談學(xué)生綜合實驗改進(jìn)

　　摘 要： 作者采用超聲波法改進(jìn)了絞股藍(lán)中人參皂苷的提取工藝。考察了乙醇濃度、提取時間和料液比對皂苷得率的影響，并通過正交設(shè)計優(yōu)化超聲提取工藝參數(shù)，得出最佳提取工藝為：料液比為1∶15，乙醇濃度75%，提取時間60min，在此條件下皂苷得率可達(dá)到3.5674%。采用超聲波法提取絞股藍(lán)中人參皂苷比傳統(tǒng)的回流提取法更簡便快捷，且得率更高。
　　關(guān)鍵詞： 超聲波法 絞股藍(lán) 人參皂苷 提取工藝
　　
　　絞股藍(lán)又名五葉參、七葉膽等，在我國有“第二人參”之美譽，主要成分為絞股藍(lán)皂苷等，對人體有滋補、鎮(zhèn)靜、降血脂、降血壓等多種作用［１］。藥學(xué)類學(xué)生綜合實驗開設(shè)的“絞股藍(lán)口服液的研究”過程在提取絞股藍(lán)人參皂苷時普遍采用傳統(tǒng)的乙醇回流提取法，既耗時，提取率也不高，且回流提取液的純化處理相對復(fù)雜。超聲波法作為一種提取研究領(lǐng)域的新技術(shù)、新方法［2，3］，提取時間短且效率高。我們采用超聲法對絞股藍(lán)中人參皂苷的提取工藝進(jìn)行改進(jìn)，旨在為絞股藍(lán)相關(guān)綜合實驗更有效地開展提供方法借鑒。
　　1.實驗部分
　　1.1實驗材料和儀器品（南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司），甲醇、香草醛、高氯酸、冰醋酸、乙醇，等等（上海國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。UV-240 IPVC型紫外可見分光光度計（日本島津分析儀器有限公司），數(shù)控超聲波儀（南京電子器械有限公司），RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）。
　　1.2實驗方法和結(jié)果
　　1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備品，甲醇溶解并配成2mg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取系列濃度標(biāo)準(zhǔn)液于試管中，80℃水浴揮干，加入0.2mL5%的芳草醛乙酸溶液和0.8mL70%的高氯酸溶液，60℃水浴反應(yīng)15min，迅速冷卻終止反應(yīng)，加入5mL冰醋酸，渦旋混勻。以隨行試劑為空白于545nm處測定吸光度。以皂苷濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度值Y為縱坐標(biāo)線性回歸，得回歸方程Y=1.6269C-0.0267（r＝0.9998），在0.1—0.6μg·mL-1之間成良好線性關(guān)系。
　　1.2.2超聲提取
　　稱取絞股藍(lán)2.0g，加適量乙醇，于超聲儀中超聲提取，提取液趁熱過濾，蒸干溶劑，加10mL熱水溶解，用20mL水飽和的正丁醇分兩次萃取，取正丁醇層，蒸去正丁醇，用甲醇溶解定容至10mL。精密吸取0.5mL該溶液于試管中，80℃水浴揮干，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”項下方法測吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算人參皂苷含量。
　　1.2.3超聲提取方法優(yōu)化
　　以乙醇濃度，料液比和提取時間進(jìn)行單因素實驗，考察各因素對絞股藍(lán)中人參皂苷提取得率的影響。發(fā)現(xiàn)皂苷得率隨乙醇濃度、料液比和提取時間的提高而增大，但當(dāng)乙醇濃度達(dá)到75%時，進(jìn)一步增加乙醇濃度得率反而下降，而當(dāng)料液比達(dá)到1∶20、提取時間延長到60min后，繼續(xù)強化條件皂苷得率基本保持不變。根據(jù)單因素實驗結(jié)果，選取乙醇濃度（55%、75%、95%）、提取時間（30min、40min、60min）、料液比（1∶10、1∶15、1∶20）設(shè)計三因素三水平的L9（33）正交實驗。試驗結(jié)果見表1。
　　表1 正交實驗結(jié)果與極差分析（х=3）
　　結(jié)果表明，各因素對提取得率影響程度依次為：乙醇濃度＞提取時間＞料液比；乙醇濃度對皂苷得率的影響最顯著；最佳工藝為：75%的乙醇，1∶15料液比，超聲提取60min。
　　在以上最優(yōu)條件下，稱取2.0g絞股藍(lán)3份，進(jìn)行重復(fù)性驗證實驗，得平均皂苷得率為3.5674%。
　　2.討論
　　我們在實驗過程中就提取液的處理進(jìn)行了摸索，由于提取液中成分復(fù)雜，直接紫外測定將嚴(yán)重干擾實驗結(jié)果，因此，必須對提取液進(jìn)行適當(dāng)處理以滿足紫外測定的需要。文獻(xiàn)報道的提取液處理方法很多，其中以正丁醇萃取法最常見，而大孔吸附樹脂純化雖然效果最好，但操作繁瑣。實驗選用正丁醇萃取法并對其進(jìn)行了改進(jìn)，考察了回流提取和超聲提取所得的提取液的萃取工藝，發(fā)現(xiàn)回流提取液呈深綠色，須對其脫色，理想的純化工藝為“正丁醇萃取—乙醚或石油醚脫色—正丁醇再次萃取”；而超聲提取液無色澄清，正丁醇萃取后就能直接檢測，操作更簡便快捷。此外，實驗發(fā)現(xiàn)超聲提取液中人參皂苷得率比回流提取得率更高。
　　采用超聲法提取絞股藍(lán)中人參皂苷具有簡便、省時，提取率高等優(yōu)點，對高校中絞股藍(lán)相關(guān)綜合實驗的開展有一定的借鑒價值。
　　
　　參考文獻(xiàn)：
　　［1］Chang CK，Chang KS，Lin YC，et al.Hairy root cultures of Gynostemma pentaphyllum （Thunb.）makino:a promising approach for the production of gypenosides as an alternative of ginseng saponins［J］.Biotechnology Letters，2005，27，（16）：1165-1169.
　　［2］Vinatoru M.An overview of the ultrasonically assisted extraction of bioactive principles from herbs［C］.Ultrasonics Sonochemistry，2001，8，（3）:303-313.
　　［3］李健，張令文，劉寧.超聲波提取苦瓜總皂苷的研究［J］.化學(xué)世界，2007，48，（2）:104-106.
　　
　　致謝：江蘇大學(xué)高級人才啟動基金（No.09JDG063），江蘇省自然科學(xué)基金（BK2011506）。