急性髓細胞白血病患者NGF及p75NTR測定的臨床意義

韓秀華，李秀梅，姜玉龍，江亞軍，劉小林

(連云港市第二人民醫院，江蘇 連云港 222000)

研究表明，神經生長因子(NGF)不僅可以作為一種絲裂原促進膽管癌、乳腺癌等腫瘤細胞的有絲分裂，還能抑制食管癌、胃癌等腫瘤細胞的增殖，促進腫瘤分化。但是，NGF在急性髓細胞白血病(AML)中的水平變化和發病機制中的作用在國內外鮮有報道。本研究測定AML患者血清NGF水平以及骨髓白血病細胞群表面低親和性NGF受體(p75NTR)的表達并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2008年3月～2010年9月于連云港市第二人民醫院住院并確診初治AML患者24例(病例組)，男14例、女10例，年齡13～79(42.8±21.1)歲。其中 M12 例，M29 例，M36 例，M43例，M53例，M61例。化療方案包括DA、CAG、HA、MA、全反式維甲酸+亞砷酸等。根據張之南主編的《血液病診斷及療效標準》進行療效判斷，其中完全緩解(CR)15例，未緩解(NR)7例。CR患者按照鞏固強化維持治療并隨訪3年總體生存率(OS)，隨訪終點為患者死亡或至2011年2月28日止，隨訪時間為1～36(15.4±13.1)個月。選擇同期15例健康者作為對照組，男9例、女6例，年齡15～74(38.3±19.1)歲;其性別、年齡構成與病例組比較差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 ELISA法測定血清NGF水平 清晨空腹采取靜脈血3 ml置于無抗凝物的真空采血管中，1000 r/min離心20 min后分離血清后置于-70℃冰箱保存。樣本收集完畢后用人NGF ELISA試劑盒(美國Genzyme公司產品)標定，用e-STAR-PLUS酶標儀在波長450 nm依序測量各孔的光密度(OD值)。

1.2.2 流式細胞儀測定p75NTR 分別于化療前和治療過程中不同時間點抽取患者骨髓液2 ml置于3.8%枸櫞酸鈉抗凝的真空采血管中。各取骨髓液200 μl至2個檢測管，對照管加入CD45-percep、IgG1-PE(購自美國BD公司)，測量管加入熒光標記抗體CD45-percp、p75NTR-PE(購自美國 BD公司)各 20 μl，振蕩混勻后室溫避光孵育 20 min，加入0.1 mol/L pH 7.0 PBS 2 ml。1000 r/min 離心 20 min后PBS緩沖液洗滌2遍，棄上清后，加入500 μl的PBS緩沖液混勻，懸浮細胞，流式細胞儀(美國BD公司)分析。

2 結果

2.1 兩組NGF和p75NTR的表達 兩組血清NGF水平及骨髓白血病細胞群表面p75NTR表達水平差異有統計學意義(P均＜0.05)。見表1。

表1 兩組NGF和p75NTR表達水平變化()

表1 兩組NGF和p75NTR表達水平變化()

注:與對照組比較，*P ＜0.05

組別 n NGF(pg/ml) p75NTR(%)病例組 24 115.08 ±65.51* 56.10 ±16.76*對照組15 64.60 ±33.11 83.39 ±10.99

2.2 NGF和p75NTR表達與AML患者臨床特征的關系 AML患者血清NGF和骨髓白血病細胞群表面p75NTR表達水平在不同年齡、性別、外周白細胞計數以及骨髓幼稚細胞比例間差異均無統計學意義(P 均 ＞0.05)。

2.3 AML不同臨床療效患者NGF和p75NTR的表達 24例初治AML患者中，除1例放棄治療和1例早期死亡外，余22例患者經2個周期標準方案化療后獲CR 15例(CR組)、NR 7例(NR組)，總體緩解率為68.18%(15/22)。AML患者不同臨床療效間NGF和p75NTR表達變化見表2。

表2 AML不同臨床療效間NGF和p75NTR表達變化()

表2 AML不同臨床療效間NGF和p75NTR表達變化()

注:與 NR組化療前比較，*P＜0.05;與對照組比較，△P＜0.05;與 CR 組化療后比較，▲P ＜0.05

組別 n NGF(pg/ml) p75NTR(%)病例組CR 15化療前 119.13 ±54.58 61.18 ±15.58*化療后 88.33 ±48.86 73.86 ±12.00 NR 7化療前 120.00 ±92.87 44.29 ±15.61化療后 114.43±60.90△ 46.82±19.34△▲對照組15 64.60 ±33.11 83.39 ±10.99

2.4 NGF和p75NTR表達與患者3年OS的關系以全部24例患者治療前NGF和p75NTR表達水平的中位數設定為界值分為NGF或p75NTR高表達組、NGF或p75NTR低表達組，以此分別繪制Kaplan-Meier生存曲線觀察患者3年OS。NGF高表達組3年OS為38.9%，低表達組為48.6%，兩組比較差異無統計學意義(P=0.672);p75NTR高表達組3年OS為43.6%，低表達組為38.5%，兩組比較差異亦無統計學意義(P=0.548)。

3 討論

p75NTR具有復雜的生物學功能，可以介導細胞的存活、增殖、分化或凋亡等效應，在不同的細胞類型、發育階段及局部環境中執行的功能往往不同［1］。

近年來大量臨床和基礎研究顯示，NGF及其受體在腫瘤組織中異常表達，參與腫瘤的發生發展但表達水平卻不盡一致［2～6］。NGF 在膽管癌、乳腺癌［7］以及伴肝硬化的肝細胞癌中高表達，支持了NGF在腫瘤進展中起促進癌細胞增殖的作用，并提示NGF陽性表達隨著腫瘤惡性程度的增高而增高，且與腫瘤的淋巴轉移密切相關。目前，p75NTR被認為是一個潛在的抑癌基因，p75NTR可有效地抑制前列腺癌、膀胱癌、胃癌及視網膜母細胞瘤等惡性腫瘤細胞的生長，這種抑制作用是通過改變細胞周期調節蛋白的表達來影響細胞周期、誘導凋亡來實現的。相反，也有研究報道胰腺導管癌p75NTR表達較正常胰腺組織表達上調［6］。目前，對于不同腫瘤組織p75NTR表達差異的具體機制仍未完全闡明。Troeger等研究120例ALL兒童患者的低親和性NGF受體水平發現，p75NTR高表達是小兒ALL良好的預后標記。為此我們推測血清NGF高表達可能參與B-ALL的發生發展過程，且可能參與白血病骨髓微環境的維系，并對白血病的發生發展起促進作用;而p75NTR表達下調可能通過調節TrkA信號轉導以及抑制白血病細胞凋亡等作用機制參與白血病的發生發展，此有待進一步研究。

本研究發現，隨著白血病病情的緩解，NGF和p75NTR均不同程度地恢復正常，提示兩者對判斷白血病患者的近期療效可能具有一定的參考價值。雖然緩解后AML患者NGF和p75NTR與對照組比較差異無統計學意義，但從表達水平看尚未完全正常。本文結果還顯示，NGF和p75NTR高表達組3年OS較低表達組差異無統計學意義，此不排除樣本量不足對研究結果的影響。因此，我們下一步將擴大樣本量進一步評價NGF和p75NTR在預后評價中的意義。

［1］Wehrman T，He X，Raab B，et al.Structural and mechanistic insights into nerve growth factor interactions with the TrkA and p75 receptors［J］.Neuron，2007，53(1):25-38.

［2］Lazova R，Tantcheva-Poor I，Sigal AC.p75 nerve growth factor receptor staining is superior to S100 in identifying spindle cell and desmoplastic melanoma［J］.J Am Acad Dermatol，2010，63(5):852-858.

［3］Qian Y，Takeuchi S，Chen SJ，et al.Nerve growth factor，brain-derived neurotrophic factor and their high-affinity receptors are overexpressed in extramammary Paget＇s disease［J］.J Cutan Pathol，2010，37(11):1150-1154.

［4］Meng LX，Ding ZJ，Chen XP，et al.The expression and significance of nerve growth factor and its receptors in pancreatic ductal adenocarcinoma［J］.Zhonghua Neike Zazhi，2009，48(7):562-565.

［5］Wang W，Zhao H，Zhang S，et al.Patterns of expression and function of the p75(NGFR)protein in pancreatic cancer cells and tumours［J］.Eur J Surg Oncol，2009，35(8):826-832.

［6］Liu M，Su YH，Chen Y.Expressions of neurotrophic factors and their receptors in prostate cancer［J］.Zhonghua Nankexue，2010，16(2):129-131.

［7］Dollé L，Adriaenssens E，Yazidi-Belkoura I，et al.Nerve growth factor receptors and signaling in breast cancer［J］.Curr Cancer Drug Targets，2004，4(6):463-470.