LN和LN-R在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中表達的臨床意義*

賈海英， 張 濤， 山艷春， 莫天石， 王繼群

(暨南大學 1 附屬第一醫院耳鼻咽喉頭頸外科， 2 醫學院耳鼻咽喉科，廣東 廣州 510632；3 澳門仁伯爵醫院耳鼻咽喉科)

LN和LN-R在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中表達的臨床意義*

賈海英1△， 張 濤1， 山艷春2， 莫天石3， 王繼群2

(暨南大學1附屬第一醫院耳鼻咽喉頭頸外科，2醫學院耳鼻咽喉科，廣東 廣州 510632；3澳門仁伯爵醫院耳鼻咽喉科)

目的探討層黏連蛋白(LN)及其受體(LN-R)在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中表達的臨床意義。方法用免疫組化法檢測137例鼻腔鼻竇惡性腫瘤、78例癌旁組織和37例對照組織中LN和LN-R的表達。結果LN在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中陽性表達率(13.87%)明顯低于癌旁組(87.18%)和對照組(72.97%)(P<0.01)，LN-R在鼻內翻性乳頭狀瘤中的陽性表達率(76.47%)明顯高于鼻腔鼻竇惡性腫瘤(28.47%)、癌旁組織(10.26%)和鼻息肉或囊腫組織(10.0%)。LN-R在鼻腔鼻竇惡性上皮腫瘤和惡性軟組織腫瘤中的表達存在顯著差異(P<0.01)，而LN的表達無顯著差異(P>0.05)。結論LN的減少為惡性腫瘤的侵襲和轉移提供了條件，在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中LN的檢測將為臨床治療提供可靠依據。LN-R具有組織特異性，需根據不同病理類型進行深入研究。LN-R在鼻內翻性乳頭狀瘤中高表達，其機制有待進一步深入研究。

層黏連蛋白； 受體，層黏連蛋白； 鼻咽腫瘤

鼻腔鼻竇惡性腫瘤具有復雜性和多樣性的特點，現有手段很難從根本上減少其復發和轉移[1]。但如果能從分子水平上篩選出與鼻腔鼻竇惡性腫瘤發生發展密切相關的高危復發和死亡風險的生物學指標，臨床上就可以借此治療及評估預后。層黏連蛋白(laminin,LN)和層黏連蛋白受體(laminin receptor,LN-R)是目前研究較為廣泛與腫瘤侵襲和轉移相關的因素，但關于LN和LN-R與鼻腔鼻竇惡性腫瘤的相關性尚未得到證實，本研究將初步探討鼻腔鼻竇惡性腫瘤與LN、LN-R的相關性，借此探討鼻腔鼻竇惡性腫瘤的侵襲與轉移，用以指導鼻腔鼻竇惡性腫瘤臨床治療和評估預后。

材 料 和 方 法

1材料及試劑

病例資料選取廣州暨南大學附屬第一醫院和中山大學附屬腫瘤醫院經病理證實的石蠟標本，包括明確診斷的鼻腔鼻竇惡性腫瘤137例、癌旁組織78例和對照組37例。癌旁組織為鼻腔鼻竇惡性腫瘤術中切除安全緣，經病理證實未見腫瘤。其中病例組及對照組基本情況見表1。鼻腔鼻竇惡性腫瘤的組織來源復雜，有10余種之多，按照世界衛生組織(WHO)的腫瘤國際組織學分類可以將其分為3大類，即惡性上皮腫瘤、惡性軟組織腫瘤和惡性骨腫瘤。收集病例包括惡性上皮腫瘤78例，惡性軟組織腫瘤55例及4例惡性骨腫瘤。

表1 患者一般情況

LN即用型抗體、SP及PV9000試劑盒均購于北京中山金橋生物有限公司。LN-R濃縮型抗體，購于深圳晶美生物技術有限公司。

2方法

2.1免疫組織化學染色 組織石蠟厚4 μm切片，經脫蠟至水化，微波爐加熱進行抗原修復，正常血清封閉清除非特異性染色后，LN抗體按SP試劑盒、LN-R抗體按PV9000試劑盒說明分別進行染色，DAB顯色，蘇木素復染。以PBS替代Ⅰ抗作為陰性對照。實驗中LN-R稀釋濃度為1∶35。

2.2結果判定標準 LN陽性表達位于基底膜，陽性染色為棕黃色線性或碎片狀表達，根據瘤團周圍基底膜線性染色的完整性分為[2]：線形結構<5%，基本沒有形成基底膜，為“-”；線形結構5%-25%，基底膜呈細小條索狀，為“+”；線狀結構25%-75%，基底膜呈間斷性線狀，為“++”；線狀結構 >75%，幾乎有完整基底膜，為“+++”。

LN-R陽性部位為細胞膜，部分胞漿也出現棕黃色顆粒，染色分級：無表達或腫瘤細胞陽性數小于5%為陰性(-)；陽性細胞數大于5%且小于或等于25%為弱陽性(+)；陽性細胞數大于25%且小于或等于75%為中等強度陽性(++)；陽性細胞數大于75%為強陽性(+++)。

3統計學處理

使用統計軟件包SPSS 12.0 for Windows 進行卡方檢驗。

結 果

LN的陽性表達位于基底膜，其在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中的表達連續性間斷或呈碎片狀表達，而在正常黏膜和息肉的上皮基底部可見完整表達，見圖1。LN在鼻腔鼻竇惡性腫瘤、癌旁及對照組織中的表達見表2，LN在鼻息肉或囊腫、內翻性乳頭狀瘤中的表達無顯著差異(P>0.05)，因此可將其合并為對照組進行統計分析，LN在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中陽性(+～+++)表達率(13.87%)明顯低于癌旁組(87.18%)和對照組(72.97%)，其表達具有顯著差異(P<0.01)。

Figure 1. The expression of LN in NPMT(A), para-cancer(B) and non-cancer tissues(C)(immunohistochemical staining, SP).A:+,×400; B:+++,×100；C:+++,×100.

表2 LN在鼻腔鼻竇惡性腫瘤、癌旁及對照組中的表達

LN-R的陽性部位為細胞膜，其表達見圖2。LN-R的表達見表3，LN-R在鼻息肉或囊腫及內翻性乳頭狀瘤中的表達存在顯著差異(P<0.01)，不能將2組標本合并同類項，因此需將對照組分成鼻息肉或囊腫組和內翻性乳頭狀瘤組進行分析。LN-R在內翻性乳頭狀瘤中的陽性(+～+++)表達率(76.47%)明顯高于鼻腔鼻竇惡性腫瘤(28.47%)、癌旁組織10.26%和鼻息肉或囊腫組織(10.00%)，鼻腔鼻竇惡性腫瘤組中的陽性表達率也高于癌旁組和鼻息肉或囊腫組。LN-R在鼻腔及鼻竇惡性腫瘤組、癌旁組、息肉或囊腫和內翻性乳頭狀瘤中的表達存在明顯差異(P<0.01)。

表3 LN-R在鼻腔鼻竇惡性腫瘤、癌旁及對照組中的表達

LN、LN-R在鼻腔鼻竇惡性上皮腫瘤和軟組織腫瘤中的表達見表4,可知LN在鼻腔鼻竇惡性腫瘤中的表達無顯著差異(P>0.05)，而LN-R的表達有顯著差異(P<0.01)，LN在惡性上皮腫瘤的陽性表達率(62.50%)明顯高于惡性軟組織腫瘤(19.60%)。

Figure 2. The expression of LN-R in NPMT(A), para-cancer(B) and invert papilloma(C)(immunohistochemical staining, PV9000).A:+++,×200; B:+++,×200；C:+++,×200.

表4 LN與LN-R在不同病理類型鼻腔鼻竇惡性腫瘤中的表達

討 論

LN是由Timple等從鼠EHS肉瘤中分離出的基質，具有細胞黏附、調節細胞生長和分化、促進細胞遷移、連接基膜中的大分子成分等功能，是細胞外基質(extracellular matrix，ECM)的重要組成成分之一，在基底膜的形成和穩定中起重要作用。Pellegrini等[3]發現在大多數侵潤型乳腺癌LN表達缺失，而在正常組織和良性病變中高表達。LN-R是許多不同細胞表面分子的總稱，目前研究認為LN-R是一種與腫瘤侵襲轉移密切相關的跨膜受體，能與基底膜中的主要成分LN結合，促進多種蛋白水解酶的分泌，促進基底膜的降解[4]。LN-R根據與LN作用方式的不同可將LN-R分為整合素和非整合素2大家族[5]。Liotta等[6]發現侵潤性乳腺癌分離出的LN-R明顯高于良性硬化性乳腺病患者，從而推論高轉移能力的細胞表面的LN-R比較多。

本研究發現LN在鼻惡性腫瘤的基底膜中結構稀疏，或者變薄、斷裂，甚至僅有少量殘留，在鼻惡性腫瘤的陽性率表達明顯低于癌旁組和對照組。這可能是由于生長活躍的鼻腔鼻竇惡性腫瘤細胞合成、分泌LN的能力較一般良性腫瘤細胞下降，或與其分泌蛋白水解酶的水平高有關，從而使生長活躍的基底細胞穿透基底膜進入基質而發生癌變，認為LN低表達的鼻腔鼻竇惡性腫瘤具有更強的侵襲和轉移性，具有高復發的風險，因此在臨床治療中需要采取更激進的治療措施，例如擴大手術范圍，手術前后增加放療劑量或增加化療等治療手段，并且建議縮短隨訪周期、增加隨訪次數，盡早發現復發及轉移。實驗中發現LN-R在鼻息肉和囊腫及內翻性乳頭狀瘤中的表達存在差異，因此，不能將2組標本合并同類項為對照組，需對此進行分組討論。LN-R在鼻內翻性乳頭狀瘤中的陽性表達率明顯高于鼻腔鼻竇惡性腫瘤、癌旁組和鼻息肉或囊腫組，認為LN-R可能在鼻內翻性乳頭狀瘤中發揮重要作用，其機制仍待進一步深入研究。LN在不同病理類型的鼻腔鼻竇惡性中的表達無顯著差異，而LN-R的表達有顯著差異，LN-R具組織特異性，這可能因為LN-R分類較多，可能不同家族成員與病理類型惡性腫瘤有一定相關性，因此以后關于LN-R的研究需根據不同病理類型進行，關于LN-R在不同病理類型的鼻腔鼻竇惡性腫瘤如何發揮作用仍待進一步研究。

目前，關于鼻腔鼻竇惡性腫瘤的分子學研究還剛剛起步，關于LN和LN-R與鼻腔鼻竇惡性腫瘤的相關性研究，尤其是對不同病理類型及LN-R不同家族成員的深入研究將有助于明確其生物學機制，了解鼻腔鼻竇惡性腫瘤侵襲和轉移及鼻內翻性乳頭狀瘤的機制，篩選與腫瘤的侵襲和轉移相關的指標，將為鼻腔鼻竇惡性腫瘤制定治療方案和評估預后以及預防鼻內翻性乳頭狀瘤提供重要依據。

[1] 練 兵，王繼群，金 琳.靶向PCNA基因的小干擾RNA對鼻咽癌CNE2細胞周期的影響[J].中國病理生理雜志，2009，25(8)：1533-1537。

[2] 張健康，李曉麗，李亮成，等. Ⅳ型膠原、層粘連蛋白、纖維粘連蛋白在胃癌中表達的意義[J].山西醫科大學學報,2000,31(2):114-118.

[3] Pellegrini R,Martignone S,Tagliabue E,et al. Prognostic significance of laminin production in relation with its receptor expression in human breast carcinomas[J]. Breast Cancer Res Treat, 1995, 35(2):195-199.

[4] Ardini E, Sporchia B, Pollegioni L,et al. Identification of a novel function for 67-kDa laminin receptor: increase in laminin degradation rate and release of motility fragments[J].Cancer Res, 2002, 62(5):1321-1325.

[5] Colognato H, Yurchenco PD. Form and function: the laminin family of heterotrimers [J].Dev Dyn, 2000, 218(2):213-234.

[6] Liotta LA, Rao CN, Barsky SH. Tumor invasion and extracellular matrix[J].Lab Invest, 1983, 49(6):636-649.

ClinicalsignificanceofLN/LN-Rexpressioninnasalandparanasalsinusmalignanttumor

JIA Hai-ying1, ZHANG Tao1, SHAN Yan-chun2, MO Tian-shi3, WANG Ji-qun2

(1DepartmentofOtolaryngology-HeadandNeckSurgery,TheFirstAffiliatedHospital,2DepartmentofOtolaryngology,SchoolofMedicine,JinanUniversity,Guangzhou510632,China;3CentroHospitalarCondeDeS.Januario,Macau,China.E-mail:jiahaiying79@126.com)

AIM: To study the clinical significance of laminin/laminin receptor(LN/LN-R) expression in nasal and paranasal sinus malignant tumor(NPMT).METHODSThe immunohistochemical technique was used to detect the expression of LN and LN-R in 137 cases of NPMT, 78 cases of para-cancer tissues and 37 cases of non-cancer tissues.RESULTSThe positive rate of LN in NPMT(13.87%) was significantly lower than that in para-cancer tissues(87.18%) and non-cancer tissues(72.97%), and the positive rate of LN-R in nasal inverting papilloma(76.47%) was significantly higher than that in NPMT(28.47%), para-cancer tissues(10.26%) and nasal polypus and cyst tissues(10.0%). A significant difference of LN-R expression, but not LN, between endepidermis and soft tissue of the NPMT was observed(P<0.01).CONCLUSIONDecrease in LN expression provides the essential condition for the invasion and metastasis of the malignant tumor. Determining the expression level of LN in NMPT will be helpful for evaluation of tumor development and clinical management. High expression of LN-R only in the nasal inverting papilloma indicates that LN-R may play different roles in different pathotypes of NPMT.

Laminin; Receptors, laminin; Nasopharyngeal neoplasms

R739.6

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2011.02-014

1000-4718(2011)02-0284-04

2010-05-21

2010-07-09

廣東省自然科學基金資助項目(No. 9451063201003299)；澳門科研基金委員會資助項目(No.029/2009/A)

△通訊作者 Tel:020-38688123；E-mail: jiahaiying79@126.com