STK豬瘟活疫苗與ST細(xì)胞苗及脾淋組織苗免疫效果試驗(yàn)

張一鳴

（成都巨星豬業(yè)有限公司，四川省成都市 611230）

STK豬瘟活疫苗與ST細(xì)胞苗及脾淋組織苗免疫效果試驗(yàn)

張一鳴

（成都巨星豬業(yè)有限公司，四川省成都市 611230）

將STK豬瘟活疫苗、ST豬瘟活疫苗、豬瘟脾淋組織苗和生理鹽水（對(duì)照組）分別接種CSFV血清學(xué)陰性（CSFV抗體阻斷率≤30%）的斷奶仔豬，用美國(guó)IDEXX公司的豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)其抗體水平的動(dòng)態(tài)變化差異，并分析抗體合格率（或陽(yáng)性率）、阻斷率等指標(biāo)。結(jié)果表明：仔豬二次免疫STK豬瘟活疫苗后25天（即90日齡），豬瘟抗體的合格率達(dá)到100%，其中85%仔豬的抗體水平達(dá)到了比較高的滴度（阻斷率≥60%），且二次免疫后在整個(gè)生長(zhǎng)期都能維持較高的抗體水平。免疫ST豬瘟活疫苗及豬瘟脾淋組織苗后，在90日齡豬瘟抗體的合格率雖能達(dá)到或接近100%，但抗體水平處于高滴度的比例不大：ST細(xì)胞苗40%仔豬抗體阻斷率≥60%，脾淋苗只有35%仔豬抗體阻斷率≥60%，均低于免疫STK豬瘟活疫苗的抗體水平，且較高抗體水平維持的時(shí)間短于STK豬瘟活疫苗。各項(xiàng)結(jié)果表明，STK豬瘟活疫苗對(duì)仔豬有很好的免疫效果，能產(chǎn)生較高水平及較長(zhǎng)時(shí)間的免疫保護(hù)力，且免疫效果優(yōu)于ST豬瘟活疫苗和豬瘟脾淋組織苗。

試驗(yàn)；豬瘟；疫苗

1 材料

1.1 疫苗

高效價(jià)豬瘟活疫苗（STK傳代細(xì)胞源），購(gòu)自普萊柯生物工程有限公司，批號(hào)： （2009）160021004； 本品系用豬瘟兔化弱毒株接種易感細(xì)胞培養(yǎng)，獲取細(xì)胞培養(yǎng)物，加入適宜穩(wěn)定劑，經(jīng)冷凍真空干燥制成。每頭份含細(xì)胞毒液不少于0.015mL（每頭份病毒含量≥7500個(gè)家兔感染量）。

STTM豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源），購(gòu)自廣東永順生物制藥有限公司，農(nóng)醫(yī)藥便函 [2008]285號(hào)。本品系用豬瘟兔化弱毒株接種易感細(xì)胞培養(yǎng)，獲取細(xì)胞培養(yǎng)物，加入適宜穩(wěn)定劑，經(jīng)冷凍真空干燥制成。每頭份含細(xì)胞毒液不少于0.015mL（每頭份病毒含量≥7500個(gè)家兔感染量）。

豬瘟活疫苗（兔源）脾淋苗，購(gòu)自山東綠都生物科技有限公司，批號(hào)：獸藥生字（2008）151821001， 本品系用豬瘟兔化弱毒株接種兔，收獲感染兔的脾臟及淋巴結(jié) （簡(jiǎn)稱脾淋），制成乳劑，加適宜穩(wěn)定劑，經(jīng)冷凍真空干燥制成。每頭份脾淋苗應(yīng)不少于組織毒0.01g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

從四川成都巨星豬業(yè)有限公司興裕祖代豬場(chǎng)，選擇同胎次種母豬2010年10月2日出生健康斷奶仔豬8窩共80頭。

1.3 主要試劑

豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京愛(ài)德士元亨生物股份有限公司，由美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)，批號(hào)為43220-S091。在使用前，試劑盒室溫下恢復(fù)到18～25℃，試劑混合均勻。

1.4 主要儀器

一次性注射器、SIGMA高速臺(tái)式離心機(jī)、Tip吸頭、Promaga公司微量移液器、96孔酶標(biāo)儀、濕盒、離心管、量筒（500mL） 等。

2 方法

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組和免疫

將試驗(yàn)仔豬隨機(jī)分為A、B、C、D四組，每組 20頭，分別按 A1～A20、B1～B20、 C1～C20、 D1～D20順序打耳號(hào)編號(hào)。A組：免疫STK豬瘟活疫苗；B組：免疫ST豬瘟活疫苗；C組：免疫豬瘟脾淋組織苗；D組：注射相同體積的滅菌生理鹽水。四組試驗(yàn)豬飼養(yǎng)管理?xiàng)l件相同，并同時(shí)于30日齡和60日齡每頭肌肉注射相應(yīng)疫苗進(jìn)行豬瘟免疫見(jiàn)表1。

2.2 免疫血清采集與處理

試驗(yàn)組與對(duì)照組仔豬分別于10、20、 28、 35、 42、 55、 75、 90、 120、150、180天耳靜脈采血，將所采血液轉(zhuǎn)入Ep管，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，取上清，4℃或-20℃保存待檢。

2.3 抗體檢測(cè)方法

采用IDEXX—ELISA試劑盒按照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行檢測(cè)，并分析抗體合格率（或陽(yáng)性率）、阻斷率等指標(biāo)。

CSFV的ELISA的結(jié)果判定：豬瘟抗體檢測(cè)試驗(yàn)（阻斷ELISA）成立條件是陰性對(duì)照的平均OD450值大于0.50，陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率大于50%，試驗(yàn)方成立有效。樣品阻斷率=（陰性對(duì)照平均OD450值－樣品OD450）／陰性對(duì)照平均OD450×100%；被檢樣品的阻斷率大于或等于40%，該樣品為豬瘟抗體陽(yáng)性；樣品阻斷率小于或等于30%，該樣品為陰性（無(wú)豬瘟抗體存在）；樣品阻斷率在30～40%，該樣品為可疑。

表1 試驗(yàn)仔豬免疫劑量及日齡

3 結(jié)果分析

3.1 仔豬不同日齡抗體阻斷率檢測(cè)結(jié)果

試驗(yàn)組仔豬28天起分階段開(kāi)始采血，30天首免，60天二免；對(duì)照組仔豬出生10天起開(kāi)始采血，分離血清，采用IDEXX-ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。

對(duì)照組：仔豬10日齡時(shí)，母源抗體水平較高，豬瘟抗體合格率為90%，其中65%仔豬抗體阻斷率在40%～60%，25%仔豬抗體阻斷率≥60%；隨著日齡的增加，仔豬母源抗體水平逐漸下降，20日齡，抗體合格率為60%；28日齡僅為30%，35日齡，抗體合格率為0。

STK豬瘟活疫苗組：首免后25天（即55日齡），15%仔豬豬瘟抗體阻斷率在40%～60%，5%仔豬抗體阻斷率≥60%，抗體合格率為20%；二免后15天，35%仔豬豬瘟抗體阻斷率在40%～60%，30%抗體阻斷率≥60%，豬瘟抗體合格率為65%；仔豬在90日齡、120日齡，抗體阻斷率均大于40%，合格率為100%；120日齡后，抗體水平開(kāi)始逐步降低，到180日齡，豬瘟抗體合格率降為55%。

ST豬瘟活疫苗組：首免后25天（即55日齡），15%仔豬豬瘟抗體阻斷率在40%～60%，5%抗體阻斷率≥60%，抗體合格率為20%；二免后15天，25%仔豬抗體阻斷率在40%～60%，25%抗體阻斷率≥60%，抗體合格率為50%；90日齡，仔豬的抗體阻斷率均≥40%，抗體合格率為100%；90～180日齡，抗體水平開(kāi)始逐步降低，抗體合格率從100%降至50%。

豬瘟脾淋組織苗組：首免后25天（即55日齡），豬瘟抗體合格率為15%（阻斷率均在 40%～60%）；二免后 15天，40%仔豬抗體阻斷率在40%～60%，20%抗體阻斷率≥60%，抗體合格率為60%；90日齡，60%仔豬抗體阻斷率在40%～60%，35%抗體阻斷率≥60%，抗體合格率為95%；90～180日齡，抗體水平逐步降低，抗體合格率從95%降為45%。

3.2 試驗(yàn)豬群豬瘟免疫合格率

豬瘟免疫合格率共同變化趨勢(shì)：一免后，豬瘟免疫合格率有小幅度的升高，二免后至90日齡，豬瘟免疫合格率顯著提高并接近或達(dá)到100%，90日齡之后，豬瘟免疫合格率逐漸降低。

差異之處：二免后，STK豬瘟活疫苗組免疫合格率上升速度均高于其他兩種疫苗；且在90～120日齡間，均能保持100%合格率；120日齡后，豬瘟免疫合格率雖有下降，但下降幅度小于ST豬瘟活疫苗和豬瘟脾淋組織苗免疫組。

4 討論

4.1 STK豬瘟活疫苗對(duì)仔豬的免疫效果優(yōu)于ST豬瘟活疫苗和豬瘟脾淋組織苗

從表2、圖1可看出，仔豬二次免疫STK豬瘟活疫苗后，90日齡豬瘟抗體的合格率達(dá)到100%，其中85%仔豬的抗體水平達(dá)到了比較高的滴度（阻斷率≥60%，而根據(jù)美國(guó)IDEXX公司的數(shù)據(jù)顯示，豬瘟抗體的阻斷率在60%～80%是最理想的），且二次免疫后在整個(gè)生長(zhǎng)期都能維持較高的抗體水平。說(shuō)明STK豬瘟活疫苗對(duì)仔豬有很好的免疫效果。

免疫ST豬瘟活疫苗及豬瘟脾淋組織苗后，在90日齡豬瘟抗體的合格率雖能達(dá)到或接近100%，但抗體水平處于高滴度的比例不大，ST細(xì)胞苗40%仔豬抗體阻斷率≥60%，脾淋苗只有35%仔豬抗體阻斷率≥60%，均低于免疫STK豬瘟活疫苗的抗體水平，且維持較高抗體水平的時(shí)間短于STK豬瘟活疫苗。由此可見(jiàn)，STK豬瘟活疫苗的對(duì)仔豬的免疫效果優(yōu)于ST豬瘟活疫苗和豬瘟脾淋組織苗。

4.2 豬瘟細(xì)胞苗與豬瘟脾淋苗優(yōu)缺點(diǎn)比較

豬瘟活疫苗（兔源）脾淋苗，系用豬瘟兔化弱毒株接種兔，收獲感染兔的脾臟及淋巴結(jié)（簡(jiǎn)稱脾淋），制成乳劑，加適宜穩(wěn)定劑，經(jīng)冷凍真空干燥制成。每頭份脾淋苗應(yīng)不少于組織毒0.01g。ST豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源），系用豬瘟兔化弱毒株接種易感細(xì)胞培養(yǎng)，收獲細(xì)胞培養(yǎng)物，加適宜穩(wěn)定劑，經(jīng)冷凍真空干燥制成。每頭份含細(xì)胞毒液不少于0.015mL（每頭份病毒含量≥7500個(gè)家兔感染量）。高效價(jià)豬瘟活疫苗（STK傳代細(xì)胞源），系用豬瘟兔化弱毒株接種易感細(xì)胞培養(yǎng)，收獲細(xì)胞培養(yǎng)物，加適宜穩(wěn)定劑，經(jīng)冷凍真空干燥制成。每頭份含細(xì)胞毒液不少于0.015mL（每頭份病毒含量≥7500個(gè)家兔感染量）。究竟哪種苗比較好呢，下面我們來(lái)做一詳細(xì)分析。

從生產(chǎn)工藝方面看，細(xì)胞苗的質(zhì)量應(yīng)比脾淋苗穩(wěn)定。因?yàn)榧?xì)胞苗的苗毒是在實(shí)驗(yàn)室條件下通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)獲得，其培養(yǎng)液、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間及其他環(huán)境條件都是可控的，只要實(shí)驗(yàn)室人員具備基本的責(zé)任心，就完全可以做到苗毒劑量的相對(duì)穩(wěn)定。而脾淋苗的苗毒則是通過(guò)把苗毒毒株接種到活體兔，使苗毒在兔體內(nèi)復(fù)制，再定期收割兔體的脾臟和淋巴結(jié)獲得。由于兔體個(gè)體對(duì)苗毒的敏感程度不一，從不同兔體收獲的苗毒，其劑量可能存在很大差異。理論上，雖然脾淋苗的苗毒劑量可以通過(guò)把苗毒原液稀釋到一定比例（如1︰50000）接種兔，觀察接種兔是否出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)來(lái)檢測(cè)，但接種兔是否出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)不僅與兔體對(duì)苗毒的敏感性有關(guān)，其他各種外界因素也起著很大作用。如果接種兔在觀察期間剛好感染了其他病原，其發(fā)熱反應(yīng)就有可能是其他病原引起[1]。

表2 免疫不同豬瘟疫苗后不同日齡抗體阻斷率分布情況

從生產(chǎn)成本上，脾淋苗的苗毒生產(chǎn)成本較高，疫苗生產(chǎn)廠家能否嚴(yán)格做到使用未曾接種過(guò)兔瘟疫苗的兔子來(lái)做脾淋苗，也是有待考證的。

細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)是當(dāng)代最先進(jìn)的抗原生產(chǎn)工藝技術(shù)，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)方式相比具有明顯優(yōu)勢(shì)：一是單位細(xì)胞培養(yǎng)容積生產(chǎn)效率提高140倍以上；二是單位抗原效價(jià)提高10～100倍；這就大大降低了細(xì)胞苗的生產(chǎn)成本。實(shí)際上，我國(guó)豬瘟細(xì)胞苗的免疫效果早已經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的攻毒試驗(yàn)驗(yàn)證，只要疫苗質(zhì)量過(guò)關(guān)，則完全可以放心使用。既然廉價(jià)的豬瘟細(xì)胞苗已經(jīng)能夠有效預(yù)防豬瘟，就完全沒(méi)有必要選擇成本高、免疫效果又不及細(xì) 胞 苗 的 脾 淋 苗[2，3]。

STK豬瘟活疫苗與ST細(xì)胞苗，均屬于ST傳代細(xì)胞苗，STK豬瘟活疫苗是在ST細(xì)胞苗的基礎(chǔ)上添加了免疫增強(qiáng)劑的成分，使其免疫效果優(yōu)于ST細(xì)胞苗。

4.3 初生仔豬豬瘟母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律分析

表2和圖1表明，對(duì)照組豬瘟母源抗體隨著仔豬日齡增長(zhǎng)而下降，約35日齡豬瘟母源抗體降為0，結(jié)果和資料報(bào)道母源抗體衰退的規(guī)律一致[4，5]。由以上試驗(yàn)結(jié)果可知，豬群在首次免疫豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）后15～30天，抗體阻斷率提升并不顯著，但二次免疫后抗體阻斷率大幅度提高，取得了理想的免疫效果。

5 小結(jié)

目前國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)控制豬瘟都主要采取預(yù)防接種的措施，但由于疫苗種類較多效果不一，免疫程序不同，地區(qū)間差異較大，綜合防治措施各異，導(dǎo)致豬瘟不能得到有效控制，要做到有效免疫，控制豬瘟的發(fā)生，選好疫苗是關(guān)鍵[6]。仔豬采用30日齡首免，60日齡二免的免疫程序免疫STK豬瘟活疫苗后，能產(chǎn)生較高的抗體阻斷率，二次免疫后免疫合格抗體水平能維持約4個(gè)月，且免疫效果優(yōu)于其他疫苗（ST豬瘟活疫苗和豬瘟脾淋組織苗）；由于特殊的生產(chǎn)工藝，STK豬瘟活疫苗不僅生產(chǎn)成本低廉，而且抗原效價(jià)高、穩(wěn)定性好，適合推廣使用。

[1]蔣冬福，施萬(wàn)球，韋家槐，等.兔脾淋組織液對(duì)豬瘟疫苗的免疫增強(qiáng)試驗(yàn).中國(guó)獸醫(yī)雜志， 2001， 37（7）:10-11.

[2]韓雪清，劉湘濤，趙啟祖.豬瘟病毒及其豬瘟疫苗研究進(jìn)展.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2000， 21（2）： 1-7.

[3]卞春玲，羅滿林.豬瘟疫苗研究進(jìn)展.畜牧獸醫(yī)科技信息，2003（1）:14-17.

[4]周相華，韓喜連.豬瘟免疫接種抗體效價(jià)檢測(cè)試驗(yàn).中國(guó)動(dòng)物檢疫，2006，23（7）:35-36.

[5]李明義，白志娟，趙雪麗，等.豬瘟抗體消長(zhǎng)規(guī)律動(dòng)態(tài)研究.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2004， 21（8）:24-26.

[6]范秀波，趙玉軍.豬瘟疫苗研究進(jìn)展，吉林畜牧獸醫(yī)，2007，38（1）:32-34.