人乳頭瘤病毒基因分型檢測在絕經后婦女HPV感染中的應用價值

呂 虹 劉志忠 劉競爭 邵春青 康熙雄

(首都醫科大學附屬北京天壇醫院檢驗科，北京 100050)

目前篩查是預防和控制宮頸癌的主要手段。隨著人乳頭瘤病毒(HPV)－DNA檢查的普及，年輕患者已逐步實現早期發現，早期治療〔1〕。本研究對絕經期婦女進行脫落細胞學及人乳頭瘤病毒基因型別進行分析，探討絕經期婦女HPV感染情況及與宮頸病變的相關性。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2009年1～12月我院婦科門診就診的絕經婦女480人，年齡45～82〔平均(56±6.5)〕歲。采樣使用專用的HPV采樣刷采集宮頸脫落細胞標本，采樣前3 d內無陰道用藥史，采樣前1 d起禁性生活。以專用細胞保存液保存標本，4℃冰箱保存，1 w內檢測。

1.2 儀器與試劑 用凱普導流雜交技術及其配套試劑(潮州凱普生物化學有限公司提供)，對21種常見的HPV基因型進行分型檢測，包括 13 種高危型 HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)，5 種低危型 HPV(6、11、42、43、44)和 3 種中國人常見的基因型HPV(53、66和CP8304)。

1.3 實驗過程 樣本DNA提取;PCR擴增;導流雜交;酶標顯色;結果判斷，根據芯片上HPV基因型分布相應位點判斷為何種基因型。

1.4 統計學方法 應用SPSS11.5統計軟件;計數資料以百分比表示，率的顯著性檢驗采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 檢出陽性率的危險分型 480名絕經婦女HPV總檢出陽性率為19.79%(95/480)，其中高危型檢出率為19.17%(92/480)，低危型檢出率為1.88%(9/480)。(多重感染重復計數)21種基因型中共檢出18種，有3種基因型未檢出，分別是高危型HPV-35和低危型HPV-42、HPV-43。HPV型別檢出率由高至低依次為HPV-16占4.79%(23/480)，HPV-52型占3.75%(18/480)，HPV-58型占2.71%(13/480)，HPV-53型占2.08%(10/480)，HPV-68型占 1.88%(9/480)，HPV-33型占 1.88%(9/480)，HPV-11型占 1.46%(7/480)，HPV-18型占 1.46(7/480)，HPV-cp8304型占 1.46%(7/480)，HPV-66 型占 1.25%(6/480)，HPV-31 型占 0.83%(4/480)，HPV-56型占 0.83%(4/480)，HPV-59型占 0.83%(4/480)，HPV-39型占 0.63%(3/480)，HPV-6型占0.42%(2/480)，HPV-51型占0.42%(2/480)，HPV-44型占 0.21%(1/480)，HPV-45型占 0.21%(1/480)。

2.2 陽性樣本與感染樣本的分型關系 在95例陽性樣本中，多重感染樣本為26例，占27.37%(26/95)，單一低危型感染3例，占陽性樣本比例為3.16%(3/95)，低危和高?；旌细腥?例，占陽性樣本比例為6.32%(6/95)，單一高危型感染66例，占陽性樣本比例為69.47%(66/95)，高危型多重感染20例，占陽性樣本比例為20.05%(20/95)。

2.3 陽性樣本年齡分組狀況 陽性樣本按年齡分為4個組，分別為≤50歲組、51～60歲組、61～70歲組和＞70歲組。各年齡組陽性例數及低危型、高危型、單一感染、多重感染的例數和比例的陽性率差異不顯著(χ2=1.482，P=0.686)。見表1。

表1 各年齡組HPV感染陽性例數及百分比〔n(%)〕

2.4 不同生殖道疾病(宮頸炎性病變、宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸癌)與體檢對照組比較 除宮頸炎性病變組外其余均有統計學差異(P＜0.05)。見表2。

表2 不同生殖系統疾病與體檢對照組HPV感染情況

3 討論

有研究表明，宮頸癌發病高峰年齡為35～39歲和60～64歲〔2〕，而HPV感染能否發展到宮頸上皮內高度病變和癌癥，主要取決于三個方面因素:病毒因素、宿主因素和環境協同因素。考慮到病毒因素，最重要的就是感染的HPV型號。大量流行病學資料結合實驗室的證據已經確定了HPV與宮頸癌有明顯的相關性(r=3.6～61.6)〔3〕，在宮頸低度病變的婦女中，高危型HPV感染陽性的婦女宮頸病變進展的危險性高于低危型HPV感染或HPV陰性的婦女，尤其是與HPV-16型呈強相關性。在本文檢出的病例中，高危16型的檢出率也是最高的，宮頸上皮內瘤樣病變與宮頸癌組同體檢組的HPV檢出率是有顯著性差異的〔4〕。

絕經期婦女有較高的HPV檢出率(本研究為19.79%)，除了與其年齡段為宮頸癌高發期以外，還與自我保健意識與認知程度有很大的相關性。在國家宣傳和兩癌(乳腺癌和宮頸癌)篩查政策的出臺，不少適齡女性均進行了宮頸癌的篩查，這對于宮頸癌的早期診斷和治療大有裨益。本研究檢測例數也相對偏少，但是陽性檢出率卻不低。絕經期婦女大部分為50歲以上婦女，這個年齡段的婦女知識水平有限，身體基礎疾病較多，免疫功能較差，對宮頸癌的篩查和自我保健意識較為薄弱。因此，對于絕經期的這部分婦女，有必要多渠道的加強宣傳宮頸癌的防治知識，增強對宮頸癌防治的意識及加強宮頸癌的普查力度。

1 Parkin DM，Bray F，Ferlay J，et al.Estimating the world cancer burden:Globocan 2000〔J〕.Int J Cancer，2001;94(2):153-6.

2 Zhang WY，Xue YZ，Chen M，et al.Prevalence of high-risk human papillomavirus infection in different cervical lesion among organized health-examination women in Shanghai，Cnina〔J〕.Chin Med J，2008;121(16):1578-82.

3 Cai HB，Ding XH，Chen CC.Prevalence of single and multiple human Papillomavirus types in cervical cancer and precursor lesions in Hubei，China〔J〕.Oncology，2009;76:157-61.

4 Ho CM，Chien TY，Huang SH，et al.Integrated human papillomavirus types 52 and 58 are infrequently found in cervical cancer，and high viral loads predict risk of cervical cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2006;102(1):54-60.