潰瘍性結腸炎患者外周血 T細胞及腸上皮細胞中 CD98的表達

張建立,馮百歲

1)鄭州大學第一附屬醫院消化內科 鄭州 450052 2)鄭州市第二人民醫院消化內科鄭州 450052

(2010-01-12收稿 責任編輯 徐春燕)

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease,IBD)是一種原因不明的慢性非特異性腸道炎癥性疾病,包括潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病。免疫紊亂在 IBD發病中起重要作用。CD98在胃腸道組織中高水平表達,可能是炎癥發生和持續化的重要因素之一[1]。作者分別采用流式細胞術和免疫組織化學方法檢測 UC患者外周血 T細胞和腸上皮細胞中 CD98的表達,報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 收集 2008年 8月至 2009年 11月鄭州大學第一附屬醫院門診和住院 UC患者 60例,診斷標準參照文獻[2]。采用 Sutherland疾病活動指數[2]均診斷為初發型活動性。采用 Truelove和Witts潰瘍性結腸炎分度[2],分為中重度 UC組 30例,輕度 UC組 30例,其中男性分別為 14和 13例,女性分別為 16和 17例,年齡分別為 18～50(36.2±8.5)歲和21～49(38.2±6.8)歲。另選 30例健康志愿者為對照組,其中男 13例,女 17例,年齡 18～45(31.4±9.2)歲。3組間年齡及性別分布差異無統計學意義(F=2.540,χ2=0.956,P均 ＞0.05)。上述對象受試前 3個月內均未接受氨基水楊酸、糖皮質激素或免疫抑制劑治療,未合并其他自身免疫性疾病、腫瘤、病毒性肝炎或 HIV感染,并均簽訂知情同意書。

1.2 主要試劑 小鼠抗人 CD98單克隆抗體、PE標記的羊抗小鼠抗體和兔抗人 CD98單克隆抗體購于 Santa Cruz公司,FITC標記的小鼠抗人 CD3抗體和紅細胞裂解液購于 Becton-Dickinson公司,免疫組織化學試劑盒和濃縮型 DAB顯色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 標本采集 分別采集 UC患者和對照組外周靜脈血 1 mL加入抗凝管中;結腸鏡下取 UC患者病灶處腸黏膜活檢,甲醛溶液固定。

1.4 T細胞 CD98陽性細胞百分率測定 外周血樣本加入紅細胞裂解液,離心并洗滌后,再分別加入小鼠抗人 CD98單克隆抗體、PE標記的羊抗小鼠抗體和 FITC標記的小鼠抗人 CD3抗體,利用流式細胞儀對樣本進行檢測。選用波長 488 nm的氬離子激光,以“門技術”劃定淋巴細胞,測定每個標本門內 10 000個細胞。測定結果用 Cellquest 3.0軟件(美國 Becton-Dickinson公司)進行雙色熒光參數的獲取和分析。記錄 CD3和 CD98雙陽性細胞占 CD3陽性細胞數的百分比,即為 T細胞中 CD98陽性細胞的百分率。

1.5 腸上皮細胞中 CD98的檢測 甲醛溶液固定后的腸黏膜組織,脫水制成蠟塊。切片后烤片、脫蠟、水化及抗原修復,加山羊血清封閉液,再先后加入兔抗人 CD98單克隆抗體、生物素化二抗及試劑SABC,DAB顯色,蘇木素染色,鹽酸乙醇分化,脫水、封片并鏡檢。選擇 10個不重復視野(×400)觀察,每個視野計數 50個細胞。參照文獻[3]判定結果。陽性細胞百分比:～25%計 0分,～50%計 1分,～75%計 2分,＞75%計 3分;著色強度:輕度著色計 1分,中度著色計 2分,重度著色計 3分。以上兩項得分之和≥3分為陽性,＜3分為陰性。

1.6 統計學處理 所得數據用 SPSS 16.0進行分析。對照組、輕度 UC組和中重度UC組外周血T細胞 CD98表達的比較采用單因素方差分析和 LSD-t檢驗,其相關性采用 Spearman秩相關分析;輕度 UC組和中重度 UC組腸上皮細胞 CD98表達的比較采用 χ2檢驗。檢驗水準 α=0.05。

2 結果

2.1 外周血 T細胞中 CD98的表達 中重度 UC組、輕度 UC組和對照組T細胞 CD98陽性細胞的百分率分別為(43.40±5.09)%、(32.45±6.71)%和(28.42±4.31)%,差異有統計學意義(F=60.501,P＜0.001),3組間兩兩比較,差異均有統計學意義(P均 ＜0.05)。T細胞 CD98陽性細胞的百分率與UC的嚴重程度呈正相關(rs=0.739,P＜0.001)。

2.2 腸上皮細胞中 CD98的表達 見圖 1。中重度UC組病灶部位腸上皮細胞中 CD98的表達(20/30,66.7%)高于輕度 UC組(11/30,36.7%)(χ2=5.406,P=0.020)。

圖 1 輕度 UC(A)和中重度UC(B)腸上皮細胞 CD98的表達(SABC,×400)

3 討論

IBD是一種病因和發病機制尚未完全明確的免疫相關性疾病,大量炎癥細胞浸潤并伴有免疫功能紊亂是其主要特征。在對 IBD發病機制的研究中,包括整合素在內的黏附分子參與的免疫反應和炎癥過程是當前研究的熱點之一[4]。CD98是一個發現和研究時間不長的白細胞分化抗原,目前認為它有調節 β1整合素、氨基酸轉運及細胞融合與增殖等功能[5]。研究[6]發現,活化的 CD98上調 β1整合素的表達及與胞外配合基的親和力,引起細胞黏附增加。另外,CD98可以使 β1整合素聚集為高密度的復合物,導致整合素活化[7]、整合素樣信號傳導和非貼壁依賴性生長[1],促進腸道炎癥的發生。

作者發現,外周血 T細胞中 CD98的表達與 UC的發生有關,并與其嚴重程度呈正相關。因此,可以嘗試檢測外周血 T細胞 CD98的表達來輔助診斷UC及其嚴重程度。此外,研究結果還顯示,輕度UC組腸上皮細胞中 CD98的表達亦低于中重度 UC組。

綜上所述,CD98在外周血 T細胞和腸上皮細胞中的表達可反映 UC的病情變化,CD98可能參與了 UC的發病過程,并且與疾病的嚴重程度相關。

[1]Kim SM,Hahn JH.CD98 activation increase surface expression and clustering ofβ1 integrins in MCF-7 cells through FAK/Src-and cytoskeleton-independent mechanism[J].J Exp Mol Med,2008,40(3):261

[2]中華醫學會消化分會炎癥性腸病協作組.中國炎癥性腸病診斷治療規范的共識意見[J].中華內科雜志,2008,47(1):73

[3]Mattern J,Koomagi R,Volm M.Biological characterization of subgroups of squamous cell lung carcinomas[J].Clin Cancer Res,1999,5(6):1459

[4]Ghosh S,Panaccione R.Anti-adhesion molecule therapy for inflammatory bowel disease[J].Therap Adv Gastroenterol,2010,3(4):239

[5]Devés R,Boyd CA.Surface antigen CD98(4F2):not a single membrane protein,but a family of proteins with multiple functions[J].J Membr Biol,2000,173(3):165

[6]Fenczik CA,Sethi T,Ramos JW,et al.Complementation of dominant suppression implicates CD98 in integrin activation[J].Nature,1997,390(6655):81

[7]Rintoul RC,Buttery RC,Mackinnon AC,et al.Cross-linking CD98 promotes integrin-like signaling and anchorageindependent growth[J].Mol Biol Cell,2002,13(8):2841