重組人生長激素對人巨噬細胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影響*

丁培杰，段長恩，張世杰，趙國強

1)漯河醫學高等專科學校免疫學教研室漯河462000 2)新鄉醫學院免疫學教研室新鄉453003 3)鄭州大學第一附屬醫院檢驗科鄭州450052 4)鄭州大學基礎醫學院微生物學與免疫學教研室鄭州450001

(2010-06-11收稿 責任編輯 徐春燕)

生長激素(growth hormone，GH)是由腦垂體前葉的腺細胞分泌的一種蛋白質，其主要作用是促進生長發育和影響代謝，既往主要用于兒童GH缺乏癥的治療。近年來發現GH具有廣泛的生理作用，其免疫調節作用為人們廣泛關注［1］。已有研究［2-3］顯示GH對T淋巴細胞有重要的調節作用。作者從人靜脈血中分離單個核細胞，將其誘導分化為巨噬細胞，觀察不同質量濃度的人重組GH(rhGH)對于人巨噬細胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 RPMI 1640培養基、胎牛血清(天津TBD公司)，重組人粒-巨噬細胞集落刺激因子(rh-GM-CSF，Peprotech 公司)，CD14-FITC、TLR4-PE 及同型對照(深圳晶美生物工程有限公司)，脂多糖(LPS，上海BOYUN公司)。

1.2 巨噬細胞的誘導與鑒定［4］取健康人靜脈血，肝素抗凝，Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞。用含體積分數10%胎牛血清的RPMI 1640培養基(含終濃度1 000 U/mL rhGM-CSF)培養6 d。觀察貼壁細胞形態，流式細胞儀檢測細胞表面CD14和TLR4的表達。

1.3 細胞分組與處理 將1.2中所獲得的細胞分為6組，分別加入終質量濃度為1、4、20和50μg/L的rhGH，LPS組加入的終質量濃度為1 mg/L的LPS，空白對照組僅給予RPMI 1640培養液。

1.4 細胞培養上清液中IL-1、IL-6和TNF-α水平測定 于培養4、8、12 h分別吸取培養上清液50 μL，以ELISA法測定各培養上清液中IL-6、IL-1和TNF-α的水平(每組的不同時間點均設3個復孔)。

1.5 統計學處理 采用SPSS 16.0進行分析，應用重復測量數據的方差分析觀察6組細胞培養不同時間培養上清液中IL-1、IL-6和TNF-α水平的差異，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 巨噬細胞的鑒定 顯微鏡下觀察細胞，可見貼壁細胞伸展，牢固黏附，體積明顯增大，從不規則形逐漸變成橢圓形，呈煎蛋狀，少數呈長梭形。細胞間可有部分融合，細胞周邊或兩極可見板狀偽足和突起，細胞無明顯增殖。所誘導的細胞較為一致地表達CD14和TLR4，流式細胞術檢測顯示 CD14和TLR4的細胞陽性率達85.1%。

2.2 6組巨噬細胞培養上清液中 IL-1、IL-6和TNF-α水平比較 見表1。

表1 6組巨噬細胞培養上清液中IL-1、IL-6和TNF-α水平比較(n=3)

3 討論

該研究選用人外周血單個核細胞作為巨噬細胞的來源，與動物實驗相比更接近人體功能。單個核細胞具有不同的分化潛能，在不同的培養條件下可向巨噬細胞或樹突狀細胞分化。GM-CSF在體外可誘導單個核細胞分化為巨噬細胞［5-6］。巨噬細胞的鑒定指標主要包括形態學檢查、生物學功能檢查和免疫學標志檢查等。CD14和TLR4是單核巨噬細胞系統特征性的表面標記。流式細胞術檢測結果顯示CD14和TLR4的細胞陽性率為85.1%，證明該法培養的巨噬細胞在體外具有生物學活性，且純度較高。

rhGH是近年來利用重組DNA技術合成的GH，已在臨床上得到廣泛應用，其具有增強機體免疫力的作用，在體內和體外均能促進胸腺基質細胞分泌胸腺素［7］，在體外能促進植物血凝素刺激的正常人T淋巴細胞的增殖，在體內能提高自然殺傷細胞的活性［8］。

LPS是公認的體內巨噬細胞產生促炎因子的始動者，可以誘導巨噬細胞細胞因子的分泌增加［9］。該研究結果顯示LPS刺激巨噬細胞可以顯著升高IL-1、IL-6及TNF-α等促炎癥細胞因子的分泌，其機制應該與LPS和巨噬細胞表面的TLR4結合從而激活細胞內的信號轉導通路，使細胞因子的分泌增加有關［10］。rhGH同樣可以促進巨噬細胞上述細胞因子的分泌，且隨培養時間的延長呈升高的趨勢，可視為宿主對外來病原體的一種防御反應;當達到一定質量濃度后其巨噬細胞的分泌便不再增加，其機制可能為GH與巨噬細胞表面的GH受體結合而激活細胞內的某些轉導通路，從而誘導其細胞因子的分泌，但當GH達到一定質量濃度后，由于與細胞表面受體結合飽和以及胞內相關信號途徑均已激活而不再增加。

總之，作者利用人外周血分離和培養巨噬細胞，并發現GH具有與LPS相似的促進巨噬細胞細胞因子分泌的作用，說明GH可能參與免疫調節作用，然而GH如何調節巨噬細胞的這種功尚需要進一步研究。

［1］王輝.生長激素對免疫細胞功能調節的研究進展［J］.國外醫學:內分泌學分冊，2000，20(2):91

［2］ Savino W.Neuroendocrine control of Tcell development in mammals:role of growth hormone in modulating thymocyte migration［J］.Exp Physiol，2007，92(5):813

［3］王輝，鄧潔英，史軼蘩.生長激素調節T淋巴細胞的功能［J］.中國免疫學雜志，2000，16(9):480

［4］楊志梅，符州，王莉佳，等.人外周血單核巨噬細胞誘導、培養及鑒定［J］.生物學雜志，2008，25(5):66

［5］ Wegrowski Y，Milard AL，Kotlarz G，et al.Cell surface proteoglycan expression during maturation of human monocytes-derived dendritic cells and macrophages［J］.Clin Exp Immunol，2006，144(3):485

［6］Lehtonen A，Ahlfors H，Veckman V，et al.Gene expression profiling during differentiation of human monocytes to macrophages or dendritic cells［J］.J Leukoc Biol，2007，82(3):710

［7］ Meazza C，Pagani S，Travaglino P，et al.Effect of growth hormone(GH)on the immune system［J］.Pediatr Endocrinol Rev，2004，1(Suppl 3):490

［8］Shimizu K，Adachi K，Teramoto A.Growth hormone enhances natural killer cell activity against glioma［J］.J Nihon Med Sch，2005，72(6):335

［9］ McCoy CE，O＇Neill LA.The role of toll-like receptors in macrophages［J］.Front Biosci，2008，13:62

［10］Roger T，David J，Glauser MP，et al.MIF regulates innate immune responses through modulation of Toll-like receptor 4［J］.Nature，2001，414(6866):920