淺析中藥注射劑的檢測現狀

陳光勇，陳旭冰，劉光明，鄧 杰

（1.大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000；2.重慶醫藥工業研究院，重慶 400061）

淺析中藥注射劑的檢測現狀

陳光勇1，陳旭冰1，劉光明1，鄧 杰2

（1.大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000；2.重慶醫藥工業研究院，重慶 400061）

目的：綜述中藥注射劑的檢測狀況。方法：查閱、分析、歸納有關文獻。結果：中藥注射劑的檢測方法包括拉曼光譜法、紅外光譜法、三維熒光法、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣質聯用技術和液質聯用技術。在所有檢測方法中，高效液相色譜法使用最為廣泛，由于單一檢測手段的局限性，聯用技術已成為檢測的一種必然趨勢。結論：隨著先進檢測手段的推廣，中藥注射劑的質量將會上一個新的臺階。

中藥；注射劑；檢測

近年來，已報道的中藥注射劑不良反應在數量上增幅較大，品種較多〔1〕，魚腥草事件、刺五加事件、茵梔黃事件、雙黃連事件等曾一度引起社會的廣泛關注。根據《藥品不良反應信息通報》資料，國家藥品不良反應監測中心曾先后通報了清開靈、雙黃連、葛根素、穿琥寧、參麥、魚腥草、蓮必治等注射液的不良反應，并對葛根素注射液的說明書作了修訂。2007年，國家出臺了《中藥、天然藥物注射劑基本技術要求》，針對新申報的中藥注射液首次要求明確量化成分，與以往中藥注射液凈藥材入藥可測成分達20%～25%、有效部位入藥可測成分達70%～80%的相關規定相比，要求有效成分制成的注射液，其單一成分的含量應不少于90%；多成分制成的注射液，總固體中結構明確成分的含量應不少于60%。另外，明確結構的成分，應當在指紋圖譜中得到體現，一般不低于已明確成分的90%，對于不能體現的成分應有充分合理的理由。要提高中藥注射劑的質量，對其進行合理、科學的檢測是必不可少的。本文將針對中藥注射劑中化學成分的檢測進行綜述。

1 運用拉曼光譜檢測中藥注射劑

拉曼光譜可提供快速、簡單、可重復且更重要的是無損傷的定性定量分析，它無需樣品準備，樣品可直接通過光纖探頭或者通過玻璃、石英和光纖測量。周殿鳳〔2〕運用拉曼光譜檢測了中藥燈盞花素注射劑和紅花注射劑，并對其拉曼譜圖進行了分析。實驗結果表明，燈盞花素注射劑和紅花注射劑的拉曼譜圖中雖然熒光背景很強，但依然包含了不少有用信息，可見，利用拉曼光譜鑒定中藥注射劑是可行的，但是測量技術和技巧還有待進一步提高。

2 運用紅外光譜檢測中藥注射劑

紅外光譜分析特征性強，氣體、液體、固體樣品都可測定，并具有用量少，分析速度快，不破壞樣品的特點，能進行定性和定量分析，而且是鑒定化合物和測定分子結構的有效方法之一。周殿鳳〔3〕測定了中藥燈盞花注射劑、刺五加注射劑和香丹注射劑的紅外譜圖，這些中藥注射劑的紅外譜圖在2 000 cm-1以上波數段非常相似，2 000 cm-1以下波數段差異較大。通過對注射劑眾多譜線的分析，推斷出中藥燈盞花、刺五加和香丹的主要成分是多環芳香烴衍生物，并且含有大量的—OH，刺五加中含有—COOH，燈盞花的化學結構式里有含氧環這個官能團。上述結果與目前中藥注射劑的主要研究方法高效液相色譜法（HPLC）得出的結論一致。

3 運用三維熒光等高線圖識別程序檢測中藥注射劑

三維熒光檢測法具有靈敏度高、選擇性強、試樣量少和測定簡單的特點。徐永群等〔4〕用統計模式識別法設計了中藥注射劑三維熒光指紋圖譜的識別程序，對刺五加、紅花、血栓通和香丹4種注射劑進行了識別。測試結果表明，4種中藥注射劑的譜圖具有指紋性，相同注射劑有相似的形狀，譜圖之間的差異較小，不同注射劑之間的差異較大，譜圖的位置和形狀有明顯的差異，憑借這些差異，就可實現對各種注射劑的識別，包括不同種類注射劑和同種不同批次和不同生產廠家的辨認。

4 運用氣相色譜（GC）檢測中藥注射劑

氣相色譜具有高柱效、高選擇性、高靈敏度、用樣量少、分析速度快的特點，可用來檢測中藥注射劑。王俊等〔5〕采用氣相色譜檢測復爾康注射液中所含揮發性化學成分，以樟腦為參照物，按“中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求”，計算相對保留時間及峰面積比值，標定共有指紋峰。在全面方法學研究的基礎上，先后對10批復爾康注射液供試品進行檢測分析，建立了該藥品的GC指紋圖譜。實驗結果表明，GC指紋圖譜中共有11個共有峰，其相對保留時間及峰面積比值可作為復爾康注射液質量控制的方法之一。

馮文宇等〔6〕采用GC-HPLC色譜法，分別檢測青銀注射液所含揮發性及非揮發性化學成分，以樟腦、綠原酸對照品為參照物，按“中藥注射劑指紋圖譜的技術要求”，計算相對保留時間及峰面積比值，標定共有指紋峰。在全面方法學研究的基礎上，先后對13批注射液供試品進行檢測分析，從而建立了該注射液的GC-HPLC指紋圖譜。實驗結果表明，GC指紋圖15個共有峰、HPLC指紋圖6個共有峰的相對保留時間及峰面積比值，可作為青銀注射液質量評價的重要依據之一。

蕭偉等〔7〕采用毛細管氣相色譜法測定熱毒寧注射液的揮發性成分，采用氫火焰檢測器及質譜進行檢測分析。實驗結果：測定熱毒寧注射液揮發性成分，標出其中8個共有峰，說明了其藥材歸屬，并采用GC/MS對主要色譜峰進行了初步定性。該方法準確、重現性好，為熱毒寧注射液揮發性成分的質量控制提供了依據。

5 運用高效液相（HPLC）色譜法檢測中藥注射劑

高效液相色譜法分離效率高、速度快、靈敏度高，是中藥注射劑檢測中用得最多的一種方法。徐金玲等〔8〕采用HPLC建立復方半邊蓮注射液原藥材（即半邊蓮、半枝蓮、白花蛇舌草）、注射液半成品、成品的標準指紋圖譜；運用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004A版軟件進行分析，對中藥材、中間體和注射劑10批次以上的供試品進行相似度評價。為了確保制備工藝的科學性和穩定性，根據中藥材、中間體和注射劑的指紋圖譜，標定出了各圖譜之間的相關性。實驗結果：通過對提取溶劑及方法、流動相、色譜柱、柱溫、檢測波長等色譜條件的考察，確定了復方半邊蓮注射液原藥材、半成品及成品的HPLC指紋圖譜色譜條件。該方法操作簡便，穩定性、重現性、精密度均較好，具有廣泛的適用性。所用的實驗方法科學、可靠，可用于對復方半邊蓮注射液的定性定量研究。

沈潔等〔9〕建立了丹參注射液7種酚酸類成分的HPLC-UV分析方法，選用了280、326、286 nm 3種吸收波長，實現了對丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、丹酚酸D、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A等7種有效成分的同時測定，檢測限達到0.008～0.16 μg/ mL。此法靈敏度高，快速準確，可用于丹參注射液及其生產過程的質量分析。

Yu ZG等〔10〕用高效液相色譜法測定了腦得生注射液中紅花黃色素A、葛根素、阿魏酸、人參皂苷Rg1和Rb1。

唐旭利等〔11〕運用高效液相法檢測丹紅注射劑。建立了相同條件下丹紅注射劑、中間體和藥材的HPLC指紋圖譜。所建立的指紋圖譜個峰分離度較好，指紋信息完整，符合指紋圖譜技術規范。進一步利用相似度分析軟件進行了指紋圖譜相關性分析，揭示了丹紅注射劑與中間體和藥材具有較好的相關性。共有峰的相對保留時間及相對峰面積參數，可作為中藥注射劑質量控制的重要依據。

婁子洋等〔12〕利用HPLC-DAD、HPLC-TOFMS、HPLC-MSn三種分離分析技術，以HPLC-DAD為主，HPLC-TOF-MS、HPLC-MSn為輔檢測注射用雙參（丹參和人參）藥材、中間體和制劑的化學成分，HPLC-TOF-MS、HPLC-MSn兩種技術用于各成分的定性鑒別，確定其共有峰所代表的化學物質，以HPLC-DAD為主，制作指紋圖譜。利用HPLC分別建立了丹參與人參藥材不同批次的指紋圖譜，中間體與注射劑不同批次的指紋圖譜，為中藥注射劑的指紋圖譜研究與全程質量控制提供示范性的研究工作。

注射用廣炎靈粉針是由木犀科丁香屬植物紫丁香、朝鮮丁香以及洋丁香的干燥葉為原藥材，提取精制而成的廣譜抗菌粉針劑。崔淑霞等〔13〕采用HPLC法對注射用廣炎靈粉針及其原料藥材和中間體進行了指紋圖譜的研究，建立了指紋圖譜的檢測方法和相似度評價方法。結果表明，該方法成本低、直觀、快速、準確、易于推廣。

6 運用高效液相色譜/蒸發光散射檢測器（HPLC/ELSD）檢測中藥注射劑

蒸發光散射檢測器一定程度上彌補了HPLC傳統檢測器的不足，特別是無紫外或紫外末端吸收弱的大分子有機化合物的檢測，顯示出極大的優越性。其響應值不依賴于樣品的光學性質，不論它具有何種官能團。對所有樣品的檢測幾乎具有相同的響應因子，對未知物和純度的測定要比UV檢測更容易更準確。隨著蒸發光散射檢測器技術的不斷改進和完善，將在中藥分析領域廣泛的應用〔14〕。曹進等〔15〕運用高效液相色譜/蒸發光散射檢測器建立了復方清開靈注射液的指紋圖譜。他們對復方清開靈注射液7種有效成分進行了定量測定，方法學考察結果良好；通過指紋圖譜相似度評價軟件，對10批清開靈注射液的HPLC/ELSD指紋圖譜進行了相似度計算，結果表明：10批樣品相似度很好。采用HPLC/ELSD法所建立的復方清開靈注射液指紋圖譜可以在一個色譜、檢測條件下，同時實現整體定性、多指標成分定量的功能，用于質量控制。可以為中藥的質量控制和評價提供新的方法模式。

7 運用氣質聯用（GC-MS）技術檢測中藥注射劑

氣質聯用儀（GC-MS）具有高選擇性、高靈敏度、高分辨率、可同時進行定性定量分析等特點，是進行復雜化合物的分離和鑒定的重要工具。沈潔等〔9〕對痰熱清注射液處方中的山羊角進行了分析研究，建立了同時測定山羊角提取物中12種游離氨基酸的GC-MS分析方法，能夠快速鑒定未知氨基酸，準確檢測出各種氨基酸的含量，并且對氨基酸衍生化條件進行了較為全面的優化以確保方法的有效性。此法可用于山羊角提取物的質量控制，完善了痰熱清注射液生產過程中間體的質控方法。

8 運用液質聯用（LC/MS）技術檢測中藥注射劑

液質聯用體現了色譜和質譜優勢的互補，將色譜對復雜樣品的高分離能力，與質譜具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對分子質量與結構信息的優點結合起來，在中藥注射劑的檢測中得到了一定的應用。Zhang HY等〔16〕采用液相色譜-飛行時間質譜（LC/TOF-MS）聯用技術和液相色譜-離子肼質譜法（LC/ion trap MSn）檢測清開靈注射液，33種化學成分完全被檢測出來。該實驗為檢測復雜的中藥體系提供了一種行之有效的方法。Lai CM等〔17〕采用高效液相色譜-電噴霧串聯質譜（HPLC-ESIMS/MS）法檢測血塞通注射液，檢測出27種皂角苷，并對其中的9種成分（三七皂苷R1；人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Tf和Rg1）作了定量分析。實驗對10種血塞通注射液進行了比較，結果顯示，對于不同的樣品，分析結果變動較大。該研究為血塞通注射液中皂角苷的定性、定量分析提供了一種快速準確、靈敏度高的方法。仇熙等〔18〕運用液相色譜-質譜聯用儀對人參的藥材、中間體和注射液進行檢測，檢測結果具有很好的重現性和穩定性。從而得出結論，液相色譜-質譜聯用技術是復方人參注射液指紋圖譜分析的重要且非常好的分析手段，并可以用于其它中成藥的指紋圖譜分析。

綜上所述，隨著現代色譜、光譜技術的發展，一些先進的技術正逐漸運用于中藥注射劑的原料、中間體、制劑的檢測中。一些傳統的中藥注射劑已經建立了指紋圖譜。在所有檢測手段中，高效液相色譜法使用最為廣泛，由于單一檢測手段的局限性，聯用技術已成為檢測的一種必然趨勢。相信在不久的將來，隨著先進檢測技術的推廣，中藥注射劑的質量將會上一個新的臺階。

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Detection Method of Traditional Chinese Medicinal Injection

CHEN Guangyong1,CHEN Xubing1,LIU Guangming1,DENG Jie2
（1.School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China; 2.Chongqing Pharmaceutical Research Institute,Chongqing 400061,China）

Objective:The detection method of traditional Chinese medicinal injection was discussed.Methods:To study,analyze and review the related literatures.Results:The injections of traditional Chinese medicine were detected by Raman spectrum,infrared spectrum,3-D fluorometric method,Gas chromatography,high performance liquid chromatography,gas chromatography mass spectrometry and liquid chromatography mass spectrometry.Among the detection methods,high performance liquid chromatography was most widely applied.And because of the limitations of a single detection means,multiple techniques are an inevitable trend. Conclusion:With the development of new technology,the quality of traditional Chinese medicinal injection will be improved.

traditional Chinese medicine;injection;detection

R951.2 ［文獻標志碼］A ［文章編號］1672-2345（2011）08-0017-04

大理學院科研基金資助項目（2008X59）

2011-04-08

2011-06-13

陳光勇，副教授，主要從事藥物化學的研究.

（責任編輯 毛本勇）