低危骨髓增生異常綜合征免疫表型分析

孫富英，金潔萍，毛淑丹

(遼寧醫學院第一附屬醫院，遼寧 錦州 121001)

骨髓增生異常綜合征(MDS)是造血干/祖細胞(CD34+)的惡性克隆性疾病，表現為骨髓原始細胞形態和數目異常、無效造血及不同程度的外周血細胞數目減少，并高風險地向急性白血病轉化［1］。國內外研究證實，免疫表型分析有助于MDS的診斷及預后評估，但低危MDS患者免疫表型分析報道較少。本研究對低危MDS患者骨髓免疫表型分型診斷及鑒別診斷的臨床意義進行了探討。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2008年3月～2010年12月我院MDS住院患者27例(MDS組)，均依據2008年WHO標準分型確診［2］。男17例、女10例，年齡32～86歲、中位年齡58歲;其中RA型4例，RAS型4例，RCMD型16例，RAEB-1型3例。27例均為低危(IPSS評分0～1.0分)MDS患者，其中骨髓增生低下6例。另選擇再生障礙性貧血(AA)患者12例(AA組)，男7例、女5例，年齡25～76歲、中位年齡41歲;對照組18例，男8例、女10例，年齡26～79歲、中位年齡47歲;其中，外周血單純紅細胞減少輕度貧血的缺鐵性貧血11例，外傷截肢7例。三組性別、年齡差異無統計學意義。

1.2 方法 檢測標本均經過對方知情同意后采集，然后行骨髓涂片、流式細胞術分析及常規染色體核型分析(染色體核型分析對照組除外)。流式細胞儀為美國Beckman Coulter公司FC500MPI型，發射熒光采用488 nm激光激發。采取研究對象的骨髓液2～3 ml EDTA抗凝，對經溶血素裂解紅細胞骨髓中所有有核細胞進行分析。調整細胞數至(0.5～1.0)×106/ml，分別加入抗體 HLA-DR-FITC/CD33-PE/CD34-ECD/CD117-PC5/CD45-PC7、CD10-FITC/CD56-PE/CD34-ECD/CD19-PC5/CD45-PC7、CD5-FITC/CD7-PE/CD34-ECD/CD2-PC5/CD45-PC7、HLADR-FITC/CD11b-PE/CD34-ECD/CD15-PC5/CD45-PC7、CD11b-FITC/CD13-PE/CD16-ECD/CD15-PC5/CD45-PC7及陰性對照，取某一抗原表達≥20%為陽性。單克隆抗體為Beckman Coulter產品。

2 結果

2.1 MDS及各亞型、對照組、AA組之間CD34+測定結果 見表1。

表1 MDS組及各亞型、對照組、AA組CD34+測定結果(%，)

表1 MDS組及各亞型、對照組、AA組CD34+測定結果(%，)

注:與對照組、AA 組比較，*P ＜0.05

組別 n CD34+MDS 組 27 3.50 ±0.50*RA/RAS 8 2.40 ±0.12 RCMD 16 4.50 ±0.30*RAEB-1 3 5.90 ±0.70*對照組 18 2.10 ±0.17 AA組12 0.13 ±0.02

2.2 低危MDS免疫表型分析 27例MDS患者原始細胞、成熟粒細胞、單核細胞經檢測可見各系細胞免疫表型異常表達，也有多重異常表達表現。①原始細胞免疫表型異常表現為:CD34+表達比例相對或絕對增加，表達 CD11b或 CD15、CD13、CD33，或HLA-DR表達缺失;異常表達淋巴系抗原 CD7、CD56。②成熟粒細胞免疫表型異常表現為:SSC減低(細胞內顆粒減少)，粒系抗原之間表達關系異常以 CD13/CD16、CD11b/CD15 明顯，CD10、CD11b、CD13、CD15、CD16抗原不同步表達，CD13或 CD33表達的缺失，出現異常CD56的表達，CD45表達減低。③單核細胞系表達異常表現為:單核細胞比例減少，CD11b、CD13、CD33、HLA-DR 表達關系異常，CD16、CD33表達缺失，異常表達CD56。27例MDS患者免疫表型特征見表2。

表227 例MDS患者免疫表型特征(例)

3 討論

目前，細胞形態和細胞遺傳學改變仍是MDS診斷的重要依據。但是MDS病態造血類型繁多，且缺乏特異性。染色體核型異常在MDS患者的檢出率為40% ～70%［3］，在幼稚細胞數不增高的 MDS患者中伴有異常核型尚不足32%［4］，造成低危MDS患者診斷困難。為此，2006年維也納國際工作會議將流式細胞術作為MDS的輔助診斷標準［5］。

本研究對27例低危MDS患者免疫表型分析結果顯示，幾乎所有MDS患者存在髓細胞分化抗原的異常表達;單一細胞群的多重表達在RCMD、RAEB-1較RA/RAS更明顯;粒細胞系或單核細胞系表達異常患者占92.5%，結果與 van de Loosdrecht等［6］報道的92%病例存在粒細胞或單核細胞表達異常一致。MDS患者出現單一細胞免疫表型異常不具有特征性，因為單一細胞免疫表型異常也可見于營養不良性貧血等非MDS患者［7］。近年來，研究較多的流式積分對MDS預后的影響資料［6，8］顯示，一系的多個異常表達或多系表達異常均確定為主要免疫表型異常，不同抗體組合對MDS診斷更具意義。27例低危MDS患者單一細胞群多重表達率為51.8%，而≥2個細胞亞群的表達率為88.9%。此顯示流式細胞術比MDS遺傳學檢測陽性率33.3%(27例MDS患者9例染色體核型異常)更敏感。

隨著MDS進展，CD34+細胞表達呈現增高趨勢，流式細胞術檢測MDS患者CD34+表達與骨髓細胞形態原始細胞數呈正相關［9］。低危組MDS患者CD34+表達在各亞型(RA/RAS、RCMD、RAEB-1)逐漸增高，此與文獻［10］報道一致。盡管RA/RAS類型CD34+細胞與對照組差異無統計學意義，但低危MDS各類型與AA患者CD34+細胞表達不同仍具有鑒別診斷意義。本文24例RA/RAS、RCMD中，13例CD34+表達百分率高于正常對照組，但形態學原始細胞分類均在正常范圍，提示低危組MDS早期已有MDS惡性克隆的存在。成熟粒細胞免疫表型表達的減少揭示了細胞分化障礙、凋亡增加導致外周血細胞一系或多系減少，反饋刺激骨髓異常造血干細胞增加，形成骨髓過度增生伴病態造血的低危組MDS發病機制。本結果還表明，MDS患者CD34+異常表達較形態改變更早。同時在低危MDS患者CD34+細胞有少部分表達CD7，其臨床意義有待進一步探討。

本研究發現，RA/RAS亞型見到粒細胞SSC的明顯下降，但是根據 WHO分型標準 RA/RAS型MDS病態造血細胞小于粒細胞系細胞的10%，因此流式細胞術可檢測到較形態學改變更早的微小變化。Lorand-Metze等［11］探討MDS與外周血細胞減少的非克隆性疾病粒細胞SSC改變，結果發現MDS患者早幼粒細胞的SSC是減低的，并與外周血白細胞計數相關。通過CD34+細胞、早幼粒細胞和晚幼粒細胞的SSC分析能夠鑒別87%的病例是否為克隆性。

總之，應用流式細胞術進行MDS的免疫表型檢測，較染色體核型分析有高度的敏感性，亦較細胞形態學檢測有獨特的優勢。

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