮細胞增殖、遷移和管狀結構的形成［3］，并在小鼠體內Matrigel血管新生模型中得到驗證［5］，推論CXCL16是一個具有促血管新生作用的化學趨化因子。

血管新生是一個極其復雜的過程，需要多種生長因子協同參與。缺血、缺氧是血管生成的觸發因素，促進VEGF等一系列調節血管生成的細胞因子表達，激活內皮細胞，啟動血管生成過程，使細胞對缺氧作出反應。有研究認為，CXCL16可顯著增強MMP-2和MMP-9的活性［6］，而后者可以促進包括VEGF在內的細胞外基質結合因子的生成，從而誘導EPCs并增強因組織缺血而引發的血管新生［7］。

EPCs是一種能直接分化為血管內皮細胞的前體細胞，具有高增殖潛能及內皮特性，主要定居于骨髓中，外周血中含量很少［8］，它具有較強的增殖、遷移、分化能力，在血管新生和維持血管完整性中起重要作用［9］。研究表明，具有血管并發癥的糖尿病患者與無血管并發癥的糖尿病患者相比，循環EPCs數目顯著降低，并且其數目與血管并發癥的嚴重程度密切相關［10］。

本研究顯示，PAD患者CXCL16、VEGF水平較對照組顯著增高，而EPCs水平顯著降低，反映了機體對組織缺血代償性上調促血管新生因子，動員EPCs到外周血，參與缺血組織的血管新生過程。該結果與Findley等［11］研究結果相一致。進一步相關分析顯示，兩組中CXCL16均與VEGF呈正相關，對照組中與EPCs數量呈正相關，提示CXCL16具有與VEGF類似的促血管新生作用。雖然相關研究中的P＜0．05，但相關性不是很好，原因可能為樣本量較小，因此需要進一步較大樣本的研究對結論加以證實和完善。

［1］Sakamoto S，Yokoyama N，Tamori Y，et al．Patients with peripheral artery disease who complete 12-week supervised exercise training program show reduced cardiovascular mortality and morbidity［J］．Circ J，2009，73(1):167-173．

［2］Matloubian M，David A，Engel S，et al．A transmembrane CXC chemokine is a ligand for HIV-coreceptor Bonzo［J］．Nat Immunol，2000，1(4):298-304．

［3］Zhuge X，Murayama T，Arai H，et al．CXCL16 is a novel angiogenic factor for human umbilical vein endothelial cells［J］．Biochem Biophys Res Commun，2005，331(4):1295-1300．

［4］Hildbrand P，Cirulli V，Prinsen RC，et al．The role of angiopoietins in the development of endothelial cells from cord blood CD34 progenitors［J］．Blood，2004，104(7):2010-2019．

［5］諸葛欣，孟艷玲，孫寧，等．CXCL16對小鼠Matrigel種植體內促血管新生的作用［J］．細胞與分子免疫學雜志，2010，26(11):1095-1096．

［6］Dahl CP，Husberg C，Gullestad L，et al．Increased production of CXCL16 in experimental and clinical heart failure:a possible role in extracellular matrix remodeling［J］．Circ Heart Fail，2009，2(6):624-632．

［7］Huang PH，Chen YH，Wang CH，et al．Matrix metalloproteinase-9 is essential for ischemia-induced neovascularization by modulating bone marrow-derived endothelial progenitor cells［J］．Arterioscler Thromb Vasc Biol，2009，29(8):1179-1184．

［8］Werner N，Kosiol S，Schiegl T，et al．Circulating endothelial pro-genitor cells and cardiovascular outcomes［J］．N Engl J Med，2005，353(10):999-1007．

［9］Mukai N，Akahori T，Komaki M，et al．A comparison of the tube forming potentials of early and late endothelial progenitor cells［J］．Exp Cell Res，2008，314(3):430-440．

［10］Fadini GP，Sartore S，Albiero M，et al．Number and function of endothelial progenitor cells as a marker of severity for diabetic vasculopathy［J］．Arterioscler Thromb Vasc Biol，2006，26(9):2140-2146．

［11］Findley CM，Mitchell RG，Duscha BD，et al．Plasma levels of soluble Tie2 and VEGF distinguish critical limb ischemia from intermittent claudication in patients with peripheral arterial disease［J］．J Am Coll Cardiol，2008，52(5):387-393．