液基細胞學和高危人乳頭瘤狀病毒DNA檢測對宮頸病變篩查的價值

張春莉，李冬琴，王延明

(1.延安大學附屬醫院病理科，陜西延安 716000;2.延安大學附屬醫院婦科，陜西延安 716000)

子宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤之一，現已明確人乳頭瘤狀病毒(human papilloma virus，HPV)感染是宮頸癌發生的主要病因［1-3］。巴氏涂片細胞學檢查是較早作為篩查宮頸癌的方法，但存在許多不足之處。近年液基制片技術的出現提高了宮頸癌及癌前病變的檢出率［4］，細胞學標本制片質量控制是準確發現病變的前提，它包括標本收集、涂片制備、固定染色等。此外，迄今發現的100多型HPV病毒中HPV16、18、31、33、35、39、45 等型持續感染可引起宮頸上皮內瘤變與宮頸癌。因此，高危人乳頭瘤狀病毒(high risk human papilloma virus，HR-HPV)檢測在宮頸癌篩查與防治中也具有重要作用。在此主要探討液基細胞學(thin prep liquid based cytology testing，TCT)和高危人乳頭瘤狀病毒DNA(HR-HPV DNA)檢測對宮頸病變篩查的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2009年10月至2010年10月期間在我院婦科門診就診的2876例患者為研究對象，年齡 19～62歲，平均(33.7 ±5.8)歲。排除急性生殖道炎癥、子宮頸錐切和子宮切除史。

1.2 方法

1.2.1 TCT 檢測 采用南京東大迪艾基因技術有限公司提供的試劑。用特制宮頸刷旋轉刷取宮頸管及外口的脫落細胞，并洗入細胞保存液中送檢，進行液基細胞學檢查。其診斷標準:采用2001 年TBS分類標準［5］宮頸病變分為良性反應性細胞改變、鱗狀上皮細胞異常和腺上皮細胞改變(AGUS，AIS)，其中以鱗狀上皮細胞異常為主，包括:①正常范圍(within normal limits，WNL);②意義不明的非典型鱗狀細胞(atypical squamous cells of undetermined significance，ASC-US);③低度鱗狀上皮內病變(low grade squamous intraepithelial leison，LSIL);④高度鱗狀上皮內病變(high grade squamous intraepithelial leison，HSIL);⑤鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)。以TCT≥ASCUS/AGUS為異常。

1.2.2 HR-HPV DNA檢測 TCT檢測異常的部分患者在外院進行HPV DNA檢測。HPV DNA檢測采用凱普公司提供的試劑，利用建立在導流雜交法上的低密度基因芯片技術。標本采集均使用一次性取樣器插入宮頸管順時針方向旋轉3～5圈，取宮頸管分泌物裝入特制保存液中，提取樣本中的DNA，通過聚合酶鏈反應擴增，放大病毒DNA的量。利用雙鏈堿基互補的原理，將DNA產物加入固定有不同HPV亞型探針的低密度基因芯片上，進行導流雜交，最終獲得特異性的雜交結果。檢測HPV亞型21種，其中包括高危型人乳頭瘤病毒 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型。檢測結果的診斷標準是:只有Biotin點和IC點同時顯色才能保證結果的真實性和有效性。

2 結果

2876例患者TCT檢查結果異常者183例，占6.36%，其中 ASC-US 104 例(56.83%)，LSIL 48 例(26.23%)，HSIL 21 例(11.48%)，SCC 10 例(5.46%)。183例TCT異常患者中有123例進行了HR-HPV DNA檢測并回報了結果，其中陽性87例，陽性率53.05%;其中ASC-US 29 例(27.88%)、LSIL 32 例(66.67%)、HSIL 17 例(80.95%)、SCC 9 例(90.00%)。

3 討論

子宮頸癌篩查的主要目的是早期發現、診斷和治療宮頸癌前病變(cervical intraepithelial neoplasias，CIN)和宮頸癌［6］。子宮頸癌預防最成功的策略在于落實了人口普查和發明了細胞學篩查方法。

細胞學檢查一直是篩查宮頸癌的主要手段，但因假陰性高易造成對宮頸癌及癌前病變的漏診。TCT由于技術上的改進，使宮頸異常細胞的檢出率明顯提高，本組資料中2876例患者TCT檢查結果異常者183例，占6.36%，其中ASC-US 104例，LSIL 48例，HSIL 21例，SCC10例。但有研究報道，TCT檢查對于ASCUS/AGU與病理診斷符合率低，意味著TCT檢查有可能導致對宮頸早期病變的漏診［7］。本組資料中164例TCT檢查異常者HR-HPV DNA檢測陽性87例，陽性率53.05%，盡管細胞學篩查大幅度降低了宮頸痛的發病率與病死率，但是細胞學檢查單次檢測敏感度低，需重復檢查，因此，許多組織，包括美國癌癥學會(ACS)，美國婦產科醫師學會(ACOG)等權威機構推薦將宮頸癌明確的生物學病因HR-HPV檢測納入宮頸癌篩查方案。HR-HPV DNA檢測法取樣簡單易行，檢測結果客觀準確，特別適合大規模的人群篩查。婦女定期檢查HPV感染，能有效地判斷子宮頸癌的發病風險。HR-HPV DNA檢測陽性，預示發生宮頸癌的風險性增加，或預測在未來2～5年可能發生宮頸癌前病變［8］，因此，HPV檢測已成為宮頸的另一種防癌篩查手段。但是，HR-HPV DNA檢測假陽性率也是普遍存在的一個問題。假陽性率發生的原因可能于以下幾點有關:①操作技術上的錯誤;②生物樣品的收集、儲藏、處理過程中污染;③反應抑制劑的出現，發生了非特異性雜交反應;④臨床質控不到位等。

綜上所述，無論是TCT技術或是高危型HPV檢測，均是臨床常用的宮頸病變檢查方法。通過細胞學檢查可以明確患者是否存在細胞學的改變，高危型HPV檢測采用標準化試劑盒，人為主觀因素影響小，可了解患者是否存在和宮頸癌關系密切的高危型HPV感染，故將TCT檢查與HR-HPV DNA檢查聯合用于宮頸病變的篩查，是防治宮頸癌的有效手段。

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［4］ 吳坤河，賴日權，張佳立，等.宮頸癌液基細胞學篩查與組織學檢查的對比［J］.實用癌癥雜志，2005，20(1):99.

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［6］ 姜敏，于民.高危型人乳頭瘤病毒在宮頸癌篩查中的應用［J］.中國實用醫刊，2011，38(4):93-94.

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［8］ Wright TC Jr，Massad LS，Dunton CJ，et al.2006 consensus guidelines for the management of women with cervical intraepithelial neoplasia or adenocarcinoma in situ［J］.J Low Genit Tract Dis，2007，11(4):223-239.