普洱茶對胃癌前病變大鼠p53基因表達的影響

摘 要 目的：熒光定量PCR檢測普洱茶對胃癌前病變大鼠p53基因的表達。方法：建立大鼠胃癌前病變模型，給予普洱茶灌胃1個月后，采用熒光定量PCR檢測p53基因的表達情況。結果：普洱茶處理組1個月后，p53 mRNA的表達顯著高于未用普洱茶處理組（t3.256，P0.006）。結論：普洱茶可以穩定抑癌基因p53的表達。由此推測普洱茶通過抑制p53的突變或穩定p53基因來抑制大鼠胃癌前病變向胃癌的轉化。

關鍵詞 胃癌 癌前病變 普洱茶 p53基因

AbstractObjective:to measure the p53 gene expression in gastric precancerous lesions of rats after Pu'er tea treatment by real-time PCR.Methods:We established the gastric precancerous lesions model in rats and treated rats with Pu'er tea for 1 month.In the end，we used real-time PCR to measure the p53 gene expression.Results:treatment with Pu'er tea for 1 month，the p53 gene expression in these rats was significanly higher than this in the rats without Pu'er tea treatment.Conclusion:Pu'er tea can stabilized p53 tumor suppressor gene expression，which indicated that Pu'er tea suppressing p53 gene mutation or stability of p53 to inhibit the transformation of rat gastric precancerous lesions to gastric cancer.

Key WordGastric carcinoma;Precancerosis;Pu'er tea;P53 gene

胃癌是世界上多數國家常見的消化道腫瘤，死亡率高，嚴重威脅著人們的生命和健康。胃癌的高發年齡為50～59歲，其次為40～49歲，男性多于女性。按Lauren分型，胃癌可分為腸型和彌漫型兩大類，前者多見于高發區，以老年人為主，惡性程度較低，術后預后較好；后者在高、低發區基本一致，患病年齡前移，惡性程度較高，預后不良。因此，胃癌的預防成為目前廣大科研工作者研究的熱點。

飲茶是我國人們的傳統習慣。早在神農時，就有飲茶解七十二毒之說。目前研究發現飲茶可以使胃癌發生的危險度降低29%?！惰筇毂R叢錄》（柴萼，著于公元1925年）云：“普洱茶，性溫味香，治百病，蒸制以竹篛成團裹，價等兼金?！逼斩枳鳛閭鹘y飲料，除能止渴生津和提神外，還有特殊的藥用功效?，F代醫學研究發現普洱茶中的茶多酚類物、茶色素、咖啡堿及多酚糖都是生物化學抗癌成分，能起到防癌、抗癌的作用?；诖?，本文通過建立大鼠胃癌前病變模型，探討普洱茶飲對胃癌前病變大鼠抑癌基因p53的表達。

資料與方法

實驗動物：選用健康雄性SD大鼠36只，體重210±20g（由四川大學華西醫學中心實驗動物中心提供）。大鼠常規分籠飼養，進食標準飼料，自由飲水。室溫保持20～22℃，相對濕度45%～50%，光照時間為每天12小時。大鼠按體重分層，參照隨機數字表分為3組，進行為期1個月的實驗研究：對照組（C組，n10）自由飲水進食不受任何干預；模型組（M組，n10）參照陳大權^［1］等人的方法建立大鼠胃癌前病變慢性萎縮性胃炎的模型，不加任何干預；實驗組（E組，n10）參照陳大權^［1］等人的方法建立大鼠胃癌前病變慢性萎縮性胃炎的模型，按每只大鼠每日相當于成人體重給藥量20倍計算進行灌胃。

取材：大鼠斷頭處死后，取胃，沿胃大彎剖開，暴露正高前胃和腺胃，PBS沖洗干凈，均沿腺胃的小彎側取材，取材大小為0.5cm^{3>/sup>，范圍從賁門到幽門部。所取材迅速置液氮中備用。}

檢測方法：染料法熒光定量PCR反應（real-time PCR），采用RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），提取組織總RNA并經紫外檢測含量。所有操作步驟均按試劑盒說明書進行。反轉錄按照TaKaRa PrimeScriptTM RT reagent Kit perfect Real Time試劑盒（TaKaRa Biotech Co，Dalian，China）說明書進行，具體方法同上。各組提取的總RNA用于檢測相關因子的表達，以GAPDH為參照。P53：sense：5'GTACCGTATGAGCCACCTGAG-3'，antisense：5'CGTCCCAGAAGATTCCC-3；GAPDH-actin：sense：5'-ATGTATCCGTTGTGGATCTGAC-3'；antisense：5'-CCTG CTTCACCACCTTCTTG-3'。PCR反應（TaKaRa SYBR Premix Ex TaqTM code：DRR041A）參照試劑盒說明。

統計學方法：實驗數據用mean±SD表示，樣本均數做t檢驗檢測，P＜0.05認為差異有顯著性。數據處理采用SPSS13.0。

結 果

real-time PCR實驗結果：熒光定量PCR的結果：由溶解曲線可以看出，所有檢測目的基因均為單峰，說明產物特異性好，避免非特異產物對結果的影響。見圖1、2。

將各組胃p53 mRNA水平經過GAPDH標準化后進行比較，結果提示，與C組相比，M組在1個月后p53 mRNA的表達顯著下降（t2.636，P0.014）；而E組p53 mRNA的表達略高于C組，但差異無顯著性（t1.781，P0.459）；E組p53 mRNA的表達顯著高于M組（t3.256，P0.006）。p53 mRNA的表達變化，見表1。

討 論

據統計，全世界每年約有90萬人新診斷為胃癌，1990年胃癌發病率僅次于肺癌而居世界第2位，其中以日本、中國、南非、和東歐的發病率較高。在中國，惡性腫瘤死亡居全死因的第2位，其中胃癌所占份額很大。萎縮性胃炎被廣泛地認為是胃癌的先兆，其更進一步的發展和廣泛的腸化生及嚴重的異型增生可導致癌癥的發生^［2］。一項為期6年的隊列研究指出，萎縮性胃炎使胃癌發生的危險增加了2.91倍，并隨萎縮程度的加重而增加。國外萎縮性胃炎的癌變率為8.6%～13.8%，國內為1.2%～7.1%。另有報道，患胃癌風險大的人萎縮性胃炎的發病率也高^［3］。因此本文采用了誘導萎縮性胃炎作為大鼠胃癌前病變的模型。

大多數腫瘤與癌基因的激活和抑癌基因的失活有關。p53基因結構及表達的異常是人類最常見的基因改變之一，約50%的人類腫瘤有P53 基因的改變，且此改變在胃腸道腫瘤中比較常見，成為近年來腫瘤基礎理論及臨床研究的重點。p53基因的缺失和突變不僅可見于早期胃癌，在腸化生及腺瘤中也可檢測到^［4］。p53基因的突變率隨胃黏膜病變程度的加深而增加（分別為胃癌60.1%、異型增生31.3%、腸化生11.8%）^［5］。還有學者認為p53表達變化和胃癌轉移密切相關，可作為胃癌惡性表型的指標。此推論被蔡嶸等人^［6］研究p53基因在胃癌發生機制中的作用中證實。因此本文選用p53基因作為檢測指標。

清人趙學敏《本草綱目拾遣》云：“普洱茶性溫味香，產攸樂、革登……六茶山，以倚邦、蠻磚茶味較盛。味苦性刻，解油膩牛羊毒，虛人禁用?？酀鹛迪職?，刮腸通泄。普洱茶膏黑如漆，醒酒第一，綠色者更佳。消食化痰，清胃生津，功力尤大也?！苯陙?，國內外對普洱茶的生理、藥理功能進行了更加深入的研究，普洱茶的功能也進一步的得到了開發。研究發現，普洱茶可以顯著抑制體外培養人胃癌細胞的增殖；飲茶可以顯著降低胃癌和慢性胃炎危險度達54%^［7］。本實驗研究發現，普洱茶通過維持p53基因的穩定性，抑制p53基因的突變來抑制胃癌前病變大鼠向胃癌演變。其機理可能為，普洱茶中富含的茶多酚類物、茶色素、咖啡堿及多酚糖等生物化學抗癌成分，通過抑制致原癌基因表達和維持抑癌基因的穩定性，抑制其突變來降低癌癥發生率。所以喝普洱茶可以幫助人們防癌、抗癌，非常有益于人體健康。

參考文獻

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圖1 GAPDH溶解曲線

圖2 p53溶解曲線

表1 各組大鼠體重及p53 mRNA表達比較

注：*（P＜0.05），**（P＜0.01）。