VEGF 與Ki-67在結腸癌組織中的表達及意義

徐秀花

(大同市第二人民醫院，山西大同 037005)

結腸癌為消化道常見的惡性腫瘤，它的形成及發展受多種因素的影響，其中一個重要的因素是血管的形成，血管內皮生長因子VEGF被認為是最重要的血管形成因子[1]，有了血管的滋養，腫瘤才能不斷的生長，血管形成越多，腫瘤生長越快，患者的預后可能就越差。Ki-67是一種反映細胞分裂和增殖活性的標志物，Ki-67在腫瘤組織中表達越高，表明腫瘤細胞增殖越活躍，提示腫瘤生長越快[2]。本研究應用免疫組化法檢測VEGF和細胞增殖核抗原Ki-67在腫瘤細胞中的表達情況，以期為結腸癌患者術后的臨床治療和預后評估提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集山西省大同市第二人民醫院病理科2010年2～6月間結腸癌石蠟標本55例，HE染色，所有患者均經兩位病理學專家診斷證實為結腸腺癌，其中男性26例，女性29例，年齡37～79歲，中位年齡57歲，腫瘤直徑中位數5.1 cm，發生淋巴結轉移21例，按分化程度將其分為高、中、低三個級別，按照TNM分期標準進行分類，Ⅰ期0例，Ⅱ期15例，Ⅲ22例，Ⅳ期18例，病理參數見表1。

表1 VEGF與Ki-67在結腸癌組織中的表達與臨床病理參數的關系Table 1 Relationship between Expression of VEGF and Ki-67 in Colon CanceRand Clinical Pathology Parameter

1.2 免疫組織化學

采用EnVision法，VEGF及 Ki-67單克隆抗體及EnVision試劑盒購自北京中杉生物工程有限公司。步驟按試劑說明書進行。

1.3 結果判讀標準

VEGF以細胞漿出現棕黃色顆粒為陽性，Ki-67以細胞核內出現棕黃色或棕褐色顆粒即為增殖細胞，光鏡下隨機選取10個高倍視野，每個視野計數100個細胞，共計數1 000個細胞，計算陽性細胞百分率，陽性細胞數超過腫瘤細胞總數的10%為陽性，小于10%為陰性。

1.4 統計學處理

所有數據用SPSS11.5統計軟件進行分析。采用χ2檢驗和Pearson相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF及Ki-67表達與結腸癌臨床病理參數的關系

55例結腸癌組織中，VEGF陽性表達36例，陽性率65.5%，VEGF陽性表達與患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度及TNM分期無相關性(P＞0.05)，而與淋巴結轉移有相關性(P＜0.05)，見表1，圖1。

圖1 VEGF在結腸癌中的表達Fig 1 Expression of VEGF in Colon Cancer

Ki-67陽性率為54.5%，Ki-67陽性表達也與患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度及TNM分期無相關性(P＞0.05)，與淋巴結轉移有顯著相關性(P＜0.05)，見表1，圖2。

圖2 Ki-67在結腸癌中的表達Fig 2 Expression of Ki-67 in Colon Cancer

2.2 結腸癌中VEGF與Ki-67表達之間的相關性分析

VEGF與Ki-67均陽性表達者24例，均陰性者13例，經Pearson相關性分析，二者呈顯著正相關(r=0.335，P=0.012)。見表 2。

表2 結腸癌組織中VEGF與Ki-67表達的相關性分析 例Table 2 Analysis of Expression of VEGF and Ki-67 in Colon CanceRTissue case

3 討論

結腸癌是我國常見的惡性腫瘤之一，位居惡性腫瘤的第4位，且發病率呈逐年上升趨勢[3]。形成腫瘤的原因可能與腫瘤血管形成、凋亡抑制及腫瘤細胞的克隆性增殖等有關，而這些原因可能是導致結腸癌手術失敗和患者死亡的主要原因，同時也是影響患者術后生存率的重要因素，因此研究結腸癌術后的復發或轉移對判斷患者的預后及制定治療方案有重要的臨床意義。

血管內皮生長因子VEGF可以通過促進結腸癌中血管的生成而促進癌的不斷生長、浸潤甚至轉移，其表達程度的高低與結腸癌的生物學行為密切相關，它的過表達可能是結腸癌預后的不良因子[4]。本研究結果顯示，VEGF在結腸癌組織中表達陽性率為65.5%，其表達程度與患者的年齡、性別、分化程度及TNM分期均無關，尤其從與分化程度及TNM分期比較中可知，VEGF在腫瘤的生長期均參與了血管的形成，無論腫瘤分化程度如何或者腫瘤位于第幾期。

本組患者中發生淋巴結轉移21例，其中20例VEGF呈陽性表達，發生淋巴結轉移的患者其陽性表達顯著高于無轉移的患者，兩者比較差異有統計學意義，提示在結腸癌進展過程中，VEGF可能對結腸癌的侵襲轉移起了一定的促進作用。有文獻報道，與結腸癌腫瘤相關的巨噬細胞有分泌VEGF-C、D的功能，它可通過自身分泌一些因子而影響腫瘤細胞內淋巴管生成因子的表達，然后對結腸癌腫瘤局部淋巴管的生成和轉移起到一定的促進作用[5]，可知VEGF家族在結腸癌淋巴結轉移過程中可能起著一定的作用，由此可提示抑制VEGF的促血管生成作用，可能會減慢或抑制腫瘤的進展。已有研究顯示，一些藥物能夠抑制結腸癌腫瘤血管的形成，抑制VEGF的釋放，使其發生壞死以及減少腫瘤浸潤及轉移的作用[6，7]。張曉雨等研究也認為VEGF在結直腸癌組織中的表達可以作為判定患者病情進展的標志之一，并且認為VEGF陽性表達的患者其生存時間顯著低于陰性表達的患者[8]。研究中發現19例VEGF陰性表達的患者，有1例直徑大于5.1 cm，已發生淋巴結轉移并且存在壞死，所以建議對該患者應密切隨訪，觀察病情變化。同樣無發生淋巴結轉移而VEGF陽性表達的16例，其中3例為腫瘤直徑小于5.1 cm，TNMⅡ期患者，提示這類患者雖然還未發生淋巴結轉移但是患者應該引起注意，定期檢查。

Ki-67是反映細胞分裂和增殖活性的標記物，其確切功能目前尚不清楚，研究表明，它與多種腫瘤的發生發展、轉移及預后密切相關[9]，已成為檢測腫瘤細胞增殖活性的有效指標之一[10]。在結腸癌中，Ki-67表達升高與結腸癌的浸潤深度和淋巴結轉移有關，Ki-67表達高的患者預后較差[11，12]。本研究均采用較新鮮標本，目的就是能夠使Ki-67的核表達更佳，結果顯示Ki-67陽性表達與患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度及TNM分期無相關性，只與淋巴結轉移有關，提示發生淋巴結轉移的患者細胞的增殖活性較高，21例中有19例發生淋巴結轉移的患者Ki-67核增殖指數大于10%，表明這類患者預后可能較差，對未發生淋巴結轉移的11例增殖指數高的患者進行分析，發現2例為TNMⅡ期患者，因此建議對其密切隨訪。

對VEGF和Ki-67表達患者進行分析，發現二者有共同陽性患者24例，共同陰性13例，統計學分析表明二者間有顯著相關性，該結果與在乳腺癌中的表達[13]相似，在結腸癌中尚未見報道。因此推測腫瘤在生長過程中，由于腫瘤細胞要不斷的生長，導致其不斷分泌VEGF進而刺激血管的形成，這樣加快了腫瘤的進一步增殖，腫瘤細胞增殖活性增強，又導致腫瘤的不斷生長，這種周而復始的惡性循環引起腫瘤發生侵襲或轉移，從而導致患者的預后較差，因此認為VEGF和Ki-67共同表達患者預后相對更差，術后應該引起足夠的重視。所以二者聯合檢測對結腸癌的預后判斷有一定的價值。

[1] Liang J，Wang H，Xiao H.Relationship and Prognostic Significance of SPARC and VEGF Protein Expression in Colon Cancer[J].J Exp Clin CanceRRes，2010，29(1):71.

[2] Yerushalmi R，Woods R，Ravdin PM.Ki-67 in Breast Cancer:Prognostic and Predictive Potential[J].Lancet Oncol，2010，11(2):74-83.

[3] 湯釗猷.現代腫瘤學[M].2版.上海:復旦大學出版社，2006.

[4] Des Guetz G，Uzzan B，Nicolas P，et al.Microvessel Density and VEGF Expression are Prognostic Factors in Colorectal Cancer[J].Meta-analysis of the Literature.BRJ Cancer，2006，94(12):1823-1832.

[5] 秦翠云，強 榮，高俊萍.結腸癌相關基因研究進展[J].第四軍醫大學學報，2008，29(23):2204-2205.

[6] Wang HM，Zhang GY.Indomethacin Suppressesgrowth of Colon Cancervia Inhibition of Angiogenesis in Vivo[J].World J Gastroenterol，2005，11(3):340-343.

[7] 陳光俠，何曉華，陸敬華，等.尼美舒利抑制結腸癌LOVO細胞增殖及轉移的機制[J].胃腸病學和肝病學雜志，2010，19(2):120-122.

[8] 張曉雨，周建農，張彤.survivin、VEGF及Ki-67在結直腸癌中的表達及其臨床意義[J].腫瘤防治研究，2007，34(1):35-38.

[9] Liu M，Lawson G，Delos M，et al.Predicative Value of the Fraction of CanceRCells Immunolabeled foRProliferating Cell NucleaRAntigen oRKi-67 in Biopsies of Head and Neck Carcinomas to Identify Lymph Node Metastasis:Comparison with Clinical and Radiologic Examinations[J].Head Neck，2003，25(4):280-288.

[10] Niem czyk K，Vaneecloo FM，Lecmte MH.et al.Corre Lation between Ki-67 Index and some Clinical Aspects of Acoustic Neuromas[J].Otolaryngol Head Neck Surg，2000，123(6):779-783.

[11] 陳 燕.Her-2和Ki-67在結腸癌中的表達及其意義[J].臨床軍醫雜志，2009，37(5):787-789.

[12] Kuniyasu H，Ove N，Shiqeish，et al.Prospective Study of Ki-67 Labeling Index in the Mucosa Adjacent to CanceRas a MarkeRfoRColorectal Cancermetastasis[J].J Exp Clin CanceRRes，2001，20(4):543-548.

[13] 張 凡，張九鴻，段彩霞，等.Ki-67、VEGF、CD34表達與病理類型相關性的研究[J].河北北方學院學報，2006，23(6):1-5.