甲狀腺乳頭狀癌患者血液p53基因表達及與淋巴結轉移、臨床分期的關系

尹鳳媛，焦淑賢，遲曉云

(1青島市市立醫院，山東 青島 266011;2青島市紅十字會中心血站)

甲狀腺癌是一種常見的、病因未明的內分泌性惡性腫瘤，其中甲狀腺乳頭狀癌(PTC)占60% ～80%。遺傳物質突變是導致腫瘤發生的主要原因［1］，其中抑癌基因p53失活將導致細胞增殖周期失去控制，或同時引起其他腫瘤抑制因子損失及癌基因激活，從而引發腫瘤。2011年3月，我們對118例PTC患者血液p53基因表達情況進行了檢測，探討其在PTC發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 我院近2 a收治的原發性PTC患者118例(PTC組)，男30例、女88例，年齡(36.5±14.1)歲;伴淋巴結轉移的甲狀腺癌患者38例(轉移組)，男 11 例、女 27 例，年齡(40.2 ±13.6)歲。上述兩組均經病理組織學與免疫組化檢查確診，其中PTC組臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期81例、Ⅲ～Ⅳ期37例。對照組為122例健康體檢者，男40例，女82例;年齡(33.8±20.2)歲。三組一般資料具有可比性。

1.2 血液p53基因表達檢測 三組均抽取空腹靜脈血4 ml，EDTA-K2抗凝，-20℃保存待測。①PCR擴增:PCR反應體系為50 μl，p53基因點突變(主要發生在外顯子5、6、7、8中)四對引物設計參見國內外文獻［2～4］。②單鏈構象多態分析:取10 μl PCR反應產物，加入等體積95%甲酰胺染料(20 mmol/L EDTA，0.1%溴酚蘭)，95 ℃保溫7 min后立即置于冰浴中7 min;行8%聚丙烯酰胺凝膠電泳，4℃下電泳3 h、至溴酚蘭接近凝膠底部。③硝酸銀染色判斷結果:通過與對照樣品條帶比較判斷待分析樣品p53基因表達情況。

1.3 統計學方法 采用SPSS10.0軟件行統計學處理。率的比較行χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

三組血液p53基因表達情況見表1。

表1 三組血液p53基因表達情況比較

3 討論

p53基因是迄今發現的與人類腫瘤相關性最高的基因，臨床對其的認識經歷了癌蛋白抗原、癌基因、抑癌基因三個轉變。人類p53基因位于17q31，含有11個外顯子和10個內含子，其編碼的p53蛋白是一條由393個氨基酸組成的控制細胞增殖的核磷酸蛋白，為細胞周期C1期DNA損傷的監控點，在維持細胞正常生長、抑制惡性增殖過程中起重要作用。突變型p53基因編碼是一種異常蛋白，其突變好發部位為外顯子5～8，能與進入組織的各種病毒蛋白、熱休克蛋白結合成穩定的復合物。目前認為，引起腫瘤形成或細胞轉化的p53蛋白是p53基因突變的產物，是一種腫瘤促進因子，可消除p53基因的正常功能。Kouvaraki等［5］利用免疫組化法對54例甲狀腺癌組織中p53蛋白表達情況，結果顯示23例p53蛋白表達陽性(42.6%)，認為p53蛋白過表達可作為PTC獨立的生存預后檢測指標;另有研究顯示，甲狀腺癌組織中p53蛋白表達與腫瘤浸潤程度及淋巴結轉移有關。本研究顯示，PTC組和轉移組血液p53基因表達陽性率均顯著高于對照組，其中轉移組顯著高于PTC組，PTC組Ⅲ～Ⅳ期者顯著高于Ⅰ～Ⅱ期者。提示甲狀腺癌患者確實存在p53基因過表達，且其表達水平與臨床分期及淋巴結轉移存在密切關系。可能機制:p53突變可在轉錄水平上調控端粒酶逆轉錄酶基因表達、激活端粒酶，進而促進甲狀腺癌發生、發展;突變的p53基因可上調Survivin，使腫瘤細胞在G2/M期停滯而不出現凋亡。

綜上所述，p53基因突變可促進PTC的發生和轉移;可為PTC的診治及預后判定提供依據。

［1］Borrello MG，Alborti L，Fischer A.Induction of aproinflammatory program in normal human thyrocytns by the RET/PTCI oneogene［J］.Proc Nail Acad Sei USA，2005，102(41):14825-14830.

［2］Hirotoshi H，Masakazu U，Kazuo F，et al.p53 gene mutations in early colorectal carcinoma.De novo vs.adenoma-carcinoma sequence［J］.Int J Cancer，1991，64(2):47-51.

［3］歐啟水，沈仲毅，陸佩華，等.銀染PCR-SSCP法檢測大腸癌p53基因突變［J］.中國實驗診斷學雜志，1997，1(2):32-35.

［4］Jacqueline AMV，Alfred JW，Salvatore AEM，et al.Predictive value of p53 mutations analyzed in bladder washings for progression of high-risk superficial bladder cancer［J］.Clin Cancer Res，1996，2(3):1055-1068.

［5］Kouvaraki MA，Shapiro SE，Pettier ND.RET protoancngene:a review and of genotype-phenotype corralationsin hereditary medullary thyroidⅢcer and associated endocrinetumors［J］.Thyroid，2005，15(6):531-544.