清胃理腸膠囊對實驗性大鼠潰瘍性結腸炎作用機制的研究*

劉先知 王長海 劉華劍 田 心

第四軍醫大學西京醫院（陜西西安710032）

潰瘍性結腸炎（UC）是一種慢性直腸和結腸炎性疾病，病因尚未明確，具有反復發作難以治愈的特點，且存在癌變可能性［1］。目前西醫治療主要采用氨基水楊酸制劑和腎上腺皮質激素等藥物，但不良反應多，停藥易復發。大量臨床資料表明中醫藥在UC治療中具有全面調節機體免疫力，不良反應少及有效預防復發等優勢。清胃理腸膠囊是第四軍醫大學西京醫院王長海教授自制中成藥，臨床治療UC 8年，療效確切。本實驗從病理變化和免疫因素方面探討了清胃理腸膠囊的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物普通級SD大鼠62只，體質量180～220 g，由第四軍醫大學實驗動物中心提供。隨機分為正常組12只和造模組50只。

1.2 試藥和儀器清胃理腸膠囊（由枳實、山梔、白及、陳皮、半夏、檳榔、萊菔子、延胡索、大黃、生甘草組成）由第四軍醫大學西京醫院藥劑科提供，0.3g/粒。棄膠囊殼，用蒸餾水將藥粉配置成100mg/mL的混懸液。柳氮磺吡啶片（SASP），批號：091110，由上海信誼嘉華藥業有限公司生產，0.25g/片，粉碎，用蒸餾水配置成50 mg/mL的混懸液。2，4-二硝基氯苯由上海日初生物公司提供；抗體及溶血素由eBioscience公司生產。流式細胞儀為美國BD公司生產，型號FACS Aria。

1.3 模型制備及分組造模組大鼠頸背部剃毛，每日以20g/L的 2，4-二硝基氯苯丙酮液滴背1次，每次每鼠0.3mL，連續14d，第15日用直徑2mm硅膠管經肛門插入結腸8cm處，注入0.04mmol/L的2，4-二硝基氯苯乙醇液0.25mL，第16日同部位注入體積分數8%的醋酸溶液2mL，準確計時15s后用0.85%氯化鈉溶液5mL沖洗［2］。造模結束次日，觀察大鼠一般狀況及糞便形態。并隨機抽取正常組及造模組各2只大鼠處死，分離肛門上7～9cm處的結腸黏膜，肉眼觀察比較其形態區別，并取部分結腸10%甲醛固定，做病理切片檢查，判斷造模是否成功。余造模組48只大鼠隨機分為模型對照組、清胃理腸膠囊組、柳氮磺吡啶（SASP）組，每組 16 只。

1.4 給藥方式造模結束次日灌胃給藥。根據人和動物用藥劑量換算公式［3］（大鼠用藥劑量=6.25×人的用藥劑量）確定給藥劑量。大鼠稱體質量，取約值，清胃理腸膠囊組按3mL/只給藥，SASP組按2mL/只給藥。正常組和模型對照組給予生理鹽水。每日1次灌胃給藥，共持續20d。

1.5 指標觀察觀察造模過程中及給藥前后各組大鼠的一般情況。T淋巴細胞亞群檢測：給藥結束次日，2%戊巴比妥鈉（3mL/kg）麻醉大鼠，心臟取血100μL置入肝素鈉真空抗凝采血管，加 CD4、CD8單克隆抗體各 20μL；混勻避光孵育 30min，加溶血素0.5mL混勻，10min后1500r/min離心5min，去上清，加PBS 500μL上機檢測。病理檢查：取血后，剖腹取肛門以上6～9cm處腸段，沿腸系膜縱軸剪開，冰生理鹽水洗凈；黏膜向上平鋪，觀察病理改變。然后剪取部分結腸，10%甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，光鏡下觀察病理變化。

1.6 統計學處理采用SPSS 12.0統計軟件處理數據分析。數據用±s）表示，組間比較采用SNK-q檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 大鼠一般情況造模后3d內大鼠精神萎靡，迅速消瘦，皮毛稀疏，出現膿血便。個別出現腹部鼓脹，該類動物都在2～3d內死亡。模型對照組死亡3只，清胃理腸膠囊組死亡1只，SASP組死亡2只。

2.2 病理改變大體病理改變：肉眼可見，正常大鼠結腸黏膜完整，薄而光滑，有一定透明度；模型大鼠結腸黏膜普遍水腫、糜爛、潰瘍、附著偽膜，并覆蓋有連結成片的膿苔。組織病理改變：光鏡下可見，正常組黏膜上皮結構完整，固有層腺體排列整齊密集；模型組黏膜上皮細胞廣泛脫落，血管壁增厚，組織水腫，大量炎細胞浸潤，潰瘍融合成片，隱窩消失；經治療，清胃理腸膠囊組大鼠結腸接近正常，上皮結構完整，充血消失，有少量炎細胞浸潤；SASP組仍有輕度水腫（圖1）。T淋巴細胞亞群的變化：模型組與正常組比較下降明顯，升高，差異具有統計意義（P＜0.05）；清胃理腸膠囊組和SASP組經治療后，與模型組比較，均顯示水平升高，降低，差異有統計意義（P＜0.05）；清胃理腸膠囊組指標接近正常對照組，兩組之間無顯著差異（P＞0.05），其作用優于 SASP 組（P＜0.05）。具體結果見表1。

圖1 各組大鼠病理組織圖（×400）

3 討 論

UC急性期的基本病理改變為固有膜內彌漫性淋巴細胞、漿細胞、單核細胞等細胞浸潤，在反復發作的慢性過程中，因黏膜不斷被破壞和修復，鏡下可見隱窩結構紊亂表現為腺體變形、排列紊亂、數目減少等萎縮改變，伴杯狀細胞減少和帕內特細胞化生。其病理改變的機制目前認為是由于腸黏膜上皮細胞凋亡、增殖異常導致腸黏膜上皮缺失，細胞間緊密連接的動態完整性破壞，削弱和破壞腸黏膜屏障，使原本受到隔離或可被清除的致病因子獲得機會直接接觸腸黏膜［4］。

表1 各組大鼠檢測結果比較 （±s）

表1 各組大鼠檢測結果比較 （±s）

與模型組比較，*P＜0.05；與 SASP組比較，△P＜0.05。

組 別 n CD4+（%） CD8+（%） CD4+/CD8+正常組 10 44.8±3.6* 24.9±1.4* 1.80±0.20*模型組 13 36.9±1.1 17.9±2.9 2.49±0.29清胃理腸膠囊組 15 43.8±3.4*△ 24.3±1.2*△ 1.81±0.22*△SASP 組 14 41.8±1.7* 21.3±2.1* 1.97±0.13*

UC發病機制現尚不明確，但大量研究表明與機體免疫功能密切相關：多數UC患者存在細胞免疫失衡，各亞群間的功能不能互相協調而對腸黏膜造成損害。免疫調節細胞對維持免疫內環境的穩定起關鍵作用，現已明確亞群對免疫反應的發生和抗體的產生有抑制作用，亞群誘導免疫反應的產生和輔助抗體生成，二者之間的動態平衡決定了免疫反應是否發生，如二者比例失衡可影響抗體的生成，使UC的致病抗原不能得到徹底清除，從而與潰瘍性結腸炎的反復發作有密切關系［5］。

該病主要臨床癥狀有腹瀉、腹痛、膿血便、里急后重等，在中醫學屬于“腸癖”、“腸風”、“痢疾”等范疇，致病因素以濕熱之邪為主，濕熱蘊結，擾亂下焦氣化，故腹瀉；邪據于下焦致氣血不通，故腹痛，里急后重；濕熱之邪傷及血絡，故下痢赤白而成膿血便，又因濕性黏滯而纏綿難愈。清胃理腸膠囊組方為枳實、山梔、白及、陳皮、半夏、檳榔、萊菔子、延胡索、大黃、生甘草，以去濕熱之邪治本為基本原則，兼秉“行血則便膿自愈，調氣則后重自除”的治痢大法。山梔、半夏、檳榔、大黃等藥行氣燥濕除熱；枳實、陳皮、萊菔子調氣；白及、延胡索止血并行血；甘草為使調和眾藥。諸藥合用，行氣活血而治標，燥濕除熱而治本，可達標本同治之功，因此取得良好臨床療效。本實驗結果顯示，清胃理腸膠囊能改善病變結腸的病理損傷，并提升外周血、百分率，降低CD4+/CD8+水平，具有免疫調節作用。因此推斷清胃理腸膠囊主要通過改善結腸病理損傷以及調節機體免疫功能實現其對UC的治療作用。

［1］郝微微.潰瘍性結腸炎發病機理的研究進展［J］.陜西醫學雜志，2002，31（12）：1100-1102.

［2］江學良，崔慧斐.潰瘍性結腸炎［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2004：106.

［3］Capomolla S，Febo O，Gnemmi M，et al.β-Blockadetherapy in chronic heart failure：diastolic function and mitral regurgitation improvement by carvedilol［J］.AmHeart J，2000，139（4）：596-608.

［4］Yan SZ.Circulating lymghocyte Subpopulations in Crohn’s Disease［J］.Gastroenterol，1983，85（6）：1313.

［5］鄧志波.潰瘍性結腸炎外周血 T淋巴細胞亞群的研究［J］.河北醫學，2004，10（8）：675-676.