胃癌組織中微管聚合蛋白的表達及意義

潘理會，李春輝，張德力

(1承德醫學院，河北承德067000;2承德醫學院附屬醫院)

微管是細胞有絲分裂期紡錘體的主要成分，可使細胞分裂順利進行，為癌細胞無限增殖提供條件，微管相關蛋白(MAP)是結合于微管上的非微管結構蛋白，參與微管的組裝，維持微管的穩定和微管與其它骨架纖維間的連接;Tau蛋白即微管聚合蛋白，與微管結合能誘導微管成束，增強微管的穩定性，可能會加速惡性腫瘤的進展。2008年12月～2010年3月，我們檢測了60例胃癌患者胃癌組織中Tau蛋白的表達，探討其在胃癌發生、發展過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 材料 手術切除經病理證實的胃癌組織標本60份(觀察組)，患者男49例，女11例;年齡43～77(58.3±10.0)歲;高中分化 28 例，低分化 32 例;無淋巴結轉移25例，有淋巴結轉移35例。另取10份正常胃組織標本(距腫瘤10cm以上)作為對照組。AMV第一鏈cDNA合成試劑盒購自上海生工生物工程技術服務有限公司(SK2030);引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成;50 bp DNA Ladder購自北京天根生化有限公司(MD108);Trizol購自Invitrogen公司;溴化乙錠購自美國Promega公司;氯仿、異丙醇、無水乙醇、EDTA、Tris-乙酸、Tris-硼酸、NaOH、DEPC、瓊脂糖等常規試劑購自北京化學試劑公司。

1.2 檢測方法

1.2.1 Tau mRNA檢測 采用RT-PCR法。取組織標本50～100 mg加入1 ml Trizol提取液，室溫下充分勻漿，離心，取上清提取RNA樣本按試劑盒說明合成cDNA。取PCR產物10 μl用1.5%瓊脂糖凝膠電泳，經EB染色后，在紫外熒光數字成像儀下照像并進行光密度定量分析。以每例Tau蛋白與其相應β-actin擴增產物條帶累積光密度(IOD)的比值作為Tau mRNA的相對表達量。

1.2.2 Tau蛋白檢測 采用免疫組織化學方法。將組織標本用福而馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續切片，微波修復抗原，進行免疫組織化學染色。Tau蛋白陽性信號表達于細胞質。在染色均勻的區域，選取5個高倍鏡視野(×400)進行觀察。按陽性細胞百分率(A值)評分:＜25%為1分，25% ～50%為2分，＞50%為3分;按染色強度(B值)評分:不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。A值與B值相加判斷結果，＞2分為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS11.5統計軟件。計量資料用±s表示，采用兩獨立樣本t檢驗;計數資料采用兩獨立樣本秩和檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

觀察組及對照組Tau mRNA相對含量分別為0.78 ±0.08、0.53 ±0.01(P ＜0.05);Tau 蛋白陽性率分別為 83.3%、70.0%(P ＜0.05)。Tau 表達與胃癌臨床病理參數的關系見表1。

3 討論

Tau蛋白是一種磷酸蛋白，其分子質量較小，多見于神經軸、樹突中，其磷酸化水平的調節隨發育而不同，在成熟人腦中可找到6種異構體，共含有352～441個氨基酸殘基，由于存在或缺乏三個插入片段而彼此不同，每種Tau蛋白分子的羧基端一側都存在3～4個由31～32個氨基酸殘基組成的重復序列，這些重復序列在正常生理條件下是微管的結合部位;同時部分Tau蛋白異構體在氨基端附近包含由29或58個氨基酸殘基組成的插入片段，Tau蛋白與微管結合可降低它們的動力學不穩定性，提高微管生長端微管蛋白分子連結的速率，降低微管蛋白分子分離的速率，抑制它們向縮短結局相轉變。Tau蛋白在體內也有相似的功能，已有數個實驗室轉染Tau基因進入正常并不表達Tau蛋白的細胞。在轉染細胞中，Tau蛋白與微管結合，增強微管的穩定性，有時誘導微管成束，成束可能是受Tau蛋白影響使微管穩定［1］。

表1 Tau表達與胃癌臨床病理參數的關系

關于Tau蛋白的研究以往多傾向于神經系統［2，3］，胃癌中涉及較少。本研究結果表明 Tau 蛋白在正常胃組織中的表達低于胃癌組織，Tau表達與胃癌的分化程度和淋巴結轉移有關，證實Tau蛋白參與胃癌的發生、發展，其機制可能為:①對微管組裝具有調節控制作用。一方面，MAP以其肽鏈中微管結合區與數個微管蛋白同時結合的機制，促成微管蛋白聚合核心的形成，加速微管蛋白的聚合，使微管得以生長延伸;另一方面，MAP又能通過其外伸功能區域可被MAP激酶(MAPK)磷酸化的特性，解除對微管的結合活性，阻滯微管蛋白的聚合，延緩微管的組裝，促進微管的解離。②對細胞骨架結構的建立、穩定和增強作用。③參與胞內物質的軌道定向轉運過程。④參與和介導細胞的信號轉導［4］。

綜上所述，Tau蛋白可促進胃癌的發生發展;同時Tau蛋白可作為胃癌靶向治療的靶點。

［1］Michel Goedert.Tau protein and the neurofibrillary pathology of Alzheimer＇s disease［J］.TINS，1993，16(11):460.

［2］Liu F，Shi J，Tanimukai H，et al.Reduced O-GlcNAcylation links lower brain glucose metabolism and tau pathology in Alzheimer＇s disease［J］.Brain，2009，1329(7):1820-1832.

［3］Lace G，Savva GM，Forster G，et al.Hippocampaltau pathology is related to neuroanatomical connections:an ageing population-based study［J］.Brain，2009，132(5):1324-1334.

［4］楊撫華.醫學細胞生物學［M］.5版.北京:科學出版社，2007:211.