Snail蛋白在喉鱗癌組織中的表達及臨床意義

張華東，熊正文，黃 勇，蘇 紅，李 偉，尋鳳華

(1河北北方學院，河北 張家口 075000;2中國人民解放軍二五一醫院)

喉鱗狀細胞癌(喉鱗癌)是耳鼻咽喉科常見惡性腫瘤，臨床上腫瘤轉移是導致治療失敗的主要原因。2003年3月～2006年6月，我們采用免疫組化SP法檢測了60例喉鱗癌患者癌組織中轉錄因子(Snail)蛋白表達，旨在進一步探討喉鱗癌的發生機制。

1 材料與方法

1.1 材料 選取中國人民解放軍第251醫院手術切除的喉鱗癌組織標本60份(鱗癌組)，患者男49例，女11例;年齡48～77歲，中位年齡62.5歲;＜60歲27例，≥60歲33例;術前均未行放化療。病理證實高、中分化49例，低分化11例;TNM分期Ⅰ+Ⅱ期21例，Ⅲ+Ⅳ期39例;T分期T1+T2期25例，T3+T4期35例;累及甲狀軟骨16例;淋巴結轉移18例;遠處有轉移15例。另取20份癌旁(癌旁3 cm)組織作為對照組，兩組一般資料無統計學差異。試劑:兔抗人Snail多克隆抗體(17732，Abcom公司)，免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑(福州邁新生物技術開發有限公司)。

1.2 Snail蛋白表達檢測 采用免疫組化SP法。所有標本均經10%甲醛固定，常規石蠟包埋，4 μm連續切片，采用0.01 mmol/L的枸櫞酸緩沖液抗原修復，染色程序按SP試劑盒說明書進行，DAB顯色，并設置陰陽性對照。結果判斷:Snail蛋白免疫組化陽性信號以胞核出現棕黃色染色為陽性細胞，按染色強度的深淺積分，無染色為0分，弱陽性為1分，強陽性為2分;按著色細胞百分比，1% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，76%～100%為4分。按照陽性細胞×染色強度計分，1～2分為陰性，3～8分為陽性［1］。分析Snail蛋白表達與喉鱗癌臨床病理參數的關系。

1.3 Snail蛋白表達與喉鱗癌預后的關系 對所有患者采用電話、信件進行隨訪，隨訪截止時間為2010年12月。應用Kaplan-Meier法分析Snail蛋白表達與喉鱗癌預后的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件，行χ2檢驗，生存分析采用Kaplan-Meier法。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 Snail蛋白表達 喉鱗癌組及癌旁組Snail蛋白陽性率分別為 78.3%(47/60)、15.0%(3/20)，P＜0.01。

2.2 Snail蛋白表達與喉鱗癌臨床病理參數的關系見表1。

表1 Snail蛋白表達與喉鱗癌臨床病理參數的關系

2.3 Snail蛋白表達與喉鱗癌預后的關系 60例喉鱗癌患者失訪3例，失訪率為5.0%。Snail蛋白陽性及陰性患者5年生存率分別為22.1%、55.6%，P＜0.01。

3 討論

Snail首先發現于果蠅中，是一類鋅指轉錄因子，其高表達與許多腫瘤有關。Snail屬于鋅指蛋白Snail超家族，通過與轉錄生長因子超家族成員內具有信號轉換功能的轉錄因子相互作用競爭性結合E鈣黏蛋白(E-cadherin)啟動子區的 E-box序列［2］，而抑制E-cadherin、閉鎖蛋白等的表達，上調成纖維細胞特定蛋白-1、波形蛋白等的表達，提高細胞侵襲轉移能力。Snail被看作腫瘤轉移的促進因素［3］。本研究結果顯示，喉鱗癌組Snail蛋白陽性率明顯高于癌旁組，表明喉鱗癌組織具有Snail的高表達特征，與Sun等［4］研究結果一致，提示喉黏膜中Snail的高表達可能對喉癌的發生、發展起促進作用。

本研究發現，Snail蛋白陽性表達與喉鱗癌甲狀軟骨累及與否有關，說明隨著喉鱗癌浸潤深度的增加Snail的表達亦增高，Snail參與了喉鱗癌的進展;Snail蛋白亦與淋巴結轉移、遠處轉移相關，說明Snail也參與了喉鱗癌的轉移;此外，Snail蛋白的表達與病理分級、T分期、TNM分期有關，提示分化越差、惡性程度越高的腫瘤，Snail的表達也越高，說明Snail的表達與腫瘤的分化程度和患者的預后有密切關系。Snail表達與患者性別、年齡無關，此與Takkunen等［5］研究結果一致。本研究還發現，喉鱗癌組Snail蛋白陽性者5年生存率明顯低于陰性者，提示Snail陽性表達與生存期呈負相關。此與文獻［6］報道不符，可能與本研究例數過少有關。

總之，對Snail與喉鱗癌生物學特性關系的深入研究，不僅對理解喉鱗癌的浸潤和轉移是重要的，同時又能充當轉移潛能的標志物和評估患者的預后;將會促進對腫瘤的新穎治療的規劃。

［1］Rosivatz E，Becker I，Specht K，et al.Differential expression of the epithelial-mesenchyalt-ransition regulators snail，SIP1，and twist in gast ric cancer［J］.Am J Pathol，2002，161(5):1881-1891.

［2］Peinado H，Olmeda D，Cano A.Snail，Zeb and bHLH factors in tumor progression:an alliance against the epithelial phenotype［J］.Nat Rev Cancer，2007，7(6):415-428.

［3］Evdokimova V，Tongon C，Ng T，et al.Translational activation of snail1 and other developmentally regulated transcription factors by YB-1 promotes an epithelial-mesenchymal transition［J］.Cancer Cell，2009，15(5):402-415.

［4］Sun L，Diamond ME，Ottaviano AJ，et al.Transforming growth factor-β1 promotes matrix metalloproteinase-9-mediated oral cancer invasion through snail expression［J］.Mol Cancer Res，2008，6(1):10-20.

［5］Takkunen M，Grenman R，Hukkanen M，et al.Snail-dependent and-independent epithelial-mesenchymal transition in oral squamous carcinoma cells［J］.J Histochem Cytochem，2006，54(11):1263-1275.

［6］紀東，李其慶，施海翔.29例喉癌、下咽癌多原發癌臨床分析［J］.中華全科醫學，2009，7(6):594-595.