嬰兒配方奶粉中葉黃素測定

陶大利

（黑龍江省農墾乳品檢測中心，黑龍江省哈爾濱 150078 ）

葉黃素（Lutein）（3,3-二羥基-α-胡蘿卜素）是一種萜，分子式：C40H56O2,分子量：568.85。［1］它是一種廣泛存在于蔬菜、花卉、水果與某些藻類生物中的天然類胡蘿卜素，其色澤鮮艷，著色力強，抗氧化性好，安全無毒害，具有豐富的營養價值，被廣泛的應用于食品、保健品、化妝品、醫藥、煙草和動禽類飼料的多個領域。［2］近些年的研究表明，葉黃素是幫助眼睛發育的關鍵營養元素，它具有過濾藍光和抗氧化的作用，是嬰幼兒的“隱形太陽鏡”。所以葉黃素被廣泛的添加到嬰幼兒配方奶粉中。本文以GB/T23209-2008（奶粉中葉黃素的測定 液相色譜-紫外檢測器）為基礎，對方法進行了改進，提高了對奶粉中葉黃素的提取效率。

1 實驗部分

1.1 試劑

甲醇：色譜純；甲基叔丁基醚：色譜純；丙酮：優級純；2,6-二叔丁基對甲酚（BHT）：純度大于99%；葉黃素標準品；

1.2 儀器與材料

PE高效液相色譜儀（帶鎢燈）；分析天平：感量0. 1mg；漩渦振蕩器；高速離心機；

1.3 方法

1.3.1 處理步驟

準確稱取奶粉樣品0.5-1g（精確到0.1mg）到30mL的塑料離心管中，加入5mL 40℃水充分溶劑，用鋁箔紙包裹離心管外部（避光），加入10mL含0.1%2,6-二叔丁基甲酚（BHT）的丙酮溶液，分數次渦旋震蕩5min,使水溶液和丙酮溶液能充分混合，再超聲10min,向離心管中加入4g氯化鈉，分數次渦旋震蕩5min，以4000轉/min，離心5min,上清液過0.45μ m有機濾膜過濾，上機。樣品含量低時可吸取上清液5mL 30℃氮氣吹干濃縮至近干，再用含0.1%2,6-二叔丁基甲酚（BHT）的丙酮溶液定容至1mL。

1.3.2 儀器條件

a)色譜柱：C30色譜柱4.6×250,5μm；

b)柱溫：30℃；

c)流速：1.0mL/min；

d)波長：445nm；

e)進樣量：40μL；

f）流動相：A(甲醇)，B（甲基叔丁基醚）梯度洗脫見表1

1.3.3 測定條件

用葉黃素標準工作液分別進樣，葉黃素的參考保留時間為5.47min，以標準系列工作液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線。用標準工作曲線計算未知樣品的濃度，進行結果計算，用以上條件得到的葉黃素色譜圖入下圖：圖1為葉黃素標準品圖譜，圖2為嬰兒配方奶粉譜圖

1.3.4 計算公式

式中 X：樣品中葉黃素的含量，μg/100g；

C:由標準曲線中查得的試樣中葉黃素的濃度，μg/mL

V:試樣稀釋體積，mL；

m:試樣的質量，g；

2 結果

2.1 標準曲線

在選定的色譜條件下，將葉黃素標準溶液配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、1.0、2.0μg/mL 6個濃度系列，在此濃度范圍內，濃度與對應的峰面積呈線性關系，線性方程為：y=379874.03X+14289.56,相關系數R2=0.9990如圖3

2.2 精密度與重現性

選用含有葉黃素的嬰兒配方奶粉（育兒康幼兒配方奶粉）進行6平行試驗。結果如表2

2.3 回收率

選用同上的樣品（育兒康幼兒配方奶粉）分別稱取1g樣品，兩個做空白，分別在樣品中加入0.5μg、 1μg、2μg、5μg三個梯度，每個梯度做4平行（n=4）結果如表3

由表2得出，加標量在0.5～5μg，折算成奶粉的含量為50～500μg/100g時，回收率在92.8～103.5之間，RSD%在1.2～3.5之間

2.4 檢出限

當稱樣量為1g，樣品經濃縮5倍，進樣量為40μL時，以3倍信噪比S/N計算，該方法的檢出限為5μg/100g。

3 討論

由于奶粉樣品呈細小的顆粒狀，如果按照標準GB/T 23209-2008中的處理方法，雖然也可以獲得較高的回收率，但不能將樣品包裹的葉黃素完全釋放出來，造成樣品的測試結果偏低很多，并且因為葉黃素在奶粉樣品中包埋的程度不一致，使測試結果的重現性很差。解決這一問題可以先用溫水將樣品充分溶解，再用丙酮溶液提取，再用氯化鈉去飽和水溶液［3］，離心使水相與丙酮溶液徹底分開。另外葉黃素遇到光照很容易損失，所以在整個處理過程中都應盡量避光，可以在離心管外部裹上鋁箔紙來避免光照。

本方法處理簡單，易操作，回收率和重現性好，適合嬰兒配方奶粉中葉黃素的測定。

[1]梅益，中國百科全書（化學卷）Ⅱ［M］.北京：中國百科全書出版社，1989.1098-1099

[2]孫曉霞劉云鳳，章鵬飛，葉黃素在食品中的應用.中國食品添加劑，1006-2513（2007）4-0127-05

[3]GB/T 5009.20-2003 食品中有機磷農藥殘留的測量，6.2凈化