土茯苓配方顆粒對臨床常見致病菌的抗菌研究*

殷網虎 袁武軍 曹美琳

江蘇省鎮江市中醫院（江蘇鎮江 212003）

土茯苓配方顆粒對臨床常見致病菌的抗菌研究*

殷網虎 袁武軍 曹美琳

江蘇省鎮江市中醫院（江蘇鎮江 212003）

目的 觀察土茯苓配方顆粒對臨床主要致病菌的抗菌效果。方法 采用美國臨床實驗室標準化委員會（CLSI/NCCLS）推薦的液體稀釋法檢測MIC，瓊脂稀釋法檢測MBC，K-B紙片法檢測土茯苓維生素C聯合抗菌作用。結果 土茯苓配方顆粒對銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、肺炎克雷伯菌、洋蔥伯克霍爾德菌的MIC50分別為25、1.56、12.5、25、0.78、6.25mg/mL；土茯苓維生素C復合紙片的抑菌圈均明顯大于土茯苓配方顆粒紙片。結論 土茯苓配方顆粒抗菌活性較強，聯合使用維生素C可以增強其抗菌效能。

土茯苓配方顆粒 最小抑菌濃度 藥物敏感試驗 最小殺菌濃度

近年來，濫用抗菌藥物造成細菌耐藥率不斷上升。面對這一嚴峻現狀，發揮中藥抗菌的優勢已成為重要課題［1］。土茯苓是百合科植物光葉菝葜（Smixlax glabra Roxb.）的干燥根莖，具有除濕、解毒、通利關節等功效，臨床主要用于治療梅毒、淋濁、筋骨攣痛、腳氣、療瘡、癰等［2］。土茯苓配方顆粒是一種采用低溫萃取、真空濃縮制成的全組分顆粒劑。本文采用K-B法和液體稀釋法分別觀察了土茯苓配方顆粒及聯合維生素C對臨床常見菌株的抗菌作用。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 實驗菌株共計211株，其中208株分離自我院及鎮江市其他醫療單位臨床標本，各菌株均經BDcrystal鑒定儀鑒定；3株標準菌株購自杭州天和微生物試劑有限公司。臨床分離菌株中，銅綠假單胞菌33株，大腸埃希菌56株，金黃色葡萄球菌52株，糞腸球菌27株，肺炎克雷伯菌20株，洋蔥伯克霍爾德菌20株。3株標準菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853、大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC29213。

1.2 試劑儀器 M-H（Muller-Hinton）藥敏瓊脂培養基和M-H肉湯干粉培養基，由杭州天和微生物試劑有限公司提供。土茯苓配方顆粒由江陰天江藥業有限公司提供，批號1101231。維生素注射液 （維生素C）由江蘇恒順中奇藥業有限公司提供，批號110502。BDcrystal自動微生物鑒定儀及鑒定卡由美國BD公司提供。

1.3 土茯苓藥液準備 稱取土茯苓配方顆粒50g，加入蒸餾水50mL，配成質量濃度為1g/mL的原藥液，以2.5mol/L NaOH調節pH至7.2，10磅高壓30min滅菌，-30℃冰箱保存，試驗前以MH肉湯稀釋。

1.4 土茯苓及土茯苓維生素C復合藥敏紙片的制備 用打孔器將濾紙打成直徑為6mm的紙片，高壓滅菌。將15μL滅菌土茯苓原液加到紙片上，相當于15mg/片，35℃烘干備用；另取部分中藥原液，加入維生素C注射液（0.25g/mL），使維生素C終質量濃度為22.2mg/mL，混勻后每紙片加15μL混合液，制成土茯苓配方顆粒維生素C復合紙片，35℃烘干備用［3］。

1.5 MIC、MBC及抑菌圈的測定 MIC測定采用CLSI/NCCLS推薦的液體稀釋法檢測，MBC采用瓊脂稀釋法［4］。在測出土茯苓的MIC后，將MIC下的液體培養物接種普通瓊脂培養皿，35℃下培養24h，無細菌生長培養物的最低土茯苓質量濃度為其MBC。挑取被測菌于生理鹽水中，制成0.5麥氏濃度的菌懸液，用無菌棉拭子將菌懸液均勻涂布在M-H瓊脂平板表面，稍干后以無菌鑷子分別將制備好的土茯苓紙片和土茯苓維生素C復合紙片緊貼于M-H瓊脂表面，紙片間相距24mm，35℃孵育18～24h，測量抑菌圈直徑，觀察土茯苓維生素C的聯合抗菌作用。每批藥敏試驗均用金黃色葡萄菌ATCC29213、銅綠假單胞菌ATCC27853、大腸埃希菌ATCC25922 3株標準菌株和抗生素慶大霉素在相同條件下作質控試驗，以控制中藥藥敏測定過程。

2 結 果

2.1 土茯苓配方顆粒對不同細菌的體外抗菌活性 見表1。土茯苓配方顆粒對銅綠假單胞菌、大腸埃希菌等臨床分離菌株的MIC50為0.78～25mg/mL，顯示土茯苓配方顆粒具有較好的抗菌作用。MIC50最低的是大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌，MIC50分別為1.56mg/mL和 0.78mg/mL。

表1 土茯苓配方顆粒對208株細菌的MIC、MBC結果（mg/mL）

2.2 土茯苓配方顆粒與維生素C聯合運用的抗菌效果 見表2。土茯苓配方顆粒維生素C復合紙片的抑菌圈要大于土茯苓配方顆粒，兩者對各組菌種的抑菌圈直徑比較，差異明顯（P＜0.01）。

表2 土茯苓配方顆粒與維生素C聯合運用的抑菌圈直徑比較（mm，±s）

表2 土茯苓配方顆粒與維生素C聯合運用的抑菌圈直徑比較（mm，±s）

與土茯苓配方顆粒比較，*P＜0.01。

菌 種 n 土茯苓配方顆粒 土茯苓配方顆粒維生素C銅綠假單胞菌 33 12±8 15±9*大腸埃希菌 56 15±9 17±8*金黃色葡萄球菌 52 13±11 15±12*糞腸球菌 27 14±11 16±12*肺炎克雷伯菌 20 17±10 19±13*洋蔥伯克霍爾德菌 20 16±9 20±11*

3 討 論

抗生素誕生之初就出現細菌耐藥現象［5］，目前在全球范圍內蔓延。僅僅依靠開發新的抗生素來抑制細菌耐藥性的產生顯得較為困難。由于中藥成分復雜、作用方式多樣等特點，細菌較少對中藥產生耐藥，使得近年來中藥抗菌的相關研究成為熱點［6］。

土茯苓含有生物堿、落新婦苷、異黃杞苷、甾醇、皂苷、鞣質等成分［7］。土茯苓配方顆粒是土茯苓的全提取物，該種劑型避免了水煎劑和醇提取劑導致的部分成分的流失。從實驗結果來看，土茯苓配方顆粒對銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、肺炎克雷伯菌、洋蔥伯克霍爾德菌的MIC50分別為 25、1.56、12.5、25、0.78、6.25mg/mL，顯示土茯苓配方顆粒具有較好的抗菌作用，尤其是對大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌抗菌效果最為明顯，MIC50僅為1.56mg/mL和0.78mg/mL。對于中藥的抗菌機理，有作者認為，部分中藥成分含有多羥基結構，能發生共振，化學鍵振動的波長與細菌長度范圍相當時，即會發生共振，遭到共振的細菌或病毒被殺滅［8］。

相關文獻提示，中藥與維生素C聯用，能明顯增強中藥的抗菌效果［3］。本研究通過土茯苓配方顆粒維生素C復合紙片的抗菌觀察，表明維生素C確能增強土茯苓的抗菌效果，加入維生素C后的抑菌圈直徑均較單味土茯苓增大，究其原因，推測土茯苓等中藥中含有較多的黃酮、皂苷等還原性物質，維生素C具有較強的還原性，能提高中藥中還原性物質的活性，從而提高其抗菌作用。

綜上所述，土茯苓配方顆粒對臨床常見致病菌具有較好的抑制作用，維生素C能明顯增強土茯苓的抗菌作用，本研究為臨床抗菌治療提供了一個不同的思路和選擇。

［1］李建志，劉旭紅，楊麗珍，等.11種中草藥抗菌作用實驗研究［J］.中醫藥信息，2009，26（3）：82-83.

［2］蔣受軍.菝葜屬植物菝葜和土茯苓現代研究概況［J］.內科，2010，5（2）：191-195.

［3］蔡璇，彭松，施金玲，等.五種中藥對139株微生物體外抗菌活性的實驗研究［J］.藥學服務與研究，2005，5（3）：267-290.

［4］NCCLS ／CLIS.Perfromance Standards for Antimicrobial Susceptibility testing fifteenth in formational supplement M 100-S15，25（l）：44-52.

［5］Walsh C.Molecular mechanisms that confer antibacterial drug resistance ［J］.Nature，2000，4J06（6797）：775-781.

［6］劉芬，姜成.對產ESBLs大腸桿菌有抑制作用的中草藥初步篩選［J］.福建中醫學院學報，2009，19（2）：33-34.

［7］李強.土茯苓現代研究概述［J］.中國藥業，2008，17（14）：76-77.

［8］黃為華.化學鍵振動共振殺菌抗病毒機理 （VI）［J］.中國中醫藥科技，2010，17（2）：150-152.

Experimental Study of Smixlax Glabra Particles on Common Clinical Pathogent

YIN Wang-hu,YUAN Wu-jun,CAO Mei-lin
Zhenjiang Hospital of Traditional Chinese Medicine （Zhenjiang 212003， Jiangsu）

Objective:To observate the antibacterial activity of Smixlax glabra Particles on common clinical pathogent.Methods:The antibacterial activity about combination of Smixlax glabra Particles and vitamin C was assayed by K-B method.The minimum inhibitory and the minimum bactericidal concentrations respectively were tested using the dilution method.Results:The MIC50of Smixlax glabra Particles on P.aeruginosa,E.coli,S.aureus,Enterococcus faecalis,Klebsiella Pneumoniae subsp.pneumoniae and Burkholderia cepacia were respectively 25mg/mL,1.56mg/mL,12.5mg/mL,25mg/mL,0.78mg/mL,6.25mg/mL.The acteriostatic circle about combination of Smixlax glabra Particles and vitamin C were significantly greater than that of the Smixlax glabra Particle.Conclusion:Smixlax glabra Particle has strong antibacterial activity.It plus vitamin C can enhance antibacterial efficacy of Smixlax glabra Particle.

Smixlax glabra Particle;Minimal inhibitory concentration;Drug sensitive test;Minimal bactericidal concentration

R285.5

A

1004-745X（2011）12-1957-02

江蘇省鎮江市科技局社會發展項目（SH2006049）

2011-08-01）