復方蕎桃顆粒的質量標準研究

伍朝君 鄧志剛 成建國

1四川省樂山市職業技術學院（四川樂山614000）

2四川省樂山市中醫院（四川樂山614000）

3重慶市中醫院（重慶400021）

復方蕎桃顆粒由金蕎麥、黃連、白及、吳茱萸、木蝴蝶、核桃仁、砂仁等10味中藥提取精制而成；具有瀉火疏肝，和胃止痛之功效，適應于濕熱瘀阻，肝胃郁熱引起急、慢性胃炎，胃、十二指腸潰瘍，反流性食管炎等胃脘疼痛疾病。為控制產品質量，本實驗對方中金蕎麥、黃連進行薄層色譜（TLC）鑒別研究，采用高效液相色譜法（RP-HPLC）測定黃連中鹽酸小檗堿的含量。

1 儀器與試藥

美國Agilent1100液相色譜儀。復方蕎桃顆粒（樂山市中醫院制劑室提供）。鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品鑒定所，110713-200208）。金蕎麥對照藥材（中國藥品生物制品鑒定所，1114-200001）。黃連對照藥材 （中國藥品生物制品鑒定所，1114-200012）。乙晴為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 金蕎麥的TLC鑒別 取本品5g加甲醇20mL，放置1h，加熱回流1h，放冷，濾過，濾液濃縮至3mL，作為樣品溶液。另取金蕎麥對照藥材2g，陰性樣品5g，分別同法制成對照藥材及陰性樣品溶液。照薄層色譜法［1］實驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（1∶2∶0.2∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴 25%磷鉬酸乙醇溶液，在110℃加熱至色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 點。陰性樣品無干擾，見圖1。

2.1.2 黃連TLC鑒別 取本品3g，加甲醇30mL，加熱回流30min，濾過，濾液濃縮至3mL，作為供試品溶液。另取黃連對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照TLC法［1］試驗，吸取上述3種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開虹內，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的一個黃色熒光斑點。陰性樣品無干擾陰性對照無此斑點，見圖2。

圖1 金蕎麥TLC圖

圖2 黃連TLC圖譜

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，4μm）；流動相：乙晴-0.033mol/L，磷酸二氫鉀溶液（29∶71），以磷酸調節 pH 為 2.0；流量：1mL/min；檢測波長：370nm。

2.2.2 系統適應性實驗 取對照品溶液、供試品溶液及陰性溶液，按2.2.3項下方法進行處理后進樣，供試品溶液色譜圖中有與對照品色譜圖中鹽酸小檗堿峰相對應的色譜峰，且該色譜峰與其他色譜峰的分離度大于1.5，理論塔板數為8700，陰性溶液無干擾，見圖3。

圖3 高效液相色譜圖

2.2.3 溶液制備 對照品溶液：精密稱取鹽酸小檗堿對照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加1%（v∶v）鹽酸甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取上述對照溶液1mL，置10mL棕色量瓶中，加1%鹽酸甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL鹽酸小檗堿20μg）。供試品溶液：取樣品約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入1%鹽酸甲醇50mL，精密稱定質量，60℃水浴15min，放冷，再精密稱定重量，用1%鹽酸甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 線性范圍考察 精密稱取鹽酸小檗堿對照品15.0mg，置15mL量瓶中，加1%鹽酸甲醇使溶解并稀釋至刻度，精密量取0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mL，分別置 10mL 量瓶中，加 1%鹽酸甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液10μL注入液相色譜儀，測定，以峰面積積分為縱坐標（Y），鹽酸小檗堿溶液質量濃度為橫坐標（X），求得回歸方程為：Y=5×10-5X-0.5225，r=0.9999。鹽酸小檗堿溶液質量濃度在5.0～80.0μg/mL范圍內進樣，其峰面積與質量濃度呈良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗 取線性關系測定項下的10μg/mL對照品溶液，精密量取10μL進樣，重復測定5次，測定峰面積，RSD=1.6%。

2.2.6 穩定性試驗 取同一批號（090121）樣品的供試液，分別于 0、2、4、8、16、24h 進行測定，結果供試品溶液中鹽酸小檗堿的RSD為1.9%。表明樣品供試液在24h內相對穩定。

2.2.7 加樣回收試驗 取復方蕎桃顆粒樣品 （批號20091003）約0.5g，精密稱定，共6份，分別加入鹽酸小檗堿對照品適量，混勻，按2.2.3項下方法制成供試品溶液后進樣測定，結果表1。

表1 加樣回收試驗結果 （n=6）

2.2.8 樣品含量測定 取3批復方蕎桃顆粒樣品（批號20090808、20091003、20091216），精密稱定，按 2.2.3 項下方法制成供試品溶液，再按2.2.4項下方法進行衍生化處理后，照上述色譜條件測定，按2.2.4項下回歸方程進行計算，結果3批樣品鹽酸小檗堿含量分別為 2.1、2.3、2.0mg/g。

3 討 論

黃連具清熱燥濕，瀉火解毒的功效，是處方中治療濕熱痞滿，嘔吐吞酸，有舒肝和胃止嘔之效的主要藥味。黃連中主要成分為鹽酸小檗堿，為此，選擇黃連中鹽酸小檗堿為含量測定指標，結果準確，方法簡便且重現性好。

［1］國家藥典委員會.中國藥典：一部［M］.北京：化學工業出版社，2005：附錄ⅥB.