結合珠蛋白遺傳多態性與肥胖的關系

劉國棟，李艷波，徐 瑩，毛 楠，李 敏

(哈爾濱醫科大學附屬第一醫院內分泌科，哈爾濱 150001)

肥胖癥是由于遺傳和環境因素的相互作用所造成的代謝紊亂性疾病，有研究認為肥胖是一種慢性全身性輕度炎癥狀態［1］。Hannerz等［2］的研究指出，結合珠蛋白(haptoglobin，Hp)可能作為肥胖癥一種新的標志物。Hp作為一種重要的脂肪細胞因子，在肥胖及與肥胖相關的各種疾病中扮演著重要的角色。本研究旨在于檢測肥胖患者血中Hp表型和Hp基因頻率的分布，并分析其與肥胖癥之間的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選自在哈爾濱醫科大學附屬第一醫院體檢中心及門診進行體檢的人群，年齡20～62歲，共180例，均為黑龍江地區居住的漢族人。排除標準:①患有可能影響糖脂代謝的其他內分泌疾病者。②應激、感染，肝、腎功能異常者。③腫瘤、心肌梗死、皮膚病、支氣管哮喘等病理狀態。④受試前接受過降糖、調脂、減肥治療者。根據2003年4月衛生部疾病控制司公布的《中國成人超重和肥胖癥預防控制指南》，成人體質量指數≥24 kg/m2為超重，體質量指數≥28 kg/m2為肥胖，將試驗人群分為兩組:正常對照組60例(男性和女性各30例)、肥胖組120例(男性和女性各60例)。正常對照組和肥胖組的年齡分別為(39.85 ±12.11)歲和(38.85±11.48)歲;體質量指數分別為(22.12 ± 1.17)kg/m2和(28.10 ±1.37)kg/m2;腰圍分別為(78.26 ±6.24)cm和(91.71 ±6.53)cm。

1.2 實驗室檢查 所有受試者禁食10 h后，第2天清晨抽取外周靜脈血標本5 mL靜置30 min，然后以每3000 r/min離心 15 min，吸取血清于 1.5 mL Eppendorf管中，標記后置于－80℃冰箱內保存備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣本的制備 取外周靜脈血，自然凝血后取血清，在－70℃ 低溫下保存備用。

1.3.2 10%(100 g/L)血紅蛋白的制備 移取新鮮抗凝血液，離心后去血漿，以10倍體積的生理鹽水洗滌紅細胞3～4次，最后一次 3000 r/min離心20 min，盡量移去鹽水成分，然后以等體積蒸餾水及0.5倍體積的四氯化碳混合，劇烈振蕩5 min后，離心20 min(2500 r/min)，吸取上層血紅蛋白溶液，測定其濃度，并精確稀釋成100 g/L，－20℃ 保存。

1.3.3 樣品的制備 取待檢血清100 μL，加入10%血紅蛋白5 μL，10 min后加入20μL凝膠上樣緩沖液混勻備用。

1.3.4 凝膠的制備 積層膠:5%聚丙烯酰胺凝膠，分離膠:9%聚丙烯酰胺凝膠。

1.3.5 上樣及電泳 將5 μL樣品加樣于凝膠梳孔60 V，10 mA電泳40 min，然后換90 V，10 mA 電泳12 h，電泳槽緩沖液為pH 8.3的Tris-Gly緩沖液。電泳結束后，取出膠板用考馬斯亮藍染色液染2 h，然后用蒸餾水漂洗多次，再用脫色液脫色直到蛋白質區條帶清晰。

1.4 結果判讀 根據Smithies方法，依據帶譜的分布情況，判斷Hp的分型。游離血紅蛋白的相對分子質量小，其遷移率最快，在陽極端出現一條粗帶，每個樣品均有。陽極端游離血紅蛋白帶之后，僅有一條粗帶者為Hp1-1型。在陰極端有多條帶，而陽極端無帶者為Hp2-2型。在兩者中間多一條帶者為Hp2-1型(圖1)。

圖1 血清Hp電泳分型

1.5 統計學方法 采用SAS 9.1.3統計學軟件，兩組年齡、體質量指數、腰圍的差異比較，采用t檢驗;兩組間基因表型和基因頻率的差異比較，采用χ2檢驗，組間兩兩比較采用 χ2分割法，檢驗水準為0.05/3=0.017。

2 結果

正常對照組與肥胖組基因表型分布差異有統計學意義(χ2=7.0214，P=0.0299)(表 1)。肥胖組的Hp2基因頻率高于正常對照組(χ2=9.5100，P=0.0020)，差異有統計學意義(表2)。

表1 正常對照組與肥胖組基因表型比較 ［例(%)］

表2 正常對照組與肥胖組基因頻率比較 (%)

3 討論

Hp是血清遺傳學的一個重要標志物，Hp的分子結構類似免疫球蛋白，是受遺傳支配的多形性蛋白，由兩條輕鏈(α鏈)和兩條重鏈(β鏈)組成四聚體，Hp的多態性主要是α鏈的遺傳變異造成α鏈有α1和α2兩種，α1又有α1F和α1S兩種遺傳變異體，呈共顯性遺傳，因此可以形成最常見的三種基因型Hp1-1、Hp2-1 和 Hp2-2［3］。由位于16 號染色體長臂上的Hp1和Hp2兩個等位基因所決定，具有遺傳多態現象。已有研究證實，Hp1基因被認為在許多疾病，如肝炎、肝癌、肝硬化、肺癌、肺氣腫、白血病中有較高的疾病遺傳易感性［4，5］。但 Hp1基因的作用機制尚不清楚。有研究認為Hp1基因與機體免疫功能有關，對淋巴細胞和巨噬細胞的功能有調節作用，在炎性反應中可能有控制組織損傷的功能。

肥胖個體往往伴有高胰島素血癥和胰島素抵抗［6］。目前，國外已對Hp基因多態性與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(簡稱冠心病)的關系進行了廣泛的研究［7-9］，并取得了眾多Hp基因多態性與冠心病發生發展的研究證據，如Hp2-2基因是冠心病發生的促進因素，特別是在糖尿病、阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征等高危人群中，Hp2-2基因也是冠心病患者轉歸及預后的不利因素，同時也影響著抗氧化藥物預防冠心病的療效等。而肥胖是冠心病發生的主要危險因素之一，認為Hp表型可能與肥胖癥的發生有關，肥胖的發生具有遺傳易感性。本研究結果表明，肥胖組Hp2-2基因型高于正常對照組，表明以Hp2-2基因型為主的人群可能對肥胖有遺傳易感性。研究結果表明，與正常對照組相比，肥胖組患者Hp2基因頻率明顯增高，表明Hp2基因肥胖患者中有聚集現象。肥胖癥的遺傳易感性增加與Hp2基因有某種內在聯系，Hp2基因可能在肥胖癥的發生中起一定作用。

［1］ Abderrahim-Ferkoune A，Bezy O，Chiellini C，et al.Characterization of the long pentraxin PTX3 as a TNF-induced secreted protein of adipose cells［J］.J Lipid Res，2003，44(5):994-1000.

［2］ Hannerz J，Greitz D，Ericson K.Is there a relationship between obesity and intracranial hypertension［J］.Int J Obes Relat Metab Disord，1995，19(4):240-244.

［3］ Langlois MR，Delanghe JR.Biological and clinical significance of haptoglobin polymorphism in humans［J］.Clin Chem，1996，42(10):1589-1600.

［4］ 趙會全，張貴寅，段玉琴，等.結合珠蛋白的遺傳多態性及其與疾病的關系［J］.遺傳與疾病，1988，5(2):69.

［5］ 羅佳濱，王維人，呂學冼，等.乙型肝炎群體中結合珠蛋白表型的分布特點［J］.遺傳與疾病，1988，5(4):218.

［6］ Alvarez-Blasco F，Botella-Carretero JI，San Millan JL，et al.Prevalence and characteristics of the polycystic ovary syndrome in overweight and obese women［J］.Arch Intern Med，2006，166(19):2081-2086.

［7］ Langlois MR，Delanghe JR.Biological and clinical significance of haptoglobin polymorphism in humans［J］.Clin Chem，1996，42(10):1589-1600.

［8］ Hochberg I，Roguin A，Nikolsky E，et al.Haptoglobin phenotype and coronary artery collaterals in diabetic patients［J］.Atherosclerosis，2002，161(2):441-446.

［9］ Lohr NL，Warltier DC，Chilion WM，et al.Haptoglobin expression and activity during coronary collateralization［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2005，288(3):H1389-H1395.