HPLC法測定復方鹽酸偽麻黃堿緩釋膠囊中主藥的含量

蘇 勍，徐光奇，莫宗琪，連素敏

鹽酸偽麻黃堿具有選擇性收縮血管作用，可收縮鼻腔、鼻竇及上呼吸道黏膜血管，消除組織水腫和充血，使呼吸道暢通[1]。萘普生鈉為新型非甾體抗炎藥，能抑制花生四烯酸代謝中的環加氧酶，減少前列腺素的合成，起到解熱、鎮痛、抗炎作用[2]。筆者以二者研制的復方鹽酸偽麻黃堿緩釋膠囊可有效控制流行性感冒引起的鼻塞、頭痛、發熱等癥狀。《中國藥典》2005版中，鹽酸偽麻黃堿和萘普生鈉的含量測定均采用非水滴定法，操作較繁瑣且無法同時檢測，本文介紹以HPLC法同時測定二者含量，建立了一種分離度好、準確、簡便、迅速的方法。

1 材 料

1.1 樣品與試劑 復方鹽酸偽麻黃堿緩釋膠囊 （自制。規格：鹽酸偽麻黃堿60 mg；萘普生鈉110 mg/粒。批號：090320、090321、090322）；鹽酸偽麻黃堿對照品（中國藥品生物制品檢定所）；萘普生鈉對照品（中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純（天津四友生物醫學技術有限公司）；磷酸、磷酸二氫鉀、十二烷基硫酸鈉均為市售分析純試劑。

1.2 儀器 SP8800高效液相色譜儀 （美國Spectra-Physics公司），Spectra100紫外檢測器 （美國Spectra-Physics公司），Echrom98色譜工作站 （大連依利特科學儀器有限公司），pHS-3C型酸度計（上海雷磁儀器廠）,PE Lambda2紫外-可見分光光度計（美國PE公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：KromasilC18色譜柱，250×4.6 mm，5 μ；流動相：磷酸鹽緩沖液（0.05 mol/L磷酸二氫鉀）—甲醇按照30∶70比例混合后，用磷酸調節pH值到3.0，每300 ml再加入十二烷基硫酸鈉0.1 g即得；檢測波長：215 nm；流速：1.0 ml/min。

2.2 系統適用性試驗 在“2.1”條色譜條件下，各組分分離效果良好，分離度R=9.0，理論塔板數以萘普生鈉計，不低于3000。

2.3 干擾試驗 按處方比例稱取輔料適量，以流動相配制成一定濃度的溶液，按上述色譜條件測定，可見輔料峰對測定無干擾。

2.4 標準曲線測定 分別精密稱取萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿對照品約100.6、50.5 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度，然后分別精密量取適量以甲醇稀釋配制，得到萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿的系列濃度樣品，各取10 μl進樣，按“2.1”項下色譜條件以HPLC法測定。以對照品峰面積（A）為橫坐標，對照品溶液濃度（C）為縱坐標，繪制標準曲線，結果萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿在質量濃度20.12～503.00 μg/ml和 10.10～252.50 μg/ml內呈較好的線性相關性。萘普生鈉的回歸方程為C=1.027×10-5A-14.633，r=0.99 9；鹽酸偽麻黃堿的回歸方程為C=6.133×10-5A-1.465，r=0.999 9。

2.5 最低檢測限 參照中國藥典2005年版二部附錄XVIIIA中方法，以信噪比為3∶1的相應量確分別確定萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿的檢測限，結果測得鹽酸偽麻黃堿的最低檢出量為0.6 ng，萘普生鈉的最低檢出量為0.11 ng。

2.6 精密度測定 配制萘普生鈉約100 g/ml、鹽酸偽麻黃堿約25 g/ml的對照品溶液，各取10 μl分別連續6次進樣分析，記錄峰面積，萘普生鈉與鹽酸偽麻黃堿平均值分別為11712306和421128，RSD分別為0.98%和1.17%，均<2.0%，符合要求。

2.7 穩定性試驗 配制萘普生鈉和鹽酸偽麻黃堿濃度約為50、25 μg/ml的溶液，在室溫下放置，分別于 0、2、4、6、8、12 h取樣10 μl進HPLC分析，記錄峰面積，2組分的含量測定結果與放置0 h時相比基本不變，萘普生鈉與鹽酸偽麻黃堿平均值分別為 4934262和 379547，RSD分別為 1.42%和1.08%，均<2.0%，符合要求。

2.8 回收率試驗 精密稱取萘普生鈉、鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每1 ml中約含萘普生鈉、鹽酸偽麻黃堿分別為110、60 μg的溶液作為對照品溶液。另精密稱取萘普生鈉樣品適量，按照處方比例加入輔料，然后加甲醇配成約85、110、130 μg/ml的溶液各3份作為萘普生鈉供試品溶液；取鹽酸偽麻黃堿樣品適量，按照處方比例加入輔料，然后加甲醇配制成約45、60、72 μg/ml的溶液各3份作為鹽酸偽麻黃堿供試品溶液，分別取上述對照品溶液與供試品溶液各10 μl注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，按外標法計算回收率。結果見表1。

2.9 三批樣品測定 取本品20粒，取內容物，精密稱取適量 （約相當于鹽酸偽麻黃堿60 mg，萘普生鈉110 mg），置100 ml量瓶中，加甲醇振搖溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液1 ml，置10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取減壓干燥至恒重的鹽酸偽麻黃堿對照品約60 mg，萘普生鈉對照品約110 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度搖勻，精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。結果見表2。

表 1 鹽酸偽麻黃堿和萘普生鈉含量測定回收率試驗

表 2 三批樣品的鹽酸偽麻黃堿及萘普生鈉含量（%）

3 討 論

3.1 檢測波長的選擇 取鹽酸偽麻黃堿和萘普生鈉適量，分別以甲醇溶解，作紫外掃描，在紫外光譜吸收區域內，二者均以末端吸收為主，故將檢測波長定為215 nm。

3.2 流動相的選擇 在實驗過程中，曾試用乙腈-磷酸鹽緩沖液，甲醇-磷酸鹽緩沖液等溶劑系統，并加入離子對試劑作比較，結果顯示，使用乙腈-磷酸鹽緩沖液系統雖結果靈敏，分離度好，但保留時間過長，故將流動相定為：磷酸鹽緩沖液（0.05 mol/L磷酸二氫鉀）-甲醇按照30∶70比例混合后，用磷酸調節pH值到3.0，每300 ml再加入十二烷基硫酸鈉0.1 g。在調節pH值過程中，開始曾用2 mol/L磷酸調節，但因加入量較多，改變了流動相比例，導致測定結果產生變化，故改為用磷酸調節。在本條件下，兩種組分的保留時間、峰形及分離度都較為理想，本方法操作簡便，結果準確，可作為評價復方鹽酸偽麻黃堿緩釋膠囊質量的可靠方法。

[1]湯 光，李大魁.現代臨床藥物學[M].北京：化學工業出版社，2003.605.

[2]石方云，洪建衡.萘普生與泰諾林退熱口服液退熱療效的對照觀察[J].新疆醫科大學學報，2002，25（1）：60.