河南產(chǎn)尾葉香茶菜葉部位化學(xué)成分的分離與純化*

吳月霞，張 偉，劉 娜，李繼成，楊麗嘉

鄭州大學(xué)藥學(xué)院鄭州450001

(2011-01-13收稿 責(zé)任編輯 徐春燕)

多年生草本植物尾葉香茶菜［Rabdosia excisus(Maxim.)H.Hara］系唇形科羅勒亞科香茶菜屬，廣泛分布于我國的東北地區(qū)、日本、朝鮮及俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)［1］。在民間，全草入藥具有清熱解毒、活血破瘀、抗菌消炎及保肝抗癌等作用。實(shí)驗(yàn)［2］證明，尾葉香茶菜具有抑制人宮頸癌細(xì)胞生長的作用。目前有關(guān)尾葉香茶菜的化學(xué)成分已有報(bào)道，但考慮到不同產(chǎn)地的同一植物次生代謝產(chǎn)物很可能有差異，作者對產(chǎn)自河南省魯山縣地區(qū)的該種植物進(jìn)行了研究，共計(jì)從尾葉香茶菜葉部位的粗提物石油醚和乙酸乙酯部分分離了10個(gè)化學(xué)成分，并通過各種波譜技術(shù)分析鑒定了所有化合物的結(jié)構(gòu)。

1 材料與方法

1.1 材料 Rabdosia excisa葉于2009年8月采自河南省魯山縣，放置陰涼處自然晾干。原植物由鄭州大學(xué)藥學(xué)院李繼成教授和河南省中醫(yī)學(xué)院董誠明副教授鑒定，標(biāo)本保存于鄭州大學(xué)藥學(xué)院標(biāo)本館。

1.2 儀器 DPX-400 400 MHz超導(dǎo)核磁共振儀(瑞士Bruker Avance)，控溫型XT4A顯微熔點(diǎn)測定儀(北京科儀電光儀器廠)，柱層析用硅膠(200～300目)和薄層層析用硅膠(GF254)由青島海洋化工廠生產(chǎn)。

1.3 提取分離方法 取尾葉香茶菜干葉1.5 kg，用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，減壓濃縮得浸膏，將浸膏用甲醇溶解，加活性炭脫色后減壓濃縮除去甲醇，用500 mL水分散浸膏，再分別用石油醚和乙酸乙酯萃取。濃縮石油醚和乙酸乙酯萃取液，得到橙黃色萃取物。分別將萃取物用甲醇溶解，拌200～300目硅膠進(jìn)行硅膠柱層析，以石油醚-丙酮(體積比 9.5-0.5，9-1，8-2，7-3，6-4，5-5)、丙酮、甲醇，進(jìn)行梯度洗脫，將粗分所得組分經(jīng)過氯仿-甲醇(體積比同上)系統(tǒng)反復(fù)進(jìn)行梯度洗脫，共得到10個(gè)化合物。

1.4 鑒定方法 通過核磁共振(1H-NMR，13CNMR)等波譜技術(shù)分析鑒定，并與標(biāo)準(zhǔn)品熔點(diǎn)(MP)及薄層層析作對比，與文獻(xiàn)資料對照確定化合物的結(jié)構(gòu)。

2 結(jié)果

化合物Ⅰ～Ⅹ的結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物Ⅰ～Ⅹ的結(jié)構(gòu)

化合物Ⅰ:針狀結(jié)晶(石油醚-丙酮)，MP 230～232 ℃。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ 5.61(1H，t，J=2.5 Hz，H-15α)，5.22(1H，d，J=1.6 Hz，H-17)，5.02(1H，s，H-17)，4.86(1H，d，J=11.6 Hz，H-11α)，4.79 和 4.30(2H，ABd，J=11.9 Hz，H2-20)，4.65(1H，dd，J=11.5，3.3 Hz，H-1β)，4.43 和4.22(2H，dd，J=12.6，5.7 Hz，H2-6)，3.26(1H，d，J=11.8 Hz，H-9β)，2.84(1H，m，H-12α)，2.54(1H，s，H-5β)，2.26(1H，m，H-14α)，22.6、2.09、2.04和1.99(each3H，s，4 × OAc)，1.92(1H，d，J=13.1 Hz，H-2α)，1.86(1H，m，H-2α)，1.70(1H，d，J=13.0 Hz，H-14b)，1.61(1H，m，H-2b)，1.42(1H，dt，J=17.5，8.6 Hz，H-3α)，1.21(1H，dd，J=13.1，9.2 Hz，H-3b)，1.05(3H，s，Me-18)，0.96(3H，s，Me-19);13C-NMR(100 MHz，CDCl3)δ 76.4(C-1)，23.3(C-2)，39.9(C-3)，34.0(C-4)，48.9(C-5)，62.1(C-6)，172.3(C-7)，50.6(C-8)，39.0(C-9)，43.0(C-10)，68.4(C-11)，40.1(C-12)，34.9(C-13)，31.0(C-14)，82.9(C-15)，153.3(C-16)，111.4(C-17)，34.0(C-18)，23.8(C-19)，66.4(C-20)。OAc:170.5，169.6，169.5，168.9，21.3，21.2，21.1，21.1，20.9。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］基本一致，確定為 1α，6，11β，15β-四乙酰基-6，7-斷裂-7，20-內(nèi)酯-對映-貝殼杉-16-烯(rabdosinate)。

化合物Ⅱ:白色粉末狀物質(zhì)(丙酮)，Libermarm-Burchard反應(yīng)陽性，說明可能為三萜類化合物，不飽和度為7。1H-NMR(400 MHz，Acetone)δ 5.25(1H，s，H-12)，3.65(1H，m，H-2α)，3.48(1H，d，J=9.2 Hz，H-3β)，1.18(3H，s)，1.02(3H，s)，1.00(3H，s)，0.95(3H，s)，0.92(3H，s)，0.82(3H，s)，0.81(3H，s);13C-NMR(100 MHz，Acetone)δ47.6(C-1)，68.0(C-2)，83.1(C-3)，39.3(C-4)，55.3(C-5)，18.2(C-6)，33.6(C-7)，38.9(C-8)，48.0(C-9)，38.0(C-10)，23.3(C-11)，122.0(C-12)，144.14(C-13)，41.7(C-14)，27.5(C-15)，22.9(C-16)，46.7(C-17)，41.3(C-18)，45.9(C-19)，30.4(C-20)，34.2(C-21)，33.2(C-22)，29.3(C-23)，16.8(C-24)，16.5(C-25)，17.6(C-26)，25.4(C-27)，177.9(C-28)，32.7(C-29)，22.9(C-30)。上述數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［4］一致，鑒定該化合物為2α-羥基齊墩果酸。

化合物Ⅲ:白色粉末(氯仿)，MP 268～270℃，Libermarm-Burchard反應(yīng)陽性。1H-NMR(400 MHz，Acetone)δ 5.30(1H，brs，H-12)，3.93(1H，d，J=12.8 Hz，H-2α)，3.33(2H，d，J=5.6 Hz，H-3α)，2.64(1H，td，J=13.3，4.6 Hz，H-18)，1.36(3H，s)，1.22(3H，s)，1.00(3H，s)，0.98(3H，s)，0.95(3H，s)，0.86(3H，s)，0.77(d，J=11.6 Hz，3H);13CNMR(100 MHz，Acetone)δ41.7(C-1)，65.4(C-2)，78.6(C-3)，39.9(C-4)，48.0(C-5)，18.0(C-6)，32.9(C-7)，41.4(C-8)，47.4(C-9)，38.0(C-10)，23.8(C-11)，127.9(C-12)，138.8(C-13)，42.2(C-14)，26.4(C-15)，26.11(C-16)，48.0(C-17)，53.6(C-18)，72.4 C-19)，42.5(C-20)，25.5(C-21)，37.6(C-22)，29.4(C-23)，16.5(C-24)，15.9(C-25)，15.7(C-26)，23.4(C-27)，178.3(C-28)，26.4(C-29)，15.6(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］對照基本一致，確定化合物為 2α，3α，19-三羥基-12-烯-28-烏索酸(2α，3α，19-trihydroxy-urs-12-en-28-oic acid)。

化合物Ⅳ:白色粉末(丙酮)，MP 208～210℃，Libermarm-Burchard反應(yīng)陽性。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ0.84(3H，s)，0.94(3H，s)，1.02(3H，s)，1.14(3H，s)，1.22(3H，s)，1.36(3H，s)，0.96(3H，d，J=5.6 Hz，Me-30)，4.12 和 4.18(each1H，ABd，J=12.0 Hz，H-1a/b)，5.27(1H，brs，H-12)，5.39(1H，brs，H-3);13C-NMRδppm(100 MHz，CDCl3)60.2(C-1)，155.7(C-2)，133.3(C-3)，41.4(C-4)，63.1(C-5)，17.1(C-6)，34.1(C-7)，41.6(C-8)，41.7(C-9)，50.4(C-10)，26.1(C-11)，128.1(C-12)，138.9(C-13)，41.8(C-14)，29.3(C-15)，26.5(C-16)，47.4(C-17)，53.8(C-18)，72.3(C-19)，43.0(C-20)，26.3(C-21)，37.6(C-22)，29.5(C-23)，21.0(C-24)，18.3(C-25)，18.1(C-26)，25.5(C-27)，178.3(C-28)，26.3(C-29)，15.7(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道的hyptadienic acid一致。

化合物Ⅴ:無色針狀結(jié)晶(石油醚-丙酮)，易溶于氯仿、丙酮及甲醇等有機(jī)溶劑，MP 240～242℃。1H-NMR(400 MHz，MeOD)δ 5.26(1H，s，H-6α)，5.17 和 5.16(2H，s，H2-17)，4.96(1H，t，J=2.7 Hz，H-15β)，4.70(1H，dd，J=11.4、6.1 Hz，H-1β)，4.16(1H，m，H-11β)，3.90 和 3.82(each 1H，ABd，J=8.9 Hz，H2-20)，1.05(3H，s，Me-18)，1.00(3H，s，Me-19);13C-NMR(100 MHz，MeOD)δ77.1(C-1)，23.4(C-2)，36.5(C-3)，31.1(C-4)，50.1(C-5)，107.8(C-6)，175.6(C-7)，53.6(C-8)，45.1(C-9)，52.5(C-10)，62.4(C-11)，44.0(C-12)，37.5(C-13)，35.0(C-14)，76.2(C-15)，156.6(C-16)，101.5(C-17)，31.9(C-18)，22.0(C-19)，72.4(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］相一致，確定該化合物為 epinodosinol。

化合物Ⅵ:白色粉末(石油醚)，MP 75～76℃;1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ0.80(3H，s)，0.83(3H，s)，0.87(3H，s)，0.88(3H，s)，0.89(3H，s)，0.91(3H，s)，0.98(3H，s)，1.01(3H，s)，1.07(3H，s)，4.50(1H，dd，J=5.6、6.8 Hz，H-3)，5.12(1H，s，H-12);13C-NMRδppm(100 MHz，CDCl3)38.5(C-1)，25.2(C-2)，80.6(C-3)，37.7(C-4)，55.3(C-5)，18.3(C-6)，32.9(C-7)，40.0(C-8)，47.6(C-9)，36.8(C-10)，23.2(C-11)，124.3(C-12)，139.6(C-13)，42.1(C-14)，23.7(C-15)，26.6(C-16)，33.7(C-17)，59.0(C-18)，39.7(C-19)，39.6(C-20)，31.3(C-21)，41.6(C-22)，28.1(C-23)，16.9(C-24)，15.6(C-25)，16.9(C-26)，23.2(C-27)，28.7(C-28)，17.5(C-29)，21.3(C-30)，173.6(C-1’)，34.9(C-2’)，31.9(C-3’)，29.2 ～ 19.7(C-4’～ C-13’)，28.1(C-14’)，22.6(C-15’)，14.0(C-16’)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道的α-香樹脂醇棕櫚酸酯(α-amyrin palmitate)一致。

化合物Ⅶ:白色粉末(甲醇)，MP 270～272℃，Libermarm-Burchard反應(yīng)陽性。1H-NMR(400 MHz，Acetone)δ 5.24(1H，s，H-12)，3.93(1H，d，J=10.9 Hz，H-2β)，3.31(1H，s，H-3β)，2.24(1H，d，J=11.5 Hz，H-18)，1.14(s，3H)，1.08(3H，s)，0.99(3H，s)，0.98(3H，s)，0.89(d，J=6.5 Hz，3H)，0.85(3H，s)，0.83(3H，s);13C-NMR(100 MHz，Acetone)δ39.7(C-1)，65.4(C-2)，78.5(C-3)，38.9(C-4)，47.4(C-5)，17.8(C-6)，32.95(C-7)，39.1(C-8)，36.7(C-9)，37.9(C-10)，24.1(C-11)，125.3(C-12)，138.5(C-13)，42.0(C-14)，27.8(C-15)，23.1(C-16)，47.9(C-17)，52.9(C-18)，39.7(C-19)，38.1(C-20)，30.6(C-21)，37.0(C-22)，30.5(C-23)，23.3(C-24)，16.0(C-25)，16.7(C-26)，20.6(C-27)，177.8(C-28)，33.5(C-29)，16.9(C-30)。將以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道值相比較，確定該化合物為2α，3α-二羥基烏蘇-12-烯-28-酸。

化合物Ⅷ:無色針狀結(jié)晶(氯仿)，易溶于氯仿、丙酮等溶劑，MP 250～252 ℃。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ6.08(1H，s，H-17a)，5.57(1H，s，H-17b)，5.13(1H，dd，J=9.9、5.1 Hz，H-1β)，4.94(1H，d，J=12.4 Hz，H-20a)，4.38(1H，d，J=12.4 Hz，H-20b)，3.97(1H，dd，J=17.9、10.0 Hz，H-14α)，3.75(2H，brs，H2-6)，3.10(1H，dd，J=9.5、4.7 Hz，H-13α)，2.67(1H，ddd，J=13.8、9.5、7.2 Hz，H-12α)，2.62(1H，dd，J=4.8、12.0 Hz，H14β)，2.55(1H，dd，J=9.2、14.2 Hz，H-12β)，2.04(3H，s，OAc)，1.96(1H，d，J=12.7 Hz，H-5β)，1.88(2H，m，H-2β 和 H-12α)，1.35-1.27(2H，m，H2-3)，1.07(3H，s，Me-18)，0.88(3H，s，Me-19);13CNMR(100 MHz，CDCl3)δ76.4(C-1)，24.3(C-2)，39.2(C-3)，33.9(C-4)，52.8(C-5)，59.7(C-6)，170.2(C-7)，58.0(C-8)，46.6(C-9)，44.2(C-10)，65.9(C-11)，41.6(C-12)，34.2(C-13)，29.3(C-14)，200.7(C-15)，149.6(C-16)，119.8(C-17)，33.8(C-18)，23.9(C-19)，67.5(C-20)，OAc169.72，21.5。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］對照，確定化合物為maoyecrystal E。

化合物Ⅸ:無色針狀結(jié)晶(氯仿-甲醇)，溶于丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑。1H NMR(400 MHz，MeOD)δ5.15(1H，s，H-17 a)，5.12(1H，d，J=2.3 Hz，H-17 b)，4.89(1H，d，J=2.3 Hz，H-14α)，4.54(1H，s，H-6α)，4.33 和 4.03(each1H，d，J=10.3 Hz，H-20)，4.28(1H，d，J=7.7 Hz，Glu 端基)，3.60(1H，t，J=8.0 Hz，H-1β)，1.11(3H，s，H-18)，0.99(3H， s，-19);13C-NMR(100 MHz，MeOD)δ83.7(C-1)，27.5(C-2)，38.3(C-3)，32.9(C-4)，57.6(C-5)，72.1(C-6)，98.4(C-7)，52.5(C-8)，44.6(C-9)，40.7(C-10)，17.8(C-11)，31.9(C-12)，45.6(C-13)，74.2(C-14)，70.2(C-15)，159.12(C-16)，108.3(C-17)，31.6(C-18)，20.6(C-19)，61.4(C-20)，103.33(C’-1)，74.4(C’-2)，77.1(C’-3)，70.8(C’-4)，76.3(C’-5)，63.0(C’-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］對照基本一致，確定該化合物為enmenol-glucoside。

化合物Ⅹ:無色針狀結(jié)晶(氯仿-甲醇)，MP 248～250℃;易溶于丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑。1HNMR(400 MHz，Acetone)δ6.21 和5.51(each1H，s，H2-17)6.03 ～ 5.99(2H，brs，OH)，5.21(1H，s，H-14α)，4.24 和 3.98(1H，ABd，J=10.2、1.4 Hz，H2-20)，3.50(1H，t，J=5.0 Hz，H-1β)，3.01(1H，d，J=9.8 Hz，H-6)，1.09(3H，s，H-18)，1.06(3H，s，H-19);13C-NMR(100 MHz，Acetone)δ74.0(C-1)，30.4(C-2)，38.7(C-3)，33.4(C-4)，60.0(C-5)，72.9(C-6)，97.4(C-7)，62.9(C-8)，54.0(C-9)，41.1(C-10)，21.4(C-11)，30.8(C-12)，43.3(C-13)，72.73(C-14)，208.2(C-15)，152.7(C-16)，118.2(C-17)，32.4(C-18)，19.6(C-19)，62.20(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］對照，確定該化合物為冬凌草甲素(oridonol)。

3 討論

通過波譜技術(shù)分析鑒定，并與標(biāo)準(zhǔn)品熔點(diǎn)及薄層層析作對比及文獻(xiàn)資料對照，確定化合物的結(jié)構(gòu)，鑒定了從尾葉香茶菜葉中分離到的10個(gè)化合物。化合物Ⅰ～Ⅸ均為首次從尾葉香茶菜中得到，化合物冬凌草甲素(Ⅹ)從香茶菜屬植物中曾分離得到。

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