黃藤合劑的急性毒性和藥效學研究

范念斯, 楊軍英, 趙青青

(河南師范大學 生命科學學院 省部共建細胞分化調控重點實驗室 河南 新鄉 453007)

黃藤合劑的急性毒性和藥效學研究

范念斯, 楊軍英, 趙青青

(河南師范大學 生命科學學院 省部共建細胞分化調控重點實驗室 河南 新鄉 453007)

用熱板法和扭體法研究黃藤合劑鎮痛效果，測定毛細血管通透性和炎癥組織PGE2含量以研究其抗炎活性及機理.小鼠灌胃給予黃藤合劑最大給藥量76.8 g/kg后，7天內未見明顯異常變化.黃藤合劑8 mg/kg即能明顯提高小鼠對熱刺激的痛閾值，減少醋酸引起的扭體次數，降低毛細血管通透性，減少炎癥組織PGE2的含量.16 g/kg，還能推遲疼痛反應出現的時間，延長潛伏期.黃藤合劑具有鎮痛抗炎作用，最大給藥量為76.8 g/kg，其作用機理可能與減少PGE2含量有關.

黃藤合劑； 鎮痛； 抗炎

0 引言

黃藤又稱雷公藤、斷腸草、紅藥等，是衛茅科雷公藤屬植物雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook.F.)的根及根莖，性味苦，有大毒[1].其主要成分能夠抑制炎性因子的表達，具有抑制炎癥反應和免疫作用，臨床上用于治療各種自身免疫性疾病，療效顯著[2]，但由于毒副作用較大而限制了其廣泛應用.國外研究黃藤毒性作用的文獻較多，而減毒方面的研究很少.國內研究主要集中于通過中藥配伍對抗黃藤的毒副作用[3-4].黃藤合劑是以雷公藤為主藥，輔以當歸、紅花等中藥制成的酒劑，臨床用于治療風濕和類風濕性關節炎.為評價其安全性和有效性，本文探討其鎮痛抗炎作用和毒性，為臨床應用提供實驗依據.

1 材料

1.1實驗動物

昆明種小鼠，20±2.0 g，由河南師范大學實驗動物中心提供.將小鼠隨機分組，分別為生理鹽水對照組(NS組)，阿司匹林陽性對照組，黃藤合劑組.黃藤合劑組的給藥劑量分別為：4 g/kg，8 g/kg，16 g/kg.

1.2藥物與試劑

黃藤合劑：市中醫院制劑室制備.規格：250 mL，每10 mL含生藥2.0 g， 47°高粱酒的含量為15%(V/V).藥物在給藥前水浴濃縮，去掉部分水分后，再用47°高粱酒配制成每10 mL含生藥8 g 的濃縮液，4 ℃冰箱保存.給藥前稀釋成所需濃度.阿司匹林腸溶片：陜西白鹿制藥廠生產，25 mg/片.醋酸、角叉菜膠、伊文思藍、氫氧化鉀、甲醇等.

1.3實驗器材

721分光光度計(上海第三分析儀器廠)；800型電動離心沉淀器；電熱恒溫水浴鍋；電熱真空干燥箱等.

2 方法與結果

2.1黃藤合劑的急性毒性實驗

黃藤合劑水浴蒸發去醇后，45 ℃干燥后加蒸餾水稀釋至最大濃度.取小鼠20只，給藥前禁食14 h.按0.04 mL/g劑量一次性于早晨8：00灌胃給藥.給藥當天動物精神不振，聳毛、蜷縮，進食減少，次日恢復正常.給藥后觀察7 d，小鼠進食、大、小便、呼吸、體重等均無明顯異常變化，無一死亡.計算小鼠的最大給藥量為76.8 g/kg，相當于60 kg體重成人每日用量的400倍.在小鼠灌胃給予最大體積最大濃度藥物的情況下，未出現動物死亡，推測該藥可能測不出半數致死量(LD50).

2.2熱板法

取雌鼠50只，篩選出舔后足時間在 5～30 sec之間且不跳躍的小鼠作為合格鼠.灌胃給藥，每天一次，連續6 d,末次給藥后，于55± 0.5 ℃測定其痛閾值.結果表明，黃藤合劑8 g/kg 和16 g/kg分別能提高小鼠60 min 和30 min痛閾值，與正常組相比有顯著性差異.

表1 黃藤合劑對小鼠熱刺激的影響

注：和NS組比較，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.3扭體法

取小鼠50只，雌雄各半.末次給藥后45 min，腹腔注射0.8%的醋酸0.01 mL/g.記錄扭體反應出現的時間和20 min內的扭體次數.黃藤合劑8 g/kg和16 g/kg能減少小鼠的扭體次數，且黃藤合劑16 g/kg還可以延長潛伏期，抑制疼痛反應的出現，與正常組相比有顯著性差異.

表2 黃藤合劑對小鼠扭體反應的影響

注：和NS組比較，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.4對角叉菜膠致小鼠足腫的影響

取小鼠50只，雌雄各半.末次給藥后45 min，給每只小鼠左后足皮下注射1%的角叉菜膠20 mg/kg，4 h后處死，沿踝關節剪下雙足，精密稱重，求腫脹度.將左足剪碎在2 mL生理鹽水溶液中浸泡1 h后，3 000 rpm離心15 min，取上清液400 μL，再加入KOH-CH3OH溶液于50 ℃水浴中異構化20 min，測定278 nm處OD值.炎性介質PGE2用堿水處理易脫水，異構化后變為PGB1，PGB1的紫外吸收波長為278 nm.通過測定PGB1的OD值可間接測得PGE2的含量.實驗結果表明，黃藤合劑8 g/kg和16 g/kg能抑制角叉菜膠引起的足腫脹，16 g/kg能明顯減少PGE2含量，與生理鹽水組相比有顯著性差異.

表3 黃藤合劑對角叉菜膠引起小鼠足腫脹和PGE2含量的影響

注：和NS組比較，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

2.5對毛細血管通透性的影響

取小鼠50只，雌雄各半.末次給藥45 min后，每只小鼠尾靜脈注射伊文思藍0.01 mL/g，20 min后處死小鼠，抽取腹腔液，取其上清液于590 nm處測OD值.伊文思藍靜脈注射時可以和血漿蛋白瞬間結合，通過比色法測得OD值來衡量腹腔滲出液的染料量以間接反映炎性滲出的多少.實驗結果表明，黃藤合劑8 kg/g和16 g/kg均能明顯降低毛細血管通透性，與NS組相比有顯著性差異.

表4 黃藤合劑對小鼠毛細血管通透性的影響

注：和NS組比較，**表示P<0.01,*表示P<0.05.

3 討論

雷公藤主要含有生物堿類、二萜類、三萜類、倍半萜及糖類成分[5]，其主要毒性物質是二萜類和生物堿[6].大量藥理及臨床研究已證明其提取物和某些成份具有免疫調節和抗炎作用[5]，其中雷公藤內脂和雷公藤多甙能抑制佐劑性關節炎組織IL-1和NO的生成[7-9].

本研究采用小鼠扭體法和熱板法兩種疼痛模型，觀察到黃藤合劑能明顯減少醋酸刺激所致扭體反應次數；顯著提高小鼠由熱刺激所致疼痛的痛閾值.小鼠熱板法在測定麻醉性鎮痛藥時較為常用，舔足底動作可能和高級中樞有關，提示黃藤合劑鎮痛部位可能在中樞.此外，本實驗結果表明，黃藤合劑能抑制角叉菜膠引起的足腫脹，減少PGE2的含量，還能降低毛細血管通透性，減輕炎性癥狀.

為了消除乙醇對實驗的影響，我們在急性毒性實驗時采取了水浴去醇，只反映藥物對動物的毒性.研究發現黃藤合劑灌胃給藥至76.8 g/kg時小鼠還未出現毒性死亡，大于臨床給藥量的100倍.而以單味黃藤制備的黃藤酊其LD50是9.646 g/kg.因此，黃藤合劑具有療效確切，毒副作用小，安全范圍大的優點，適于臨床應用，其毒性小可能與合理配伍有關.

[1] 劉曉輝，韓明向，劉健．雷公藤及其制劑治療類風濕性關節炎的研究進展[J]．安徽中醫學院學報，2003，22(5)：60-61．

[2] 胡南，呂曉雅，饒宗建．雷公藤內酯醇對MRL/lpr狼瘡鼠血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平的影響[J]．中外醫療，2010，29(18)：5-8．

[3] 施棟磊，朱華旭，潘林梅．中藥配伍雷公藤減毒作用的研究進展[J]．中國藥事，2009，23(11)：1136-1140．

[4] 張學梅，廉蓮，梁文波．復方雷公藤多苷的毒性研究[J]．遼寧中醫雜志，2003，32(7)：719-720．

[5] 吳寬裕，劉宏，鄭春姑．雷公藤藥物屬性及其臨床應用問題[J]．中國醫學創新，2009，6(33)：28-29．

[6] Duan H Q，Takaishi Y，Imakura Y，et al．Sesquiterpene alkaloids fromTripterygiumhypoglaucumandTripterygiumwilfordii:A new class of potent anti-HIV agents[J]．Nat Prod，2000，63(3)：357-361．

[7] 黃慧琴．雷公藤內酯醇對大鼠佐劑性關節炎的影響[J]．福建醫藥雜志，2008，30(1)：87-89．

[8] 楊琴，楊桂枝，王蕾，等．雷公藤多甙對佐劑性關節炎模型大鼠的作用[J]．四川解剖學雜志， 2006，14(1)11-12．

[9] 韋登明，焦效蘭，孟丹，等．雷公藤內酯醇抑制佐劑性關節炎組織NO生成的實驗研究[J]．浙江中醫雜志，2007，42(11)：661-663．

EffectsonAcuteToxicity，AnalgesiaandAnti-inflammatoryofHuangtengVinuminMice

FAN Nian-si, YANG Jun-ying, ZHAO Qing-qing

(KeyLaboratoryforCellDifferentiationRegulation,CollegeofLifeSciences,HenanNormalUniversity,Xinxiang453007,China)

Pain threshold and reaction were used to detect analgesic effect; blood capillary permeability and the content of PGE2in inflammatory tissue were used to study anti-inflammatory effect.The maximum dose of administratior without toxicity was 76.8 g/kg, 100 folds greater than that of adult of 60 kg body weight.Huangteng Vinum could obviously relieved the pain reaction induced by thermal stimulus as well as HAc in mice.It also could inhibit the swelling of foot and reduce the content of PGE2induced by carrageenan, and inhibit blood capillary permeability.Huangteng Vinum was safe administrated per o.s., and it possess analgesic and anti-inflammatory effect, which may relate to reduction of the content of PGE2.

Huangteng Vinum； analgesic； anti-inflammatory

R 962； Q 946.887

A

1671-6841(2011)03-0121-04

2010-10-04

河南師范大學科研啟動項目，編號0714；河南師范大學青年科學基金資助項目，編號525195.

范念斯(1990-)，女，本科，E-mail：fanyuling001@sina.com;通訊作者：楊軍英(1971-)，女，副教授，主要從事藥物活性研究.