銀杏達莫注射液中雙嘧達莫及其制劑含量測定研究進展

徐世霞

廣西壯族自治區北海食品藥品檢驗所，廣西北海536000

雙嘧達莫 (又稱潘生丁)為一種含氮雜環的嘧啶類藥物，化學式為C24H40N8O4，是一類較強的冠狀動脈血管擴張劑，也是一種受體阻斷劑，它能促進側枝循環發揮療效，臨床上主要用于治療和預防心絞痛，心肌梗死，還能抑制血小板聚集，防止血栓形成［1］。隨著雙嘧達莫臨床應用的擴大，其相關制劑的應用也更為廣泛，質量控制相關研究報道也更多。本文就近年來以下測定方法在雙嘧達莫含量測定中的應用進展報道作一綜述，供今后對雙嘧達莫及制劑中雙嘧達莫含量測定研究參考。

1 高效液相色譜法

朱旭等［2］用高效液相色譜法測定雙嘧達莫緩釋片的含量，采用Eclipse XDB C18色譜柱，流動相為甲醇:水:磷酸:二乙胺 (275:225:0．3:0．1);檢測波長:283nm;結果雙嘧達莫在0.16～1.6μg范圍內線性關系良好，平均回收率為100.63%。畢雨萌等［3］建立了銀杏達莫注射液中雙嘧達莫、槲皮素、山柰素和異鼠李素4種成分的反相高效液相色譜分析方法。他們選用SCIENHOME Kromasil C18柱，甲醇—0.4%磷酸溶液 (55:45)為流動相，于360nm測定銀杏達莫注射液中上述4種成分的含量。結果雙嘧達莫、槲皮素、山柰素和異鼠李素分別在21.7～261.1μg/m L，8.0 ～ 96.0μg/mL、7.75 ～ 93.0μg/mL 及 5.75 ～69.0μg/mL內峰面積與濃度呈良好的線性關系。4種成分的平均回收率分別為100.3%、100.0%、99.9%、99.8%。楊燕云等［4］建立了測定阿司達莫緩釋片含量的方法。采用HPLC法，色譜柱為 Diamonsil C18柱，流動相為甲醇—0.05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液 (52:48)，檢測波長275 nm。結果雙嘧達莫的線性范圍為20～120μg/ml，低、中、高3種濃度的平均回收率分別為98.6%±2.3%、99.0%±1.6%、101.4% ±2.3%。陳岐信等［5］建立了高效液相色譜法同時測定雙嘧達莫阿司匹林胃內漂浮片的含量。采用Zorbax SB－C18色譜柱，流動相為甲醇—水—三乙胺—高氯酸 (50:48.75:0.75:0.5)。檢測波長280nn。結果:雙嘧達莫和阿司匹林分別在80～400mg/L和10～50mg/L濃度范圍內線性關系良好，平均回收率分別為99.09%和98.73%。

2 非水滴定法

曾毅等［6］探討了高氯酸非水滴定法和高效液相色譜法測定雙嘧達莫原料藥含量的可行性。試驗中非水滴定法采用電位法指示終點，并考察了不同溶劑對滴定的影響;HPLC法中，色譜柱為C18柱，流動相為乙腈—20mmol·L－1磷酸二氫鉀 (含1．0%三乙胺，磷酸調pH至4．0)=35:65;并與《中國藥典》規定的溴酸鉀滴定法進行比較。試驗結果為:非水滴定法、HPLC法和溴酸鉀滴定法測得雙嘧達莫的含量分別為101.36%、101.11%、100.56%。通過試驗可知高氯酸非水滴定法和HPLC法均可用于雙嘧達莫原料藥的含量測定，且高氯酸非水滴定法操作更簡便、快捷。

3 電化學法

李瀟［7］報道了用聚氯乙烯膜雙嘧迭莫電極法測定雙嘧迭莫片中雙嘧迭莫含量的方法。試驗利用該電極對雙嘧達莫的響應，測定雙嘧達莫片含量。結果電極的Nermt響應范圍為1.0×10－2～ 4.8×10－2mol/L，級差為 40mv/pC，檢出限為3.2×10－5mol/L。通過試驗可知聚氯乙烯膜電極法可簡便、快速、準確地檢測片劑中雙嘧達莫的含量。李利軍等［8］在玻碳電極上成功地制備了多壁碳納米管修飾電極。研究了雙嘧達莫 (DPD)在該修飾電極上的電化學行為。基于表面活性效應，得知十二烷基磺酸鈉 (SDS)可提高DPD在多壁碳納米管修飾電極的氧化電流，修飾電極對其具有明顯的增敏作用，并對存在的機理作了探討。在SDS介質存在下，通過DPD在多壁碳納米管修飾電極上的氧化和高錳酸鉀在另一電極上的還原構建不可逆雙安培檢測體系，建立直接測定DPD的新方法。在0.05mol/L H2SO4介質中，DPD氧化峰電流與其濃度在1.5×10－6～1.0×10－3mol/L范圍內呈線性關系，方法檢出限為8.0×10－7mol/L。陳連山［9］報道了一種以雙嘧達莫與碘分子形成的締合物為電活性物的PVC膜雙嘧達莫涂絲選擇電極，測定了雙嘧達莫片的含量。電極的線性響應范圍為1.0×10－2～4.0×10－5mol/L，級差電位為56mV/pC，檢測限為2.6×10－5mol/L。該電極響應迅速，重現性好，結果與藥典法相符。

4 化學發光法

化學發光是一種由化學反應引起的光輻射現象。它是基于分子發光強度和被測物含量之問的關系建立的分析方法［10］。石文兵［11］建立了反膠束化學發光法測定雙嘧達莫含量。其利用在酸性條件下，雙嘧達莫分子中氮原子質子化后與陰離子AuCl4－1形成離子締合物，被氯仿帶入魯米諾的氯化十六烷基三甲基銨反膠束中，離解出來AuCl4－1立即與魯米諾產生化學發光。在一定濃度范圍內，發光強度與雙嘧達莫的含量成線性關系，從而間接測定雙嘧達莫的含量。結果:在優化的試驗條件下，雙嘧達莫的檢測線性范圍為0.01～25mg/L，檢出限為0.3μg/L。試驗結果表明該法簡單、靈敏，可用于針劑和片劑中雙嘧達莫的測定。趙小輝等［12］在pH=1.98緩沖溶液中，利用雙嘧達莫可與染料探針曙紅Y通過相互結合，產生以315nm為特征峰的共振光散射增強信號。在該特征波長下測定的增強共振光散射強度與雙嘧達莫濃度在一定范圍內呈線性關系，據此建立了測定痕量雙嘧達莫的共振光散射法。當曙紅Y的濃度為 3.0×10－5moL/L時，雙嘧達莫的檢出限可達16.1nmoL/L。同時進行了實際樣品的測定，回收率為(99.2±3.3)% ～ (102.0±1.7)%。劉清慧等［13］研究了雙嘧達莫在鐵氰化鉀－魯米諾化學發光反應體系中的后化學發光反應，并在研究其反應的動力學性質、化學發光光譜、熒光光譜以及一些相關問題的基礎上，探討了反應機理;合成了雙嘧達莫的分子印跡聚合物，以此聚合物為分子識別物質，利用鐵氰化鉀－魯米諾－雙嘧達莫后化學發光體系，建立了測定雙嘧達莫的高選擇性分子印跡－后化學發光分析方法。所建方法的線性范圍為1.0×10－8～1.0×10－6g/mL，檢出限為3 ×10－9g/m L。饒志明等［14］提出了雙嘧達莫與高錳酸鉀和羅丹明B的化學發光新體系，并發現表面活性劑吐溫－80可顯著增強該體系的化學發光，據此建立了流動注射化學發光測定雙嘧達莫的新方法。該方法選擇性好，靈敏度高，線性范圍寬，雙嘧達莫在5.0×10－8～5.0×10－8g/mL范圍內與發光信號呈線性關系，檢出限1.7 ×10－8g/mL。

5 其他方法

隨著各種新技術的發展，近年來運用新技術新儀器測定雙嘧達莫含量的報道也越來越多。李華侃等［15］用光度法研究了雙嘧達莫與氯冉酸之間發生的電荷轉移反應，其中雙嘧達莫是電子給予體，氯冉酸是電子接受體，反應介質是乙醇－丙酮混合溶劑。應用等摩爾連續變換法和摩爾比法測得荷移絡合物的組成為1:1，穩定常數為3.9×104。絡合物在526nm波長處有最大吸收，雙嘧達莫濃度在10～380mg/L范圍內服從比耳定律，相關系數為0.9996，表觀摩爾吸光系數為1.34×103L/mol/cm，回收率為98.4%。應用該法可以快速測定雙嘧達莫片中有效成分的含量，結果滿意。彭慧等［16］建立一種簡便、快速的高效液相色譜一質譜聯用法 (HPLC－ESI－MS)測定中國健康人體內血漿中雙嘧達莫濃度的方法。筆者以乙腈沉淀處理血樣，采用MACHEREY－MAGEL NUCLEODUR 100－5 C18柱，流動相的組成為乙腈－水 (含30mmol/L醋酸銨)=41.3:58.7;流速0.25mL/min。質譜條件采用正離子檢測的電噴霧電離方式 (+)ESI，其噴霧電壓3.30kV，第一級錐孔電壓59V;掃描方式為選擇離子監測 (SIR)，用于定量分析監測的離子雙嘧達莫為 505.6m/z，唑吡坦 (內標)為308.3m/z。試驗結果為:雙嘧達莫最低檢測限為3.0μg/L。線性范圍20～2500μg/L。高、中、低濃度回收率分別為105.0%、105.6%、100.4%。該方法靈敏度高、快速、簡便、無雜質干擾，適合于雙嘧達莫血藥濃度檢測及藥物動力學研究。

6 結語

雙嘧達莫為一種含氮雜環的嘧啶類藥物，結構較為復雜，這使得有關雙嘧達莫含量測定方法的研究報道很多。HPLC法因儀器普遍、操作簡單、重現性好而優于其他方法而被大量應用。電化學法具有較高的選擇性和靈敏度、修飾電極易于制作、穩定性和重現性良好、樣品處理方法簡單快速，適合于實時在線分析。化學發光法是近年來發展起來的一種靈敏度極高的痕量元素分析新技術，其具有靈敏度高、分析速度快、分析成本低、線性范圍寬、儀器設備簡單等特點。筆者認為隨著發光檢測體系的不斷優化，新的高效能發光試劑和發光體系的不斷開發，該技術和其他檢測技術聯用的不斷發展，化學發光法的應用前景將十分廣闊。

［1］ 張文升，李安良．藥物化學 ［M］．北京:高等教育出版社，1999:296．

［2］朱旭等．HPLC法測定雙嘧達莫緩釋片的含量［J］．實用藥物與臨床，2010，13(3):193－194．

［3］畢雨萌等．RP－HPLC同時測定銀杏達莫注射液中4種成分的含量［J］．中成藥，2007，29(11):1620－1623．

［4］楊燕云等．HPLC測定阿司達莫緩釋片的含量［J］．華西藥學雜志，2007，22(3):336－338．

［5］陳岐信等．高效液相色譜法測定雙嘧達莫阿司匹林胃內漂浮片的含量［J］．中國醫院藥學雜志，2006，26(8):1034－1036．

［6］曾毅等．雙嘧達莫2種定量分析方法的比較［J］．中國藥房，2008，19(28):2224－2226．

［7］李瀟．雙嘧達莫片含量的離子選擇電極法測定［J］．遼寧醫學院學報，2008，29(5):439－441．

［8］李利軍等．多壁碳納米管修飾電極－不可逆雙安培法測定雙嘧達莫［J］．分析化學，2008，36(8):1077－1082．

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［10］熊迅宇等．流動注射化學發光法研究進展［J］．西北藥學雜志，2006，21(6):284－286．

［11］石文兵．反膠束化學發光法測定雙嘧達莫的含量［J］．中國醫院藥學雜志，2008，28(11):951－953．

［12］趙小輝等．曙紅 Y共振光散射法測定雙嘧達莫 ［J］．應用化學，2008，25(6):693－696．

［13］劉清慧等．鐵氰化鉀－魯米諾體系后化學發光反應及其分析應用研究—分子印跡－后化學發光法測定雙嘧達莫［J］．高等學校化學學報，2006，27(6):1036－1041．

［14］饒志明等．測定雙嘧達莫的化學發光新方法［J］．光譜學與光譜分析，2004，24(3):278－280．

［15］李華侃等．荷移光度法測定雙嘧達莫 ［J］．理化檢驗:化學分冊，2005，41(5):349－350，352．

［16］彭慧等．HPLC－ESI－MS測定中國健康人體內血漿中的雙嘧達莫［J］．中南藥學，2004，2(3):146－148．